银杏叶、乌饭树叶和桑叶粗黄酮的抗氧化性研究

刘富康，李晞晴，杨 璞，曲映红

（上海海洋大学，食品科学与工程国家级实验教学示范中心，上海 201306）

银杏叶、乌饭树叶和桑叶含有多种生物活性成分，其中的黄酮类化合物具有抗氧化、防止衰老、抑菌抗病毒等功效，且安全可靠，食用健康，可用于加工药品和保健食品[1-3]。从植物中提取黄酮通常使用的溶剂是水或乙醇水溶液，辅以微波、超声波等方法能提高黄酮的提取效率[4,5]。有专家分析，黄酮类化合物为银杏叶中重要的生理活性物质，具有防治心脑血管疾病、老年痴呆症、抗氧化等诸多功效[6]。王立等[7]也从乌饭树树叶中提取出了黄酮类色素，并对这些色素进行了分离纯化，分析了它们清除活性氧自由基的能力。王芳等[8]通过对桑叶中的黄酮类化合物的测定得出，桑叶中的黄酮类化合物主要包括芸香苷、槲皮素、异槲皮素、二氢山萘素等，含量约占干叶重的1.0%～3.0%，是所有植物茎叶中含量较高的一种。

本文以乙醇水溶液浸提银杏叶、乌饭树叶和桑叶中的粗黄酮，并考察其对DPPH自由基和超氧阴离子自由基的清除能力，旨在为开发绿色安全的天然抗氧化剂提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

试验材料：干燥的银杏叶、乌饭树叶和桑叶，均购于上海。

试剂：1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、乙醇、Tris、盐酸、邻苯三酚等，所用试剂均为分析纯。

仪器：LLJ-306Z粉碎机，江门市贝尔斯顿电器有限公司；AL204电子天平，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；KQ5200E超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；752N紫外可见分光光度计，上海仪电分析仪器有限公司。

1.2 试验方法

1.2.1 粗黄酮的提取

分别将已干燥的银杏叶、乌饭树叶和桑叶粉碎，过60目筛。精确称取10.00g碎叶粉末，料液比分别为1:30、1:25、1:20、1:15、1:10。在上述料液比条件下，用 70%乙醇于70℃超声浸提120min，5000r/min离心5min，上清液即为银杏叶、乌饭树叶和桑叶醇提粗黄酮溶液[9,10]。

1.2.2 DPPH自由基清除率的测定

将提取得到的粗黄酮按照勾明玥和方敏[11,12]的实验方法，测定样品和空白反应混合物在517nm处的吸光度，根据下列公式计算清除率，见公式（1）。

式中，K1为样品对DPPH自由基的清除率，A1为DPPH溶液加样品液后的吸光度，A2为样品液在测定波长的吸光度，A0为DPPH溶液不加样品液的吸光度。

1.2.3 超氧阴离子自由基清除率的测定

清除超氧阴离子自由基能力的测定采用邻苯三酚自氧化法[13]。取50mmol/L的Tris-HCl（pH 8.2）缓冲液4.6mL于试管中，25℃水浴中保温15min，加入粗黄酮溶液1mL，10mmol/L邻苯三酚溶液0.4mL，混匀于25℃恒温水浴中反应4min，立即加入8mol/L的盐酸1.0mL终止反应，以Tris-HCl缓冲液调零点，325nm下测其吸光值，即A1'。空白对照组（A0'）用乙醇1mL代替样品溶液，样品对照组（A2'）用乙醇4mL代替邻苯三酚溶液，见公式（2）。

式中，K2为样品对超氧阴离子自由基的清除率，A1'为超氧阴离子溶液加样品液后的吸光度，A2'为样品液在测定波长的吸光度，A0'为超氧阴离子溶液不加样品液的吸光度。

2 结果与讨论

2.1 银杏叶、乌饭树叶和桑叶粗黄酮对DPPH自由基的清除率

图1 粗黄酮对DPPH自由基的清除率Fig.1 The scavenging rate of crude flavonoids to DPPH radicals

从图1可以看出，三种植物叶的醇提粗黄酮对DPPH自由基的清除率随料液比的提高而增大，大小顺序为乌饭树叶＞桑叶＞银杏叶。选定的5种料液比条件下，乌饭树叶醇提粗黄酮的DPPH自由基清除率都在80%以上，显示出优良的抗氧化活性。随料液比的增加，桑叶醇提粗黄酮的DPPH自由基清除率快速上升，当料液比达到1:10时，清除率已上升至近80%。银杏叶醇提粗黄酮对DPPH自由基的清除率随料液比的增加上升缓慢，均为50%以下。

2.2 银杏叶、乌饭树叶和桑叶粗黄酮对超氧阴离子自由基的清除率

图2 粗黄酮对超氧阴离子自由基的清除率Fig.2 The scavenging rate of crude flavonoids to superoxide anion radicals

图2显示了粗黄酮对超氧阴离子自由基的清除率，由图2可以看出，3种植物叶的醇提粗黄酮对超氧阴离子自由基的清除率随料液比的提高而增大，大小顺序为银杏叶＞桑叶＞乌饭树叶。当料液比升至1:20时，银杏叶醇提粗黄酮的超氧阴离子自由基清除率达80%以上；料液比继续升高至1:15和1:10时，桑叶和乌饭树叶醇提粗黄酮的超氧阴离子自由基清除率也上升至70%以上。

综上可见，银杏叶醇提粗黄酮的超氧阴离子自由基清除率高于DPPH自由基清除率，乌饭树叶醇提粗黄酮对DPPH自由基有较强的抑制作用，桑叶醇提粗黄酮对两种自由基的清除能力相近。

3 结论

银杏叶、乌饭树叶和桑叶的醇提粗黄酮均有一定的DPPH自由基和超氧阴离子自由基清除能力，银杏叶醇提粗黄酮对超氧阴离子的清除能力较强，而乌饭树叶醇提粗黄酮则显示了较强的DPPH自由基清除能力。醇提粗黄酮中抗氧化成分的种类、数量有待于进一步研究。

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