阴虚证、水肿证、阴虚水肿证中医动物模型的造模方法及评价※

徐文峰范元硕何泽云唐 群彭亚军李旭华

（1 湖南中医药大学第一附属医院肾脏内科，湖南 长沙 410000；2 湖南中医药大学研究生院，湖南 长沙 410000；3 湖南中医药大学医学院，湖南 长沙 410000）

证候病理研究是中医药现代化研究的重要组成部分，中医证候动物模型又是中医药研发和辨证论治机理研究的重要手段。动物模型的稳定性、可重复性是中医药现代化研究结果的真实性、可靠性、创新性的基本前提[1-2]。以肾内科常见临床症状水肿为例，临床常有水肿与伤阴并见之象，此阴虚水肿以发汗、利尿、健脾、温肾等法难以奏效，水肿迁延难愈，目前有关阴虚水肿的理论探讨、机理研究相对较少，有关动物模型报道亦少。本文旨在从模拟中医病因的动物模型、模拟西医病因病理的动物模型两方面探讨水肿、阴虚证动物模型造模现状，总结阴虚水肿证动物模型的相对合理造模方式。

1 阴虚证动物模型

1.1 中医病因病机造模方法

1.1.1 单因素造模

1.1.1.1 超负荷运动法 《本草经解》：“七伤者食伤、忧伤、饮伤、房室伤、饥伤、劳伤、经络营卫气伤之七伤也。七伤皆伤真阴”，过劳伤及真阴而致阴精耗损。吴柳花等[3]、汪泳涛等[4]将实验大鼠在水深、水温恒定环境下游泳6～8周，每周5天，每天1次，日游泳时间由10 min逐日增加至第五周末的120 min（或第7周末180 min），建立大鼠“阴虚内热证”模型。此法在病因上更接近临床。

1.1.1.2 长期激怒法 《素问·阴阳应象大论》曰：“暴怒伤阴”。刺激实验动物使其长期处于躁怒状态，模拟因情志失调，肝郁化火，久而伤阴以建造肝肾阴虚型动物模型。俸道荣等[5]将雄性SD大鼠双后肢束缚，成对倒吊于笼内，激怒实验大鼠，使其粗叫、嘶咬等，首次激怒20 min，以后每隔1天，增加激怒时间10 min，直至激怒时间达到40 min。随着天数增加，实验动物出现活动减少，具体表现为扎堆、倦卧、嗜睡等，同时表现出拱背、胡须下垂、叫声细、毛无光泽、大便干燥、易激怒等，认为动物已处于“暴怒伤肝”“暴怒伤阴”状态。

1.1.1.3 药物损伤法 根据中医阴阳学说“阴阳对立”理论，以附子、干姜、肉桂等辛温燥烈之阳药，因“阳胜则阴病”“火热灼津，营阴暗耗”而使实验动物阴液亏虚，造成阴虚模型。韩冰冰等[6]以制附片、干姜、肉桂等复合煎剂灌胃14天建立阴虚内热大鼠模型。此法操作简便，过程易量化控制，模型“内热”及“内燥”表现明显，虚热证阴虚内热的分子机制可能与刺激应答相关基因及固醇代谢相关基因两类基因的异常表达相关。

1.1.1.4 逐水伤阴法 中医认为“水火者，阴阳之征兆也”，通过对实验动物减少水入，增加排出，使其处于“缺水”状态，造成津亏内燥伤阴，表现阴虚内热的证候。冯志毅等[7]在家兔禁食禁水18 h后由耳缘静脉注射呋塞米注射液，1 h后同法注入等量呋塞米注射液，再过1 h后由耳缘静脉注射大肠杆菌造模。造模后家兔出现烦躁、气促、大便干燥、耳廓发红发热、舌红少津、体温升高等阴虚症状相似表现。但此模型稳定性差，脱水症状纠正后，诸症改善，与中医“阴虚难复”的临床表现不符。

1.1.1.5 高盐饮食法 《黄帝内经》篇云：“夫盐之味咸，其气令津泄”“咸走血，咸者肾之味”。中医五行学说认为：肾在味主咸，高盐饮食的持久摄入，可耗液伤津，使实验动物出现血压升高、躁动、大便干燥等阴虚阳亢表现。姜丽芳等[8]予Wistar大鼠高盐饲料 (含食盐9%)，同时饮用水初始予自来水，30 d后改为0.9%盐水，共喂饲150 d造模。造模后测量大鼠清醒安静状态时的尾动脉血压，模型组明显高于正常饮食组，综合大鼠症状表现，考虑其为“高血压阴虚阳亢证”模型。

