W1602877-京族药浴液对家兔的皮肤刺激性及急性毒性的研究

周 丽，许文波，张传凯，陈 玲

(1. 广西防城港市第一人民医院，广西 防城港 538021；2. 广西防城港市卫生计生委，广西 防城港 538001)

新生儿高胆红素血症是新生儿期常见问题之一，部分高未结合胆红素血症患儿可发生胆红素脑病，一般多留有不同程度的神经系统后遗症，重者甚至死亡，给社会和家庭带来沉重负担[1]。相关报道显示，及时有效的早期干预可避免由于黄疸程度重引发的胆红素脑病、核黄疸，降低重症病率[2-3]。传统中医药对新生儿高胆红素血症的防治效果明显，由于新生儿皮肤嫩薄，体表面积大，药物易于透过吸收，故中药药浴广泛用于高胆红素血症的防治，早期应用能降低高胆红素血症的发生率，且使用简单，价格低廉，无过敏性和刺激性及毒性等反应[4-8]。京族药浴在防城港市民间长期应用，是京族民众传统的新生儿退黄措施，为更科学地深入探讨评价京族药浴液的安全性，笔者对家兔进行了皮肤给药刺激性试验和急性毒性试验，现将结果报道如下。

1 实验资料

1.1药物 京族药浴液，用红蓝草、抹药(广防风)、桃子叶各200 g加水5 000 mL，煎煮至500 mL，药物浓度为1.2 g/mL的生药材，为临床用药的4倍[1]。

1.2实验动物 4周龄健康家兔，体质量1.8～2.5 kg，雌雄各半。由广西医科大学医学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK桂2014-0002。动物均饲养于广西医科大学医学实验动物中心动物房，温度23～25 ℃，湿度约50%。试验期间动物单独分笼饲养，喂养青饲料，自由饮水。

1.3实验方法

1.3.1实验分组与给药 取25只4周龄家兔，按随机数字表法分为完整皮肤单次给药皮肤刺激性试验组、完整皮肤多次给药皮肤刺激性试验组、破损皮肤单次给药皮肤刺激性试验组、破损皮肤多次给药皮肤刺激性试验组以及空白对照组，每组5只。试验前24 h将家兔脊柱两侧去毛(约50 cm2)，分别作为给药区和对照区。破损皮肤组用无菌针头于脱毛区划“#”字(只损伤角质层，不伤及皮下组织)，以表皮出血丝为度。除空白对照组外，其他各组家兔给药区均涂抹京族药浴液，对照区涂抹等量生理盐水，以约2 cm2的消毒纱布覆盖，用无刺激性胶布加以固定。

1.3.2单次给药皮肤刺激性试验 按“1.3.1”项下方法，给药1次，给药24 h后用双蒸水擦洗以去除残留药液。观察给药后1 h、24 h、48 h、72 h给药部位皮肤有无红斑、水肿等情况，并参考文献[9]中方法进行皮肤刺激反应评分[0分：无红斑或水肿；1分：轻微红斑或水肿(勉强可见)；2分：明显红斑或轻度水肿(皮肤隆起轮廓清楚)；3分：中、重度红斑或中度水肿(皮肤隆起约1 mm)；4分：严重红斑(紫红色)至轻微焦痂形成或重度水肿(皮肤隆起超过1 mm，范围扩大)]和刺激强度的评价(0～0.5分：无刺激性；>0.5～2.0分：轻刺激性；>2.0～6.0分：中刺激性；>6.0～8.0分：强刺激性)。

