针刺捻转补泻手法对自发性高血压大鼠顶叶皮质NO、5HT的影响*

战 河 王 赫 杨芳媛 郭秋蕾 洪性勋 袁静云 王紫娟 刘清国

（北京中医药大学，北京 100029）

近年来，高血压已成为危害人们健康的首要因素之一，其发病机制非常复杂，可造成心、脑、肾损害并可诱发脑血管意外等危急重症。针刺治疗高血压在临床的应用日益增多，准确运用补泻手法是临床取效的重要环节，捻转补泻可通过不同途径对机体产生调节作用。研究表明，针刺原发性高血压病患者太冲穴激活的主要脑区包括左侧顶叶［1］，王葳等研究针刺太冲穴的脑功能成像，发现针刺期与针刺后效应期激活的脑区包含顶上小叶与顶下小叶［2］。反过来，高血压亦会对顶叶皮质造成损害，Michael L.Alosco等人的研究表明高血压可致脑灌注减少、包括顶叶在内的脑皮质厚度减少［3］。临床报道显示高血压诱发的脑出血顶叶出血数量亦不稀少。综上，在针刺调控血压的中枢整合机制中，顶叶为重要一环，其中神经递质的差异表达具有重要影响；高血压亦可使顶叶皮质受累，造成损害。以往对调控血压的研究少有涉及脑皮质层面，故此次欲初步探索，运用微板法与酶联免疫吸附试验，观察捻转补泻手法对自发性高血压大鼠（SHR）顶叶皮质一氧化氮（NO）、5-羟色胺（5-HT）的影响及其血压值变化，探讨针刺调控血压的中枢机制中，活跃脑区顶叶重要神经递质NO、5-HT的含量变化与血压变化的相关性，同时研究针刺调控血压的效果，为高血压的防治提供借鉴与思路。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SHR 40只，WKY（Wistar-Kyoto）大鼠10只，雄性，9周龄，体质量（210±15） g。 WKY 大鼠 10只作为空白组对照。均购自北京维通利华实验动物养殖中心，许可证号：SCXK（京）2012-0001。50只大鼠均饲养于北京中医药大学针灸推拿学院动物房，SPF级。每日自由进食及饮水，喂养饲料由北京维通利华实验动物中心提供。实验过程中对动物的处置符合2006年科技部发布的 《关于善待实验动物的指导性意见》［4］。所有实验操作经北京中医药大学动物保护与使用委员会批准（批准号：BUCM-3-2016090301-3003）。

1.2 实验仪器 毫针：中研太和牌一次性30号0.5寸毫针，北京中研太和医药有限公司提供；动物无创血压测试仪 （BP-6），成都泰盟生物仪器有限公司提供；ELISA定量检测试剂盒，慧佳生物科技有限公司提供；NO试剂盒（微板法），南京建成生物有限公司提供；可见光分光光度计，上海菁华科技有限公司提供。

1.3 造模与分组 造模：以收缩压持续在150~175 mmHg的雄性Wistar京都种大鼠与收缩压为130~140 mmHg的雌性Wistar京都种大鼠交配，得到收缩压都大于150 mmHg的子代，再选用血压较高的大鼠进行近亲交配，依次进行这种选择性近亲交配20代而获得稳定的高血压遗传性，从而建立了SHR品种。本实验SHR按照随机数字表法随机分为模型组、针刺组、捻转补法组、捻转泻法组各10只。

1.4 干预方法 取穴：针刺各组均取 “太冲穴”（双侧），取穴参照《实验针灸学》［5］：于后肢足背 1、2 趾骨间凹陷处取“太冲穴”。干预方法：实验动物适应性饲养1周后开始治疗，采用中研太和牌一次性30号0.5寸毫针直刺1~2 mm。针刺时让大鼠完全钻入鼠套内固定，从鼠套设计好的孔洞中露出下肢，以便于针刺操作。空白组：每日进行与针刺治疗组相同的抓捉固定刺激，不施以针刺。模型组：每日进行与针刺治疗组相同的抓捉固定刺激，不施以针刺。针刺组：针刺双侧太冲穴，留针20min，期间不进行任何处理。捻转补法组：针刺双侧太冲穴，以右手为刺手，大拇指作用力向前用力捻转，然后轻力退回，每次捻转幅度360°，60次/min，持续捻转3 min，共留针17 min。捻转泻法组：针刺双侧太冲穴，以右手为刺手，大拇指作用力向后用力捻转，然后轻力向前退回，每次捻转幅度360°，60次/min，持续捻转3 min，共留针17 min。各组共治疗28 d，每隔6 d休息1 d，每日下午治疗1次。所有针刺操作均由同一人实施。

