解毒扶正颗粒对内毒素致急性肺损伤小鼠的保护作用*

普勇斌 刘晓敏 陶相宜 崔向朋 李海滨 柳 蹊 徐 瑞 唐 彬

（云南省中医医院，云南 昆明 650021）

急性肺损伤（ALI）是在严重感染、休克、创伤及烧伤等非心源性疾病［1］过程中等各种肺内、肺外致病因素导致的急性弥漫性炎症性肺损伤，进而引起急性呼吸衰竭，以肺血管通透性增高、肺泡腔渗出富含蛋白质的液体、肺水肿及透明膜的形成为主要病理特征，临床上表现为进行性低氧血症和呼吸窘迫，肺部影像学上表现为非均一性的渗出性病变［2］。ALI是多系统器官功能不全（MODS）的一个组成部分，也是非常重要的的一个始动环节，且病情凶险，预后恶劣。解毒扶正颗粒是云南省中医医院据赵淳教授验方制成的院内制剂，临床运用于肺系疾病治疗［3-4］，取得较好疗效。本研究观察解毒扶正颗粒对ALI小鼠的影响。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SPF级健康雌性Wistar小鼠，体质量22～24 g。由重庆腾鑫生物技术有限公司提供，许可证号：SCXK（川）2015.030，饲养于云南省中医医院实验中心SPF级实验室。适应性喂养1周后开始实验。

1.2 试药与仪器 1）试验药物：清热解毒扶正颗粒为国家级名老中医赵淳教授经验方（大黄、翼首草、菲牛蛭、葶苈子、黄芪等），药材均由云南省中医医院中药房提供，按原方比例水煎后浓缩成含生药3 g/mL，放置在4℃冰箱保存备用。动物给药前以蒸馏水倍比稀释成含生药3、1.5、0.75 g/mL 3个不同剂量。2）阳性组药物：地塞米松（DEX）（浙江仙琚制药股份有限公司）。3）试剂：内毒素（LPS）（批号：055：B5，美国 Sigma 公司）。4）仪器：血气分析仪由美国雅培公司提供，型号ISTAT 300-G。

1.3 造模与分组 采用一次性腹腔注射LPS（5 mg/kg）复制ALI模型，模型满足ALI组织病理特点。按随机数字表法将70只小鼠分为6组，即：空白对照组、模型组、阳性药物组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组，分别称体质量并记录。

1.4 研究方法 各组小鼠行适应性喂养1周，各组别小鼠按照以下方法进行处理。空白对照组：正常饮食及饮水，第11天同其他组别一同处死。模型组：正常饮食及饮水，第11天行LPS腹腔注射造模，6 h后处死。阳性药物组：平时正常饮食及饮水，每日予地塞米松腹腔灌注每日1次，连续腹腔灌注10 d，第11天行LPS腹腔注射造模，6 h后处死。中药低剂量组：平时正常饮食及饮水，每日予解毒扶正颗粒低剂量溶液腹腔灌注每日1次，连续腹腔灌注10 d，第11天行LPS腹腔注射造模，6 h后处死。中药中剂量组：平时正常饮食及饮水，每日予解毒扶正颗粒中剂量溶液腹腔灌注每日1次，连续腹腔灌注10 d，第11天行LPS腹腔注射造模，6 h后处死。中药高剂量组：平时正常饮食及饮水，每日予解毒扶正颗粒高剂量溶液腹腔灌注每日1次，连续腹腔灌注10 d，第11天行LPS腹腔注射造模，6 h后处死。

1.5 标本采集与检测 1）动脉血采集。相应的时间点麻醉，在隔绝空气条件下采集动脉血2 mL，肝素抗凝，测动脉血氧分压（PaO2）。2）肺组织病理学检测。将小鼠解剖，取小鼠右上肺叶，置于体积分数10%甲醛中固定，石蜡包埋制作5 μm切片，HE染色后显微镜观察并照相。由云南省中医医院病理医师读片。3）动脉血气分析。相应的时间点麻醉，在隔绝空气条件下采集动脉血2 mL，肝素抗凝，测动脉血PaO2。3）肺水含量计算。肺标本脱水前后湿质量与干质量比值（W/D）表示肺组织含水量，开胸取肺，肺水含量测定各组于相应的时间点麻醉处死动物，开胸取出右上肺，称湿质量后，置烤箱（80℃，48 h）烤至衡重，称干质量，计算湿/干质量比。

