miR-622在上皮性卵巢癌组织中表达及与预后的关系

余 俊，刘彤鸥△，李晓兰

1. 湖北中医药大学·湖北省中医院 妇产科(武汉 430061)；2. 湖北省宜昌市第二人民医院 妇产科(宜昌 443000)

卵巢癌是女性生殖道较为常见的三大恶性肿瘤之一，其中，上皮性卵巢癌是主要的组织学类型，约占90%[1]，由于卵巢解剖位置较为隐蔽，且早期缺乏典型的临床症状，多数患者确诊时已进展为晚期，加之卵巢癌具有侵袭转移力强、复发率高、易耐药等特点，患者预后较差，病死率位居妇科恶性肿瘤首位[2]。微小RNA(micro RNA，miRNA)作为广泛存在于生物体内的高度保守的短链RNA，可通过调控靶mRNA的3' 非翻译区而参与多种生命活动[3]。近年来，研究[4]发现，miRNA与人类多种肿瘤发生、进展过程密切相关，在恶性肿瘤早期诊断、指导治疗及评估预后中发挥重要作用。miR-622作为miRNA重要类型，在胃癌[5]、结直肠癌[6]等多种恶性肿瘤组织中表达异常，且参与了肿瘤细胞侵袭、转移等过程，但miR-622在上皮性卵巢癌发生、进展中的作用鲜有报道。本研究拟检测上皮性卵巢癌组织中miR-622表达，探讨其与患者预后的关系，以期为卵巢癌机制研究及基因治疗提供资料。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2010年3月至2012年3月在湖北省中医院择期行手术切除的上皮性卵巢癌患者81例，纳入标准：初次手术，术前均未接受放化疗，术后均经病理学检查确诊；排除标准：术前接受过放化疗治疗者。年龄24～73(49.7±9.1)岁；病理学分型：黏液性囊腺癌20例，浆液性囊腺癌61例；根据国际妇产科联盟(FIGO)2006年病理分期标准：Ⅰ～Ⅱ期27例，Ⅲ～Ⅳ期54例；组织学分级：中低分化53例，高分化28例；发生淋巴结转移34例。同期，选取行手术切除治疗的良性上皮性卵巢囊肿患者48例作为对照组，纳入标准：初次手术治疗，术后病理确诊且排除癌变。年龄25～75(48.3±8.7)岁。本研究通过医院伦理委员会批准，所有患者均行知情同意。

1.2 方法

1.2.1 主要试剂 总RNA提取试剂盒(Trizol法)购自上海江莱生物科技公司，反转录试剂盒购自北京优尼康生物公司，PCR试剂盒购自北京嘉美纽诺生物科技公司，miR-622及内参引物均由上海生工生物公司设计合成，实时荧光定量PCR仪购自美国Bio-rad公司。

1.2.2 利用实时荧光定量PCR技术检测不同组织中miR-622表达 两组患者均于术中留取上皮性卵巢癌组织和对照组组织，快速置于液氮中，保存于-70 ℃冰箱。取两组患者组织研磨后，加入细胞裂解液，对组织细胞中总RNA进行提取，并对总RNA纯度进行检测，以A280/A260≥1.80作为合格标准。取总RNA进行逆转录，反应条件：18 ℃ 5 min，40 ℃ 25 min，82 ℃ 10 min。利用PCR扩增试剂盒进行扩增，引物序列：miR-622引物：上游：5'-ATCCCAGGGAGACAGAGATCGAGG-3'，下游：5'-CAACCTCCCAAATAACTAAAACTACA-3'；U6引物：上游：5'-CGAGCACAGAATCGCTTCA-3'，下游：5'-CTCGCTTCGGCAGCACATAT-3'。PCR反应条件：95 ℃ 1 min，92 ℃ 30 s，54 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，连续进行40次循环，每个样品设3个平行复孔。利用2-△△Ct法计算不同组织中miR-622相对表达量。以上皮性卵巢癌组织中miR-622表达量的P25值为界值[7]，将患者分为低表达组(n=21)和高表达组(n=60)。

1.2.3 病例随访 所有上皮性卵巢癌患者均进行术后随访，包括电话、门诊复诊等形式，随访截止日期2017年3月31日。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 上皮性卵巢癌和对照组组织中miR-622表达比较