1.5 标本采集与检测 1）测量血压。在室温（22±2）℃条件下，将清醒状态下的大鼠于36℃下预热（用温控器调节温度恒定）约15 min，用无创血压仪测量大鼠安静、清醒状态下的尾压，连续测量3次，取其均值，避免噪音等外界环境刺激对血压的影响。于开始针刺前1 d测量血压1次，针刺治疗开始后，于针刺的第3、8、13、18、23、27日测量血压值。正式测血压前训练若干次，每日测血压训练1次，连续3 d。2）NO、5-HT的测定。动物麻醉状态下，铡刀断头，剥离取出其顶叶皮质，4℃0.9%氯化钠溶液冲洗，滤纸吸干，迅速放入储存管中，移入-80℃冰箱待检，采用ELISA法测定其中5-HT的含量，运用微板法测定NO的含量，其计算公式为：组织中 NO含量=（测定 OD-对照 OD）/（标准OD-空白OD值）×标准品浓度/测定样本蛋白浓度。

1.6 统计学处理 应用SPSS22.0统计软件。计量资料以（±s）表示，组间差异如方差齐则采用单因素方差分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组大鼠针刺治疗前后收缩压比较 见表1。治疗前空白组与其余各组大鼠收缩压比较具有显著差异（P＜0．05）；针刺第 3日，捻转泻法组与模型组之间收缩压的差异有统计学意义（P＜0．05）；针刺第 8日，捻转补法组、捻转泻法组与模型组、针刺组比较差异均有统计学意义（P＜0．05）；针刺组与模型组比较有明显差异（P＜0．05）；针刺第13日开始，各组大鼠收缩压之间均有显著差异（P＜0．05），捻转泻法组大鼠收缩压明显降低，捻转补法组次之，亦有所降低。在组内比较中，空白组从针刺第8日起与针刺前1 d比较有显著差异（P＜0．05）；模型组从针刺第8日起与针刺前1 d比较有显著差异（P＜0．05）；针刺组从针刺第 18天起与针刺前1 d比较有显著差异（P＜0．05）；捻转补法组从针刺第8日起与针刺前1 d比较有显著差异 （P＜0．05）；捻转泻法组从针刺第8日起与针刺前1 d比较有显著差异（P＜0．05）。

2.2 各组大鼠顶叶皮质5-HT、NO含量比较 见表2。5-HT含量模型组与空白组比较有明显差异 （P＜0．05）；捻转补法组与其余各组比较均有明显差异（P＜0．05）；捻转泻法组与捻转补法组、模型组、针刺组比较有显著差异 （P＜0．05），捻转泻法组大鼠顶叶皮质5-HT含量明显升高。NO含量模型组与空白组比较有显著差异（P ＜ 0．05）；与模型组、针刺组、捻转补法组比较，捻转泻法组大鼠顶叶皮质NO含量明显升高（P＜0．05）。

表1 各组大鼠针刺治疗前后收缩压比较（mmHg，±s）

表1 各组大鼠针刺治疗前后收缩压比较（mmHg，±s）

与本组针刺前 1 d 比较，▼P＜0．05；与空白组比较，*P＜0．05；与模型组比较，◆P＜0．05；与针刺组比较，○P＜0．05；与捻转补法组比较，□P＜0．05；与捻转泻法组比较，△P＜0．05。 下同。

组 别 n 针刺前1 d 针刺第3日 针刺第8日 针刺第1 3日 针刺第1 8日 针刺第2 3日 针刺第2 7日空白组 1 0 1 0 9.6 3±3.0 1 1 1 2.3 4±2.7 1 1 1 4.9 6±2.1 8△□▼ 1 1 7.2 5±1.5 0△□◆○▼ 1 1 9.5 3±1.2 0△□◆○▼ 1 2 1.1 0±1.2 2△□◆○▼ 1 2 2.9 9±1.3 6△□◆○▼模型组 1 0 1 6 5.9 4±3.9 3*1 6 9.1 1±3.0 2*△ 1 7 1.9 4±2.2 0*△□▼ 1 7 3.7 4±2.2 5*△□○▼ 1 7 5.7 4±2.3 4*△□○▼ 1 7 7.5 8±2.5 5*△□○▼ 1 7 9.3 9±2.4 6*△□○▼针刺组 1 0 1 6 5.0 4±4.4 2*1 6 6.2 6±3.5 4* 1 6 7.8 9±3.1 9*△□ 1 6 8.6 3±3.2 0*△□◆ 1 6 9.5 0±3.0 3*△□◆▼ 1 7 0.3 4±2.6 8*△□◆▼ 1 7 1.0 8±2.4 5*△□◆▼捻转补法组 1 0 1 6 6.7 9±1.4 2*1 6 5.8 2±1.9 5* 1 6 4.8 8±1.6 0*▼ 1 6 3.4 7±1.5 0*△◆○▼ 1 6 2.3 9±1.5 8*△◆○▼ 1 6 0.7 8±1.8 0*△◆○▼ 1 5 8.8 4±1.6 6*△◆○▼捻转泻法组 1 0 1 6 7.4 4±3.0 6*1 6 5.2 9±3.0 5* 1 6 2.3 1±2.8 5*▼ 1 5 9.7 9±2.6 2*□◆○▼ 1 5 7.4 2±3.0 8*□◆○▼ 1 5 5.8 8±3.2 3*□◆○▼ 1 5 3.3 3±3.0 5*□◆○▼