1.6 统计学处理 应用SPSS18.0统计软件。计量资料以（±s）表示，对计量资料进行t检验和方差分析，计数资料进行χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组大鼠肺W/D、动脉血PaO2水平比较 见表1。模型组W/D与空白对照组比较显著升高（P＜0.01），与模型组比较，解毒扶正颗粒高剂量组、中剂量组、低剂量组肺湿/干质量差异具有统计学意义（P＜0.05），其中中剂量组下降最明显（P＜0.01）。所有实验大鼠的吸氧浓度均为21%，故以动脉血氧分压PaO2代替氧合指数进行比较，LPS可以诱导大鼠PaO2显著降低 （P＜0.01），PaO2在模型组较对照组显著降低（P＜0.01），解毒扶正颗粒各剂量组、阳性药物组则较模型组显著增加（P＜0.01）。

表1 各组大鼠肺W/D、动脉血PaO2水平比较（±s）

表1 各组大鼠肺W/D、动脉血PaO2水平比较（±s）

与空白对照组比较，*P＜0.01；与阳性药物组比较，△P＜0.01；与模型组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。

组 别 n W/D P a O 2（m m H g）空白对照组 6 3.9 5±0.5 1 9 5.5±8.7模型组 6 4.2 4±0.4 9* 6 0.7±1 1.0*阳性药物组 6 4.0 9±0.4 8 8 9.0±1 0.5▲▲解毒扶正颗粒高剂量组 6 4.2 2±0.3 6△▲ 8 5.5±1 3.8△▲▲解毒扶正颗粒中剂量组 6 4.1 4±0.4 7△▲▲ 8 7.0±1 6.9△▲▲解毒扶正颗粒低剂量组 6 4.2 4±0.3 9△▲ 7 4.3±1 7.4△▲▲

2.2 各组小鼠肺病理组织观察结果 见图1，图2。光镜观察：对照组肺泡结构完整、清晰，肺泡间隔无水肿。模型组：毛细血管内红细胞较多，充满管腔，肺泡腔纤维蛋白渗出较多，肺泡腔及间隔小灶状中性粒细胞渗出，肺泡间隔增宽。空白对照组：毛细血管可见少数红细胞，纤维蛋白渗出充满肺泡腔，肺泡腔及间隔小灶状中性粒细胞渗出，肺泡间隔增宽。阳性药物组：毛细血管可见少数红细胞，纤维蛋白渗出充满肺泡腔，肺泡腔及间隔小灶状中性粒细胞渗出，肺泡间隔增宽。解毒扶正颗粒高剂量组：毛细血管可见少数红细胞，肺泡腔少许纤维蛋白，肺泡腔及间隔小灶状中性粒细胞渗出，肺泡间隔增宽。解毒扶正颗粒中剂量组：毛细血管可见少数红细胞，肺泡腔少许纤维蛋白，肺泡腔及间隔小灶状中性粒细胞渗出，肺泡间隔增宽。解毒扶正颗粒低剂量组：毛细血管可见少数红细胞，肺泡腔少许纤维蛋白，肺泡腔及间隔小灶状中性粒细胞渗出，肺泡间隔增宽。

3 讨 论

目前ARDS/ALI是临床危重症治疗的难点，脓毒症及感染性休克时肺损伤最早出现，也常常是导致患者死亡的原因。感染的细菌多以革兰阴性菌为主，细胞壁的主要成分为LPS，LPS的大量和持续释放是导致ALI发生发展的重要因素。

