槐米药材薄层色谱鉴别研究

黔东南民族职业技术学院，贵州 凯里 556000

芦丁(Rutin)又名芸香苷，是一种分布广泛的黄酮类化合物，具有维生素P样生理活性[1]，主要存在于槐米、荞麦、小蓟、银杏叶、鬼针草等植物中[2-6]。槐米为豆科植物槐SophoraJaponicaL.的干燥花及花蕾，主要分布在河南、山东、陕西、湖南、贵州、四川等地[7]。槐米中含有丰富的芦丁成分，其含量可达12%～20%[2]，据研究发现芦丁具有凉血止血、清肝泻火等功效，且具有抗癌防癌、抗血小板聚集、镇痛、抗菌、抗病毒、抗衰老、抗炎、抗过敏、抗自由基及抗氧化等多种活性[8-10]。临床将芦丁用于预防和治疗糖尿病及合并高脂血症[11]。此外，芦丁作为食品中的抗氧剂和天然食用色素。《中华人民共和国药典》2015版[8]收载槐米中芦丁的薄层色谱鉴别采用的展开剂是乙酸乙酯-甲酸-水(8∶1∶1)，研究拟对芦丁薄层色谱鉴别的展开系统进行改进，选用其他展开剂代替药典方法，为生产上芦丁的鉴别提供更多的选择。通过实验，已筛选出了一种展开剂，使得供试品中所鉴别的成分斑点清晰，分离度好，重复性好，可以代替原标准用于芦丁的鉴别。现将实验报道如下。

1 仪器与材料

1.1 仪器 ZF-I型三用紫外分析仪(上海光豪分析仪器公司)；点样毛细管(上海申立玻璃仪器公司)；层析缸。

1.2 材料 硅胶G(青岛海洋化工有限公司)；薄层板(自制)。甲醇、乙酸乙酯、甲酸、丙酮等均为分析纯。芦丁对照品(批号：201509，贵州省迪大科技有限公司)，三氯化铝显色剂。槐米药材购于黔东南州药材公司(批号：20160201)。

2 方法

2.1 薄层板的制备 取羧甲基纤维素钠0.2～0.5 g，溶于100 mL水中，搅拌，微热使其完全溶解，再加入薄层层析硅胶G适量，沿同一方向研磨成均匀的稀糊，然后均匀地涂在预先准备好的洁净的玻璃板上，晾干。使用前110℃活化30 min，置于干燥器内备用。

2.2 供试品溶液的制备 取槐米粉碎，过筛，准确称取20 g，加0.4%的硼砂水溶液200 mL，搅拌均匀，用石灰水调pH8～9，煮沸30 min ，保持水分和pH不变，提取两次，合并滤液，用盐酸调pH2～3，抽滤，精制，烘干，得芦丁精品。称取芦丁粉末0.2 g，加甲醇5 mL，密塞，振摇10 min，滤过，取滤液作为供试品溶液。

2.3 对照品溶液制备 取芦丁对照品适量，加甲醇制成2 mg/mL的溶液，作为对照品溶液，备用。

2.4 薄层层析方法

2.4.1 改进方法 照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》2015版通则0502)试验，分别吸取上述供试品溶液和对照品溶液各5μL ，点于同一硅胶 G薄层板上，采用预实验筛选出的四种展开剂：A.乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(5∶2∶0.5∶0.5)，B.乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1 )，C.乙酸乙酯-丙酮-水(5∶3∶1)，D.乙酸乙酯-甲醇-水(4∶1∶1)分别展开，取出，晾干。喷以三氯化铝试液显色，待晾干后，置紫外灯(365 nm)下检视芦丁，供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，结果见图1。

2.4.2 药典方法 照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》2015版通则0502)试验，吸取上述供试品溶液和对照品溶液各10μL ，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水(8∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，待乙醇挥干后，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，见图2。

表1 不同展开剂的薄层展开效果

展开剂斑点清晰度展开时间/min药典标准圆整,清晰20A圆整,清晰25B有少许拖尾现象,清晰40C拖尾严重,模糊58D拖尾,清晰60

3 讨论

芦丁在四种展开剂中薄层鉴别见图1，与药典方法展开效果的比较见表1。由图1、图2和表1可知，选用的四种展开系统中，芦丁在展开剂A中展开的效果最好，斑点圆整且清晰，展开时间是最少的，为25 min，药典标准是20 min，展开剂B乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1 )斑点清晰但有少许拖尾现象，展开剂C 乙酸乙酯-丙酮-水(5∶3∶1)拖尾严重，斑点模糊。

在展开剂 D 乙酸乙酯-甲醇-水(4∶1∶1)中展开时间太长。综上，实验筛选出的理想展开系统为乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(5∶2∶0.5∶0.5)。实验同时对展开环境的温度和相对湿度进行了考察，结果温度在20～25℃，相对湿度在25%～65%，供试品色谱中主要斑点的分离度较好。对改进后的方法进行了稳定性和重复性实验，稳定性实验表明，样品在6 h内进行薄层鉴别，供试品色谱中主要斑点的分离度较好，重复性实验表明，改进后的方法重复性良好。实验采用三氯化铝的乙醇溶液作为显色剂。中药分析中，三氯化铝是广泛应用于黄酮类成分定性、定量分析的显色剂，能与芦丁成分显色并产生荧光。可用于本研究中槐米芦丁的薄层层析鉴别。

研究对展开剂的种类及配比进行了大量摸索。尝试乙酸乙酯-甲醇-水(10∶2∶3)、甲醇-水、丙酮-水作为展开剂，结果显示展开结果无显著差异，而且展开速度很慢，其中乙酸乙酯-甲醇-水(10∶2∶3)有分层现象。最终选用乙酸乙酯-甲醇—甲酸-水为展开剂，比例5∶2∶0.5∶0.5为佳，分离效果好，斑点Rf值适宜。与药典原标准相比较，实验筛选出的展开剂系统中乙酸乙酯、甲酸的用量都减少，不仅不会影响槐米中芦丁的鉴别，还节约了成本，同时减少有机溶剂对环境的污染，有着更广泛的应用意义，可替代原标准用于槐米芦丁的薄层鉴别。

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