尹加忠
云南省德宏州人民医院检验科 (云南 德宏 678400)
近年来医学检验技术不断进步,化学发光法对乙肝表面抗原(HBsAg)灵敏度也越来越高(达到0.03IU/mL)。最新临床检验数据显示,新生儿HBsAg经常会出现一过性阳性,但新生儿的母亲很多都不是乙肝患者,这种现象越来越多的受到临床医师的关注。有研究表明新生儿接种乙肝疫苗后会出现HBsAg假阳性[1]。本研究对通过本院132例HBsAg阳性新生儿进行乙肝两对半检测,分析其一过性阳性的出现原因,为后期临床检验工作提供参考,现总结报告如下。
收集德宏州人民医院2016年12月~2017年6月的1251例新生儿乙肝两对半定量检测结果,其中132例HBsAg阳性患儿均为本院出生1~5d新生儿,且出生时均注射乙肝疫苗,HBsAg阳性患儿中男童70例,女童62例。
仪器:雅培ARCHITECT i2000化学发光分析仪。试剂:乙型肝炎病毒表面抗原检测试剂盒(化学发光法),质控品由临川检验中心提供。
检测指标:HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb,合称“乙肝二对半”。操作方法严格遵循二步夹心法的化学发光免疫分析法(CLEIA法),操作过程中均进行室内质控。检测前将仪器置于最佳状态,具体步骤如下:①用移液器向比色杯内分别加入R1试剂、样品50μL、20μL,42˚C反应2min;②加入R2试剂30μL,42˚C反应1min后进行磁分离;③加入清洗液350μL进行磁分离并清洗,重复4次;④加入R3试剂100μL,42˚C反应2.5min后进行磁分离;⑤同步骤③;⑥依次加入R4试剂、R5试剂50μL、100μL并混匀,42˚C反应5min,检测发光强度;⑦以标准品发光强度为y轴,浓度为x轴,制作标准曲线;⑧通过标准曲线公式求出样本HBsAg浓度。
阴性:检测结果<0.03IU/mL的样本;阳性:检测结果>0.03IU/mL。初次检测结果在0.03~5.00IU/mL,样本需经2000g,15min离心后重新复检。复检结果均<0.03IU/mL,判定为阴性;复检结果均>0.03IU/mL,判定为阳性;复检结果不一致,需再次复检。
132例患儿中,7例HBsAg、HBsAb阳性,4例HBsAg、HBeAb阳性,2例HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性,1例HBsAg、HBsAb、HBeAb、HBcAb阳性,但在一月后复查结果显示132例新生儿HBsAg均为阴性,见表1。
表1. 新生儿入院后乙肝两对半检测结果
乙肝病毒会严重损害人类健康,并引起一系列肝脏疾病,降低患者生存质量[2]。接种乙肝疫苗后机体内会出现保护性抗体,如果感染乙肝病毒,抗体便会立即将其清除,目前此种方法是预防感染乙肝的最有效办法。目前临床主要运用化学发光法检测HBsAg,但本研究方法有很多干扰因素,如试剂、标本、操作等,其中标本内源性因素最难处理与规避[3]。
新生儿作为特殊群体,采血较为困难,因此常常出现采样量不足、采样不当等,进而造成血样溶血,如果未能及时检测,可能还会出现细菌感染。人为操作时不注意无菌操作,造成加样枪污染,因此必须使用一次性枪头,加样需控制好速度,洗涤液适量,避免出现交叉感染,防止非特异性吸附而呈现假阳性,本研究中不存在此问题,操作时严格遵循操作说明,且专人操作,尽量避免人为因素影响。因此,检测结果与待测样本质量、人为操作水平等均具有很大关联。此外,有学者发现样本中HBsAg含量一致时,由于样本中蛋白质浓度不同,HBsAg检测结果也会不同,并且检测结果与蛋白质浓度呈负相关[4]。但样本中蛋白质浓度降低时,检测结果却并不会一直升高,蛋白质浓度过低时,检测结果反而降低,因此蛋白质浓度对检测结果也会有一定影响。提高离心速度可消除脂血因素干扰,但有学者对比外观正常血清标本发现离心速度并不会影响HBsAg测定结果[5]。
本研究发现在132例患儿中,7例HBsAg、HBsAb阳性,4例HBsAg、HBeAb阳性,2例HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性,1例HBsAg、HBsAb、HBeAb、HBcAb阳性,但在一月后复查结果显示132例新生儿HBsAg均为阴性,研究中所有患儿均接受过乙肝疫苗接种,分析原因可能是乙肝疫苗接种会使新生儿HBsAg出现一过性阳性。刘华等[6]学者也发现新生儿在接种疫苗两周内容易出现HBsAg一过性阳性,而超过两周则无影响。因此建议临床检验需在接种两周后再进行HBsAg检测,从而规避乙肝疫苗对检测结果的影响,这与本研究结论具有一致性。
综上所述,新生儿乙肝HBsAg检测出现一过性阳性主要影响因素有:接种乙肝疫苗、人为操作不当、血样质量三方面,因此建议临床检验可以多次进行复检并对比每次结果,针对接种过疫苗的新生儿可在一个月后再检测HBsAg,条件允许时可进行定量、HBV-DNA检测,结合其他实验室诊断结果得出综合检测结果,尽量减少失误,保障新生儿身心健康发展[7]。
[1]张丽,陈波.新生儿乙肝疫苗接种对乙肝病毒表面抗原阳性率的影响[J].临床检验杂志(电子版),2016,5(4):202-204.
[2]沈彦,陈永健,周永列.新生儿乙肝疫苗接种对乙肝表面抗原即时检测结果的影响[J].浙江预防医学,2015,27(7):738-740.
[3]覃彦平.临床ELISA检测干扰因素分析及处理[J].中国误诊学杂志,2011,11(18):4399-4400.
[4]徐磊,张文倩,王琳.血清蛋白质浓度对ELISA检测HBsAg的影响[J].临床血液学杂志(输血与检验),2017,30(1):83-86.
[5]吴连杰,任继欣,贾长凤.化学发光法定量检测乙型肝炎表面抗原前离心速度标准化的实验研究[J].国际检验医学杂志,2013,34(14):1852-1853.
[6]刘华,王颖智,沈云岳,等.乙肝疫苗接种后新生儿乙型肝炎表面抗原一过性阳性的研究[J].检验医学,2015,30(11):1107-1112.
[7]刘荣静,习浩林,列坤.乙型肝炎病毒表面抗原弱反应性标本的检测及临床意义[J].检验医学与临床,2010,5(3):404-405.