山茱萸对老龄小鼠肝微粒体细胞色素P450部分亚型的影响*

吕 静，曲雷鸣，龚 伟

辽宁中医药大学附属医院，辽宁 沈阳 110032

细胞色素P450(cytochrome P450)属于药物代谢的第一相酶，主要存在于肝脏微粒体中，是肝脏混合功能氧化酶系(MFO)的主要成份，在内源性和外源性化合物的生物转化中起重要作用［1］，CYP450抑制是有害药物间相互作用(Drug to drug Interactions，DDIs)产生的主要原因，占代偿性DDIs 的 70%［2］。有研究表明［3］，随着年龄的增长，大鼠肝微粒体细胞色素P450的含量减少。在P450s超家族中，CYP1～3是参与药物代谢的主要家族，参与70%～80%的临床药物的生物转化，药物对其活性及表达的研究有助于了解DDIs或对药物可能的毒性等做出预测。

山茱萸为山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalis Sieb.Et Zucc.的干燥成熟果实，具有补益肝肾的作用，为抗衰老的名贵中药，临床上山茱萸常与其他药物配伍使用，本研究以山茱萸为研究对象，考察其对小鼠肝微粒体细胞色素P450部分亚型 CYP1A1、CYP2A4、CYP2A5、CYP3A41 mRNA 表达的影响，有助于预测山茱萸与临床其他药物之间可能存在的 DDIs，从而指导老年患者临床合理用药，避免产生不良反应，降低潜在风险。

1 材料与方法

1.1 实验动物 昆明种青年小鼠10只，3～4月龄，体质量30～35 g，雌雄各半；昆明种老年小鼠30只，大于12月龄，体质量大于50 g，雌雄各半，由辽宁中医药大学实验动物中心提供，实验动物生产合格证号：SCXK(辽)2003-008，实验动物使用合格证号：SYXK(辽)20090002。

1.2 仪器与试药 PrimeScriptRRT reagent Kit with gDNA Eraser，SYBRRPremix Ex TaqTMⅡ(Tli RNaseH Plus)，ROX plustrizol，GAPDH，CYP1A1、CYP2A4、CYP2A5、CYP3A41等均购于大连宝生物工程有限公司；山茱萸药材由辽宁中医药大学附属医院药剂科提供；山茱萸含药鼠粮由辽宁长生生物科技有限公司提供，低、高剂量组含药鼠粮含山茱萸浓度分别为0.04、0.36 g/g，模型组及对照组给予正常鼠粮。

1.3 方法

1.3.1 分组及给药 将老年小鼠30只随机分为3组，分别为老年模型组、山茱萸高剂量组、山茱萸低剂量组，以3～4月龄小鼠为成年对照组。给药组分别给予不同浓度的含药鼠粮，老年模型组、成年对照组给予正常鼠粮。

1.3.2 RT-PCR检测 连续给药3个月后，分别用10%水合氯醛麻醉小鼠，固定，剪开腹腔，取肝脏于Trizol中匀浆，使用PrimeScriptRRT reagent Kit with gDNA Eraser试剂盒，首先提取总RNA，逆转录合成第1链互补cDNA，通过特异性引物对小鼠肝组织中的CYP1A1、CYP2A4、CYP2A5、CYP3A41和内参基因 GAPDH进行扩增［4］，使用Stratagene Mx3000p荧光定量PCR仪进行检测，基因引物序列见表1，溶解曲线，扩增曲线，阈值曲线见图1—3。

表1 引物序列

1.4 统计学方法 采用SPSS 16.0软件进行数据分析，计量资料以(±s)表示，组间比较采用单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

老年模型组小鼠肝微粒体细胞色素P450亚型 CYP1A1、CYP2A4、CYP2A5、CYP3A41基因相对表达量均显著低于成年对照组大鼠的相关基因表达。给予不同剂量山茱萸含药鼠粮后，山茱萸高、低剂量组 CYP1A1、CYP2A4、CYP2A5、CYP3A41基因相对表达量均显著升高，且山茱萸高剂量组作用强于低剂量组，见表2。

表2 基因相对表达量

3 讨论

肝药酶主要参与药物代谢，其相关亚型基因表达量降低，可能是导致药物代谢缓慢，发生不良反应的主要原因。本研究结果表明，衰老小鼠肝细胞中 CYP1A1、CYP2A4、CYP2A5、CYP3A41基因的表达量显著低于成年小鼠，给予含山茱萸的鼠粮后，肝细胞中CYP1A1、CYP2A4、CYP2A5、CYP3A41基因的表达量显著升高，表明中药山茱萸有诱导肝药酶的作用，可为老年人合理用药提供依据。

在P450s超家族中CYP1～3是参与药物代谢的主要家族，参与70%～80%的临床药物的生物转化，P450s抑制是临床治疗药物DDIs主要的成因之一，山茱萸可对P450相关亚型CYP1A1、CYP2A4、C YP2A5、CYP3A41基因产生诱导，可使其血药浓度降低，减少由于协同用药产生毒性的可能。

CYP1A1参与烃类致癌物的代谢［5］，大多数化学致癌物都是CYP1A1的底物［6］。山茱萸能诱导CYP1A1 mRNA的表达，表明该药长期服用可能导致体内致癌代谢物堆积。

小鼠肝中CYP2A5与人肝中CYP2A6有高度的同源性，且功能相似［7-8］，CYP2A6是人体内重要的药物代谢酶，其参与环磷酰胺、丙戊酸钠、咖啡因及尼古丁等代谢，山茱萸能诱导CYP2A5 mRNA的表达，当山茱萸与通过CYP2A5代谢的其他药物联合应用时需谨慎，以避免产生代谢性药物相互作用导致的药物不良反应。

CYP3A41与CYP2A4目前研究较少，其代谢主要与激素相关［9］，本研究结果表明，12月龄老年模型组小鼠肝细胞CYP3A41与CYP2A4 mRNA的表达显著低于6月龄成年对照组小鼠的基因表达，与12月龄小鼠已进入老年，激素代谢水平降低相关，山茱萸能诱导CYP3A41与CYP2A4 mRNA的表达，可能与山茱萸能调节老年小鼠激素代谢相关［10］。

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