CTSA+B天然澄清剂用于神经痛口服液澄清工艺的研究

胡玉英，梁佳驹，刘丰豪，李明杰*，尚荣国

(1. 三二〇一医院，陕西 汉中 723000；2.西安交通大学，陕西 西安 710061)

神经痛口服液为我院临床使用的治疗神经性疼痛的院内制剂，由白芍、柴胡、当归、川芎、蔓荆子、全蝎等中药组成。具有活血化瘀、祛风通络、镇痛止痛之功效，用于三叉神经痛、偏头痛、舌咽神经痛、坐骨神经痛等症状，疗效显著，未见明显不良反应事件。本制剂原采用传统水提醇沉法制备，产品储存过程中易产生沉淀，澄明度难以保证。因此为了解决产品稳定性，笔者采用单因素试验法，以处方中君药白芍的活性成分芍药苷的含量和除杂率为评价指标，优选CTSA+B天然澄清剂用于神经痛口服液澄清工艺。CTSA+B天然澄清剂是一种新型的食品添加剂，由A、B两组分组成，系高分子药用化合物，在保留药液中的高分子物质、多糖及可溶性固体物方面优于传统的水提醇沉法，具有有效、简便、成本低以及制剂稳定性好的优点。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC2010高效液相色谱仪、岛津LCSolutions工作站(日本岛津)；色谱柱：岛津WdndaSil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；BT25S型十万分之一分析天平(赛多利斯(中国)有限责任公司)。

1.2 试药

芍药苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号110736-201337)；白芍、柴胡、当归、川芎、蔓荆子、全蝎等饮片(陕西龙力药业有限公司)，经鉴定符合2015版《中国药典》药品标准；神经痛口服液(批号20161214，20161218，20161225,本院自制)；甲醇、乙腈为色谱纯(Fisher Scientific)；磷酸、正丁醇、硫酸、氯仿、乙酸乙酯、甲酸等均为分析纯；水为纯化水；CTSA+B天然澄清剂(南通绿神生物工程有限公司，批号20161016)。

2 方法与结果

2.1 含量测定

2.1.1 色谱条件与系统适用性试验

采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1%磷酸(14∶86)为流动相；流速为1.0 min/mL；柱温30℃；检测波长为230 nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于3 000。

2.1.2 对照品溶液的制备

精密称取经五氧化二磷容器中减压干燥12 h以上的芍药苷对照品适量，加甲醇溶解，制成每1 mL含0.2 mg的溶液作为对照品溶液。

2.1.3 供试品溶液的制备

精密量取本品5 mL，置分液漏斗中，加水5 mL，用乙醚30 mL振摇洗涤，弃去洗涤液，再用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次20 mL，收集提取液，蒸干，残渣用甲醇溶解，置50 mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.1.4 测定法

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.2 除杂率的测定

分别精密量取絮凝前后提取液10 mL，分别置于干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃干燥至恒重，取出置于干燥器中至室温，精密称定，计算除杂率。

除杂率(%)=(絮凝前干膏重-絮凝后干膏重)/絮凝前干膏重×100%

2.3 药液的制备

按处方比例称取药材，加8倍量的水，加热回流提取至提取液变无色停止，滤过，浓缩至1.0 g/mL的浓缩液，备用。

2.4 CTSA+B天然澄清剂的配制

根据产品说明书，A组分用纯化水配制成1%的溶液，B组分用纯化水配制成1%的混悬液，静置24 h，备用。

2.5 水提液澄清工艺单因素考察

2.5.1 CTSA+B天然澄清剂加入顺序考察[1]

取2.3项下制备的浓缩提取液，加纯化水稀释至1∶5 (生药g∶药液mL)，2份，每份100 mL，在75～85℃保温下[2]，澄清剂A、B组分用量设定都为1%(mL)，边加边以120 r/min的速度匀速搅拌5 min[2]，样品液1先加B组分，保温60 min后，再加A组分；样品液2先加A组分，保温60 min后，再加B组分。观察两种加入顺序的澄清效果。CTSA+B天然澄清剂加入顺序对澄清效果的影响见表1。

表1 CTSA+B天然澄清剂加入顺序对澄清效果的影响

由表1可知，CTSA+B天然澄清剂A、B组分的加入次序应为先加B组分后加A组分，B组分为主澄清剂。

2.5.2 澄清剂用量[3]

取2.3项下制备的浓缩提取液，加纯化水稀释至1∶5(生药g∶药液mL)，4份，每份100 mL，保温75～85℃，120 r/min的条件下搅拌，加入不同量B组分混悬液，搅拌5 min，静置保温60 min，再次在上述条件下，加相对应的A组分，A组分为B组分的50%[2]，搅拌5 min，保温静置，观察沉降情况，沉淀不再增加时，滤过，测定含量及除杂率见表2。结果表明，CTSA+B澄清剂加入量以生药计算B组分用量1%(g/g)，澄清效果最好。