图1 各组大鼠右上肺叶病理形态比较（HE染色，10倍）

图2 各组大鼠右上肺叶病理形态比较（HE染色，20倍）

ALI属中医“喘证”“结胸”“喘脱”“暴喘”等病的范畴。病位在肺，与心、肾、大肠相关。赵淳教授认为ALI在发病早期的中医病机主要是肺失宣降、气机逆乱、毒邪壅滞。其中的毒邪包括热、毒、痰、瘀等。患者热、毒、痰、喘、瘀、闭的表现突出，宜运用清热解毒、宣肺平喘、豁痰开窍、攻里通下等治法。赵淳教授指出，与此同时正邪相争，导致正气耗伤，表现为正气虚衰，在肺即为肺气虚。此时邪毒壅滞，呈现正虚邪实之征。出现脏腑虚损，阴阳逆乱，此即为急性虚症［5］。天津市第一中心医院急救医学研究所王金达等［6-7］在20世纪80年代就提出了全身炎症反应综合征导致脓毒症的急性虚证的概念。不论外伤、邪毒、六淫、疠气等原因导致的阴阳、气血、脏腑功能迅速虚衰的证候，表现为“邪实未去，正气已虚”，具有发病急、病情重、存活率低等特点，它的发生与机体免疫状态高度相关。正盛邪退则病愈，正虚邪盛则病进［8］。故救治ALI应采取清热解毒与控制感染、扶正祛邪与增强机体免疫力，活血化瘀与改善微循环等治则。赵淳教授经验方清热解毒扶正颗粒具有益气通络、扶正固本、清热解毒功效。赵淳教授认为，血为气母，气为血帅；气行则血行，气虚、气滞则血瘀，血瘀则水停；肺朝百脉，主气而司呼吸，主宣发肃降，通调水道，并与大肠相表里。ALI，肺之脏真受损，肺气虚弱，血脉瘀滞，水壅于肺，失其宣降之职，故发暴喘。治疗上，当以益气活血，泻肺平喘为法，或“肺实泻大肠”，即用通腑泻肺之法，在此法指导下，赵老创制解毒扶正汤一方，易方为颗粒，即解毒扶正颗粒，由大黄、翼首草、菲牛蛭、葶苈子、黄芪共奏，达益气、活血、行水、泻肺、平喘之效。该方中，菲牛蛭俗称金边蚂蟥，其抗凝血作用、抗血栓作用优于其他水蛭［9］。黄芪甘，微温。归肺、脾经［10］，其有效成分皂苷类、黄酮类、多糖类、氨基酸、微量元素等，可以增强免疫功能［11］；抗自由基、调节代谢、保护线粒体［12］；对多种细菌有抑制作用［13］，组成该方中的大黄研究发现，大黄在抗炎方面，具有多靶点作用，对内毒素性肺损伤有其独特优势，大黄素是中药大黄主要有效成分之一，现代研究证明，大黄素具有抑菌抗炎、抗病毒、抗氧化、免疫调节、保肝利胆、护肾利尿、改善微循环、松弛血管、促进胃肠蠕动等作用［14-15］。葶苈子中的苄基芥子油具有广谱抗菌作用，对酵母菌等20种真菌及数十种其他菌株均有抗菌作用［16］，有研究认为葶苈子有改善ALI的效果，与其改善水通道蛋白5含量或者活性有关［17］。在临床实践中，该方可改善ALI患者的症状，减轻肺水肿、改善肺循环，提高肺的顺应性，从而改善肺通气，提高氧合指数，对提高ALI患者的预后有积极作用。

本次研究中，模型组动物肺组织切片光镜下提示毛细血管内红细胞较多，充满管腔，肺泡腔纤维蛋白渗出较多，肺泡腔及间隔小灶状中性粒细胞渗出，肺泡间隔增宽，提示复制ALI模型成功。

通过本实验发现解毒扶正颗粒能显著抑制LPS引起的ALI，表现在解毒扶正颗粒可引起模型小鼠肺组织湿质量/干质量比的提高，同时高剂量组、中剂量组、低剂量组动物血PaO2较模型组明显提高；病理结果也提示，解毒扶正颗粒不同剂量组动物，其肺病理切片能减少炎症细胞的肺内积聚，减少肺泡萎陷及肺毛细血管渗出。根据本实验结果，可以证实解毒扶正颗粒对肺损伤有保护作用，为进一步研究提供了实验依据。

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