材料和方法的规范化写作范例

2018-03-17 15:43:00
实用医药杂志 2018年6期
关键词:匀浆脱氢酶骨骼肌

摘自《中国临床营养杂志》2008年6期的“红景天苷对不同状态下小鼠能量代谢的影响”一文。

动物、试剂和仪器 昆明种雄性小白鼠32只,体重(18±3) g,由第二军医大学实验动物中心提供。SDS(SDS 的英文名为salidroside,中文名为红景天苷。——笔者注)由华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室提供,高效液相色谱(high performance liquid chromatogram,HPLC)检测纯度在95%以上;苹果酸脱氢酶(malate dehydrogenase,MDH)试剂盒、琥珀酸脱氢酶 (succinate dehydrogenase,SDH)试剂盒、丙酮酸激酶(pyruvate phosphokinase,PK)试剂盒、乳酸脱氢酶(1actate dehydrogenase,LDH)试剂盒、乳酸(lactic acid,LD)检测试剂盒均购自南京建成生物制品研究所;Bradford蛋白质定量试剂盒购自北京天根公司。UV754分光光度计购自上海第三分析仪器厂,DK-8D型电热恒温水槽购自上海森信实验仪器有限公司,高速台式离心机购自上海医用分析仪器厂。

动物分组和标本采集 将32只小鼠适应性喂养1周后随机分为对照组、SDS组、运动组及SDS+运动组4组,每组8只,组间体重无差异。将900 mg SDS溶于100 ml蒸馏水中配制成无色透明的SDS溶液,SDS组及SDS+运动组以180 mg/kg·d的SDS灌胃给药;对照组及运动组以同样体积20 ml/kg·d蒸馏水灌胃,连续给药15 d。15 d后,末次灌胃30 min后,对照组及SDS组不做任何运动,摘眼球取血后,脱臼处死取材:运动组及SDS+运动组进行无负重游泳,120 min后将小鼠捞出擦干,摘眼球放血后脱臼处死。迅速取小鼠肝及腓肠肌,液氮冻存,待测。

骨骼肌组织匀浆MDH、SDH、PK及LD检测 取骨骼肌组织,用生理盐水洗去残留血液,滤纸拭干,准确称取组织重量,加9倍生理盐水制成10%组织匀浆,2500 r/min离心10 min,取上清加生理盐水稀释成0.5%匀浆。采用考马斯亮蓝法进行骨骼肌蛋白定量,并按照试剂盒说明书检测骨骼肌组织匀浆中MDH、SDH、PK及LD水平。

肝组织匀浆LDH检测 取肝组织,用生理盐水洗去残留血液,滤纸拭干,准确称取组织重量,加9倍生理盐水制成lO%组织匀浆待测。采用考马斯亮蓝法进行肝脏蛋白定量,按照试剂盒说明书检测肝组织匀浆中LDH水平。

统计学处理 采用SPSS 10.0统计软件,组间差异比较采用方差分析,P<0.05为差异有显著性。

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