1.1.2 多因素复合造模

1.1.2.1 特殊环境法 凌昌全等[9]将大鼠置于人工气候室内（干球40℃、湿球32℃）进行热应激3 h处理，大鼠表现为昏睡，耳、爪、尾等潮红，大量流涎，气促等，考虑可将其视为“热损伤阴证模型”。此法仅通过大鼠表象的变化进行评述造模结果，缺乏客观检测指标数据支持，故造模准确性有待商榷。

1.1.2.2 番泻叶结合运动法 易杰等[10]选取雌/雄SD大鼠，饮食上予给番泻叶致泻，同时加以游泳运动，造模1月。实验大鼠出现消瘦、倦怠、大便稀等表现，考虑为“脾阴虚证”模型。

1.1.3 中医病因病机造模方法的评价 中医病因病机造模法，是以中医证候为观测指标，中医病因病机理论为操作指导，通过非药物等干预，研制临床动物模型的方法。所研制模型具有贴近中医病因现实的优势，与中医证候表现吻合度高。但因为中医病因病机概念的不确定性、证候与病因间因果关系的多元性，以及造模实验动物与人体间物种的差异性、实验动物的个体差异性，使该大类下所造模型可量化数据缺乏，造模过程中操作人员主观意识对实验过程影响较大，成功率、稳定性较低，可重复性差，有待进一步研究、解决。

1.2 西医病因病理造模方法

1.2.1 甲状腺激素类造模法 此法通过实验动物摄入甲状腺激素类药物[甲状腺片、三碘甲腺原氨酸（T3）和左旋甲状腺素钠（T4）]，模拟甲状腺功能亢进症状，出现怕热、多汗、神经过敏、急躁、震颤、心率加快、心输出量增加等类似于阴虚的现象。李慧芬等[11]取雄性SD大鼠，适应性喂养3天后称定质量，每天灌服20 mg/kg甲状腺片 (以甲状腺素计)诱导肾阴虚模型，连续24 d。造模后实验大鼠逐渐出现毛发疏松，粗糙无光泽，精神萎靡，拱背少动，纳食减少，体质量下降等体征，考虑“肾阴虚”模型造模成功；毛连根等[12]对大鼠每天腹腔注射5%T3(0.2 mL/100 g)连续多日制备“阴虚”模型。

1.2.2 肾上腺皮质类激素法 此法通过让实验动物被摄入氢化可的松、地塞米松等糖皮质激素，模拟临床使用肾上腺皮质类激素后出现的副反应建立“阴虚”动物模型。戴冰等[13]对KM小鼠先予以每天0.02 mL/g蒸馏水灌胃，连续6 d，第7～10天，按50 mg/kg给予氢化可的松灌胃，自由饮水、饮食，造模共持续10 d，造模后小鼠出现烦躁、易激惹、拱背扎堆、毛发枯槁、易脱落、大便干结、饮食增多等阴虚症状。

1.2.3 甲状腺素类联合利血平造模法 此法与甲状腺激素类造模法类似，通过让实验动物摄入甲状腺激素类药物[甲状腺片、三碘甲腺原氨酸（T3）和左旋甲状腺素钠（T4）]和利血平模拟甲状腺功能亢进症状。邬林祥等[14]将昆明雌性小鼠体质量（30±29） g，以利血平15 μg/只+甲状腺素25 μg/只，灌胃，1次/d，连续7 d；实验小鼠出现进食减少，饮水增多，体重减轻，躁动不安，易惊，后期出现视力障碍等，确定造模成功。

1.2.4 手术法 廖圣宝等[15]将实验大鼠经腹膜后近主动脉侧分离左肾动脉，以0.2 mm银荚狭窄左肾动脉，常规饲养1周后，测实验大鼠尾动脉收缩压较术前升高22.6 mmHg以上，且超过135 mmHg者，为阴虚证造模成功 (二肾一夹高血压)。