表2 各组大鼠顶叶皮质5-HT、NO含量比较（±s）

表2 各组大鼠顶叶皮质5-HT、NO含量比较（±s）

组 别 n 5-H T（n g/m L） N O（n m o l/m g）空白组 1 0 9.0 6±1.6 2□ 1 0.1 1±2.0 2模型组 1 0 4.8 6±1.2 8*△□ 6.5 2±1.9 3*△针刺组 1 0 5.1 1±1.2 1*△□ 7.5 3±1.3 7*△捻转补法组 1 0 6.4 2±1.0 2*△ 7.9 7±1.5 3*△捻转泻法组 1 0 8.0 5±1.3 5□ 9.6 2±1.2 6

3 讨 论

太冲穴是治疗高血压病的要穴。笔者前期研究发现［6］对患者双侧太冲穴施针刺捻转泻法有良好的降压效果，良性刺激作用于躯体感觉神经末梢及交感神经末梢，良性信息作用于大脑皮质，激发高级神经中枢的整合［7］。本实验采用SHR作为模型组。SHR出生后血压随鼠龄不断升高，为最适合进行高血压研究的成熟模型。WKY大鼠是用Wistar大鼠培育而成，为SHR的正常血压对照品系，本实验用之作为空白组的实验动物，观察其与各组SHR之间血压的差异。

空白组大鼠从第8日起血压较针刺前1 d逐渐升高，因每天对其进行与其他组大鼠相同的抓捉固定刺激会引起应激反应，久之造成空白组大鼠应激性血压升高。模型组从第8日起血压较针刺前1 d逐渐升高，因SHR随周龄增加而血压升高，且抓捉刺激亦对其血压升高有影响。针刺组从针刺第18日起血压与针刺前1 d比较有显著差异，开始有明显升高的时间晚于模型组10 d，可见针刺延缓了针刺组大鼠血压升高进程。捻转补法组与泻法组大鼠血压均从针刺第8天起开始逐渐降低，说明捻转补法与泻法可有效降低SHR血压，捻转手法的降压效果明显优于单纯针刺。捻转泻法组与补法组相比，血压下降更快，降压幅度更大，从针刺第13日起即差异显著，降压效果最好。

5-HT对人体生理功能具有重要调节作用［8］。在1954年Page就提出5-HT与高血压的发生、发展有关。5-HT有复杂的心血管效应，可通过激活中枢5-HT1A受体、降低交感神经兴奋性、提高迷走神经兴奋性而降低血压和心率［9］。有研究表明给大鼠ICV注射5,6-双羟色胺可建立中枢5-HT缺损的实验性高血压大鼠模型，该模型的形成与中枢5-HT含量减少密切相关，提高内、外源性5-HT含量能降低EHR的平均动脉压，且其降压作用主要是通过5-HT1A受体介导的［10］。当血压发生变化时，中枢5-HT1A受体结合容量发生继发性改变。不同脑区中枢5-HT1A受体结合容量可能与高血压的发生相关［9］。

本实验结果显示大鼠顶叶皮质5-HT含量模型组较空白组明显降低，表明SHR的血压升高可能与顶叶皮质5-HT含量的降低有关。捻转泻法组大鼠顶叶皮质5-HT含量较模型组与各治疗组明显升高。

NO对脑血管张力、血压及脑血流的调节起重要作用［11-12］。中枢 NO 和一氧化氮合成酶（NOS）异常与许多疾病的发生有关［13］。NOS是生成NO的关键酶，所以NOS的分布对NO的产生部位与生物学效应至关重要［14］。大脑皮质内的NOS神经元及其阳性终末参与皮质微循环的调节，NOS阳性神经元在皮质各层散在分布，额、顶叶约半数的NOS神经元直接与皮质血管构成接触，额、顶叶的终末数量明显多于枕、颞叶［15］。NO能够降低全身平均动脉血压，控制全身各种血管床的静息张力，增加局部血流，是血压的主要调节因子［16］。中枢神经系统内NOS的抑制或NO合成的减少，则可能诱发血压升高以及神经细胞的破坏。

实验结果显示，大鼠顶叶皮质NO含量模型组较空白组显著降低，表明SHR的血压升高可能与顶叶皮质NO含量的降低有关。捻转泻法组大鼠顶叶皮质NO含量较模型组与各治疗组明显升高。

综上所述，在高血压发病的复杂中枢机制中，在脑皮质层面，顶叶皮质中5-HT与NO含量的降低可能是原因之一，对SHR大鼠“太冲穴”进行针刺捻转泻法可以使顶叶皮质中降低的5-HT、NO含量显著升高，有效降低血压水平，即在脑皮质层面顶叶区域，针刺降压效应可能是通过使其中的重要神经递质NO、5-HT含量重新升高介导的，这可能是针刺调控血压的中枢机制之一，捻转泻法对这两种神经递质含量的上调幅度最大，降压效果最佳。针刺治疗高血压的中枢机制十分复杂，中枢不同层面、不同神经递质的差异表达、信号转导通路等仍有待进一步研究。

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