上皮性卵巢癌组织中miR-622相对表达量(2.16±0.21)，高于对照组(1.59±0.15)，差异有统计学意义(t=16.672，P<0.001)。

2.2 上皮性卵巢癌组织中miR-622表达量与临床病理特征相关性

miR-622在上皮性卵巢癌组织中的表达在不同年龄、不同肿瘤直径、不同病理学分型之间差异无统计学意义(P>0.05)，而在不同FIGO分期、不同组织学分级和是否发生淋巴结转移中，差异有统计学意义(P<0.05)(表1)。

指标例数miR⁃622表达量tP年龄/岁 ≥5044207±01919840051 <5037217±027肿瘤直径/cm ≥830219±02815570124 <851212±016病理学分型 黏液性囊腺癌20218±02412060231 浆液性囊腺癌61213±015FIGO分期 Ⅰ～Ⅱ期27202±0164750<0001 Ⅲ～Ⅳ期54227±025组织学分级 中低分化53228±0228886<0001 高分化28192±015淋巴结转移 是34225±0234674<0001 否47204±017

2.3 上皮性卵巢癌组织中miR-622表达量对患者生存时间的影响

生存分析显示，高表达组患者总体生存率低于低表达组，Log-rank检验显示，差异有统计学意义(2=6.932，P=0.008)(图1)。

图1 不同上皮性卵巢癌组织中miR-622表达量患者的生存率曲线

2.4 影响上皮性卵巢癌患者生存的多因素分析

Cox比例风险回归分析显示，FIGO分期、组织学分级、淋巴结转移和miR-622表达水平是影响患者生存的独立风险因素(P<0.05)(表2)。

表2影响上皮性卵巢癌患者生存的Cox比例风险回归分析结果

指标偏回归系数标准误PHR95%CIFIGO分期02670128 000318531234，2784组织学分级06380267 000131301630，6013淋巴结转移05130249 001318791244，2840miR⁃622表达量07610214<000150002423，10318

3 讨论

随着诊疗技术的进展，上皮性卵巢癌患者生存时间有了明显改善，但复发、转移仍然是导致患者治疗失败及死亡的主要因素[8]，积极探讨影响该病发生、转移的机制以改进治疗，已成为临床研究重点。miRNA作为一种单链非蛋白编码小分子RNA，可通过结合在靶基因mRNA的3' 端非翻译区而抑制蛋白质翻译或诱导靶mRNA降解，从而达到负性调控基因表达的目的，在机体细胞、器官生理功能[9]以及肿瘤发生、进展中发挥重要作用[10]。miR-622作为miRNA重要类型，在肿瘤细胞生长、增殖、侵袭、转移中发挥重要功能[11]，有研究[12]指出，k-Ras基因为miR-622的潜在靶基因，而k-Ras基因突变参与了肿瘤发生且对预后产生不利影响。本研究中，miR-622在上皮性卵巢癌组织中相对表达量明显高于对照组，说明miR-622在上皮性卵巢癌组织中呈高表达，提示miR-622可能在上皮性卵巢癌发生中发挥重要作用。

本研究结果显示，miR-622在上皮性卵巢癌组织中表达，在不同FIGO分期、不同组织学分级和是否发生淋巴结转移中，差异有统计学意义(P<0.05)，FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、组织学分级中低分化及发生淋巴结转移组织中表达量明显升高，说明miR-622表达量与上皮性卵巢癌恶性程度有关，可能参与了肿瘤病理进展过程。有研究[13]指出，miRNA不仅与恶性肿瘤患者发生、进展有关，而且影响患者预后。Thomas等[14]指出，结直肠癌患者miRNA表达异常与患者预后密切相关，如某些miRNA可预测结直肠癌复发，某些miRNA可影响化疗药物效果等。本研究生存分析显示，高表达组患者总体生存率明显低于低表达组，说明miR-622高表达影响患者生存时间，Cox比例风险回归分析结果显示，影响上皮性卵巢癌患者生存的因素包括miR-622表达量，说明miR-622高表达与患者预后不良有关，提示miR-622有望成为评估上皮性卵巢癌患者预后的生物学标志物。

综上所述，上皮性卵巢癌组织中miR-622呈高表达，且与肿瘤发生、进展密切相关，是患者预后的重要影响因素，可能成为一个新的上皮性卵巢癌患者预后评估指标，但本研究仅探讨了上皮性卵巢癌组织中miR-622表达与临床病理特征和预后的关系，具体作用机制尚待进一步研究明确。

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