1.3 西医病因病理造模方法的评价 阴虚证西医病因病理造模法是通过现代医学干预手段，使实验动物出现固定方向机体损伤，进而表现中医阴虚证候表现，操作简便，造模数据客观，可重复性高，且根据中医理论，予相应药物反证模型成立。但中医证候与西医临床诊断关系是非充分必要性的，是不可逆的。采用西医病因病理造模的动物模型在理论方面与中医传统理论脱节，单纯的理化、生物损伤因素使模型对中医证候的表达局限化、片面化。因此西医病因病机理论指导下研制的动物模型，适合特定情况下中医证候及治疗的研究，如甲状腺功能亢进患者表现为阴虚证时的生化、治疗的研究，但用于单纯中医证候方面的实验研究，易造成实验数据片面，大数据真实性降低。

2 水肿证动物模型

中医认为水肿是由外感、内伤等多种因素造成肺脾肾三脏对水液宣化输布功能失调，致使体内水液潴留，外溢于肌表引起，临床常见于风水泛滥、湿毒浸淫、气滞水停、脾阳虚衰、气阴两虚等证候[16]，查阅近10年文献，单纯依靠中医理论指导，难以短期内复制出适用的水肿实验动物模型。西医病因病理指导下的模型研制，具有简便、高效、重复性高等优势，故水肿模型多采用西医造模方法。目前常用造模方法为阿霉素法，即通过让实验动物摄入一定量的阿霉素，引起全身性水肿。周宁等[17]将大鼠适应性喂养1周后尾静脉注射阿霉素，首次剂量为4 mg/kg，8天后再次尾静脉注射阿霉素3.5 mg/kg。造模后模型大鼠的血肌酐、尿素氮和尿蛋白水平较正常组显著升高，同时出现低蛋白血症，提示造模后大鼠肾功能受损伴水肿症状。

此法简便、可行，成功率高，实验数据量化程度高，可重复性好。但阿霉素对实验动物的影响是非特异性的，对实验动物造成的损伤亦是多方面的，如临床亦有用阿霉素法研制心源性水肿动物模型的报道[18]，故现实应用中，应尽量加强对可变因素的控制，同时综合考虑诸因素间相关性。

3 阴虚水肿证造模方法

目前常用造模方法是阿霉素联合甲状腺激素类方法，此方法通过复合药物刺激，使实验动物同时具有水肿和阴虚的表现。王洪玉[19]将大鼠适应性喂养3 d后，每日按照15 mg/100 g体重给予甲状腺素混悬溶液灌胃，自由饮水、饮食，连续21 d。第一天按照4 mg/kg体重首次尾静脉注射阿霉素溶液，7 d后同样的方法按照3.5 mg/kg体重第2次注射，注射5 d后检测24 h尿蛋白阳性为模型成功的标志。

阴虚水肿证动物模型，是病证结合动物模型的一种，此类模型是确定方向下中医证候动物模型，具有（1）贴近中医证候特点；（2）稳定性、可靠性及可重复性强，以西医疾病模型为基础，造模结果数据化高，弥补了中医传统病因致病的模糊性、非特异性及不可控性缺点；（3）临床实际应用性强等优势。是特定方向中医证候研究的理想化模型。将中医很多“证”的不确定因素由于“病”的限制变得更加清晰，可广泛适用于疾病中医证候现代本质的研究、中西医综合治疗研究等，能更精确地阐明中医证的本质。但此类模型的不足也十分明确，无法准确反映中医理论下疾病的发生发展过程。

4 总结

阴虚水肿证因其临床病例较少、治疗难度大、治疗经验记载有限等特点，因此阴虚水肿证动物模型的建立，成为临床研究中的重要部分。在现有三大模型建立思路下，以中医病因病机为指导的造模方法，动物模型更接近临床证候，但受中医病因的不确定性、证候表现的主观性大、动物与人物种的差异性、实验个体的差异性等影响，使模型稳定性、量化性差，可重复性低，不利于大范围临床试验和数据化分析；以西医病因病理为指导的造模方法，虽稳定性、可重复性、造模数据量化性高，短时间内大量稳定复制，但基于中医证候与西医临床表现间非必要充分关系，使模型难于完整表现中医证候，不利于中医证候的全面性研究；基于中西医双重理论基础指导下的病证结合动物模型，兼具现代动物模型稳定性高、可重复性高等试验要求，同时具有中医证候的症状体征表现，虽模型具有特定指向条件下中医证候表现的特征，且无法反映中医理论下疾病的发生发展等病理过程、病证传变等，但与现阶段中医证候临床研究思路契合度高，是现阶段中医证候试验动物模型造模方法的不二选择。