表2 CTSA+B天然澄清剂用量对澄清效果的影响

2.5.3 A、B组分比例的考察[4]

取2.3项下制备的浓缩提取液，加纯化水稀释至1∶5(生药g∶药液mL)，4份，每份100 mL，保温75～85℃，120 r/min的条件下搅拌，按照表2加入1%的B组分混悬液，搅拌5 min，静置保温60 min，再分别加入相当于B组分的1/4、1/3、1/2、1倍量的A组分，搅拌5 min，保温静置，观察沉降情况，沉淀不再增加时，滤过，测定含量及除杂率见表3。结果表明，B∶A=2∶1时，澄清效果最好，即以生药计B组分用量为1%，A组分为0.5%。

表3 A、B组分比例对澄清效果的影响

2.5.4 药液浓度的考察[1]

取2.3项下制备的浓缩提取液4份，每份10 mL，加纯化水分别配制成1∶3 、1∶5、1∶7、1∶9(生药g∶药液mL)的稀释液，于75～85℃保温下，120 r/min的条件下搅拌，按照表3下结果的CTSA+B天然澄清剂的用量加入，保温静置，观察沉降情况，沉淀不再增加时，滤过，测定结果见表4。结果表明，药液浓度为1∶7(生药g∶药液mL)以上时，澄清效果最好，根据实际生产，提取液浓度过低，不利于后续浓缩处理，因此，选取药液浓度1∶7为最佳。

表4 药液浓度对澄清效果的影响

2.5.5 保温温度[5]

取2.3项下制备的浓缩提取液，加纯化水稀释至1∶7(生药g∶药液mL)，4份，每份100 mL，于60℃、70℃、80℃、90℃，120 r/min的条件下搅拌，分别加入1%的B组分和0.5%的A组分，测定结果见表5。结果表明，当温度于80℃～90℃时絮凝效果最好。

表5 保温温度对澄清效果的影响

2.5.6 搅拌速度[6]

取2.3项下制备的浓缩提取液，加纯化水稀释至1∶7(生药g∶药液mL)，4份，每份100 mL，于80～90℃，在搅拌速度80 r/min、120 r/min、150 r/min、200 r/min的条件下，分别加入1%的B组分和0.5%的A组分，测定结果见表6。结果表明，搅拌速度120 r/min的条件下，澄清效果最好。

表6 搅拌速度对澄清效果的影响

2.5.7 保温时间[7]

取2.3项下制备的浓缩提取液，加纯化水稀释至1∶7(生药g∶药液mL)，4份，每份100 mL，于80～90℃保温，保温时间分别为2 h、4 h、6 h、8 h的条件下，120 r/min的条件下搅拌，分别加入1%的B组分和0.5%的A组分，测定结果见表7。结果表明，保温时间大于4 h时澄清效果最好。

表7 保温时间对澄清效果的影响

2.6 验证试验

2.6.1 澄清工艺

根据以上的考察结果，CTSA+B天然澄清剂最佳澄清工艺为：提取液浓度1∶7；澄清剂用量以生药计：B组分1%(g/g)、A组分0.5%(g/g)；在80℃～90℃保温；搅拌速度120 r/min；先加B组分，搅拌5 min，静置保温60 min 后再加A组分，搅拌5 min。保温4 h以上。滤过，浓缩至适量，过滤，灌封。

2.6.2 澄清剂工艺与醇沉工艺比较[8]

取“2.3”项下的提取液，分A、B两组,每组3份,按照澄清剂澄清工艺和醇沉(70%乙醇，冷藏沉淀24 h，滤过，回收乙醇，浓缩至适量，过滤，灌封)工艺，测定结果见表8。结果显示，芍药苷平均含量为0.261 mg/mL，RSD=1.347 5%(n=3)。除杂率为37.0%，RSD=0.270%(n=3)，3个月后醇沉法瓶内有絮状沉淀物。结果表明CTSA+B天然澄清剂澄清工艺稳定可行。

表8 两种澄清工艺对比试验结果

2.6.3 生产工艺验证

按照此工艺生产三批样品，验证澄清工艺结果见表9。结果表明，三批制剂质量经检验全部符合要求，此澄清工艺稳定，质量可控。

表9 澄清工艺验证结果

3 讨论

中药口服液，多为复方制剂，具有品种多样性和成分复杂性的特点，因此利用天然澄清剂进行澄清，需要仔细考察选择澄清条件；在本实验中，选用CTSA+B天然澄清剂，考察神经痛口服液的最佳澄清工艺。CTSA+B天然澄清剂是一种新型食用果汁澄清剂，具有安全、无毒、不残留、不引入异味等优点，是人工合成絮凝剂的理想代替品。其A、B两组分全用纯化水做溶媒，不引入酸，不改变提取液的pH值，同时澄清速度快，保留成分更多，在降低成本、缩短工期及增强制剂的稳定性方面均优于水提醇沉法。

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