1.3.3多次给药皮肤刺激性试验 方法同“1.3.2”项，每天于同一部位给药1次，每次6 h，连续7 d。从第2天开始，每次给药前应剪毛，用双蒸水清除残留药物，1 h后观察结果，并进行皮肤刺激反应评分及皮肤刺激强度评价。停药后1 h、24 h、48 h、72 h继续观察给药部位皮肤有无红斑、水肿、色素沉着、溃烂、出血点、皮肤粗糙或菲薄等现象。于实验开始前后抽取家兔耳动脉血，取血清检查肝、肾功能，并于实验结束时采取受试部位皮肤组织行HE染色进行病理检查，按皮肤刺激性试验受试皮肤病理组织学检测评分标准[a.棘层肥厚轻度(表皮为正常厚度1.5～3倍)为1分，中度(表皮为正常厚度>3～4倍)为2分，重度(表皮为正常厚度4倍以上)；b. 颗粒层增厚为1分；c. 角层增厚为1分； d. 颗粒层缺乏为1分；e.角化不全为1分；f.表皮细胞空泡化或细胞内水肿或基底细胞液化变性为1分；g.棘细胞间水肿为1分，水泡形成为2分；h. 表皮坏死轻度(占表皮切面的1/3以下)为8分，中度(占表皮切面的>1/3～2/3)为10分，重度(占表皮切面的2/3以上)为15分；i.真皮结缔组织血管扩张充血或水肿为1分；j.胶原纤维变性或解离(指胶原纤维分离成细小碎片)为1分；k.真皮炎性细胞浸润轻度为1分，中度为2分，重度为3分]进行评分：按总分为(a+b+c+d+e+f+g)+(i+j+k)或h+(i+j+k)选择总分较大者。

1.3.4肝、肾功能指标检测 于实验开始前、7 d后分别抽取家兔耳动脉血，离心后取血清，用日本东芝TBA-2000FR 全自动生化分析仪测定肝功能指标[总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBil)、直接胆红素(DBil)]及肾功能指标[血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、尿酸(UA)]水平，试剂盒为北京利德曼生化股份有限公司生产，均由广西防城港市第一人民医院检验科专业人员检测。

2 结 果

2.1一般情况 试验家兔在给药期间反应好、食欲佳，大小便正常，无反应差、局部红肿、抓痕及死亡等情况。

2.2皮肤给药刺激性试验 完整皮肤单次试验组、破损皮肤单次试验组以及空白对照组皮肤刺激反应评分和皮肤刺激强度评分均为0分；完整皮肤多次试验组用药后各时间点和停药后各时间点皮肤刺激反应评分和病理组织检查积分均为0分；破损皮肤多次试验组用药后2，3，5 d皮肤刺激反应评分为0分，7 d为0.2分，停药后各时间点均为0分，病理组织检查积分均为0.2分；多次试验各组皮肤刺激强度评分均为0分。

2.3病理学检查 取完整皮肤和破损皮肤多次给药皮肤刺激试验组家兔受试部位的皮肤组织行病理学检查，显微镜下可见皮肤组织完整，无结构紊乱，无出血点、水肿、表皮无增厚或菲薄、坏死，给药区与对照区比较无明显差异。HE染色镜下表现见图1～4。

2.4急性毒性试验 实验后，完整皮肤多次试验组TBil水平明显低于实验前(P<0.05)，DBil水平明显高于空白对照组(P<0.05)，破损皮肤多次试验组ALB和DBil水平均明显低于实验前(P均<0.05)，见表1。完整皮肤多次试验组和破损皮肤多次试验组实验后BUN、Cr、UA水平与实验前及空白对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)，见表2。

图1 完整皮肤多次试验组对照区HE染色表现(×400)

图2 完整皮肤多次试验组给药区HE染色表现(×400)

图3 破损皮肤多次试验组对照区HE染色表现(×400)

图4 破损皮肤多次试验组给药区HE染色表现(×400)

3 讨 论

中医认为，黄疸多因湿热之气经孕母侵入胎儿，或婴儿于胎产之时或生后受湿热邪毒而生。同时新生儿脏腑娇嫩，脾运不全，受湿热之邪侵入后未能完全散除，郁结于体内，熏蒸肝胆，导致胆汁淤积，透过表皮而显黄染[8]，故清热解毒、疏肝利湿、益气健脾为退黄治疗之关键。京族药浴液主要是用红蓝草、抹药、桃子叶等煎水泡洗，红蓝草、抹药、桃子叶均具清热解毒、祛风利湿、利胆退黄之功效[10-14]，且单味药未见有过敏性、刺激性及毒性反应[15-16]。本研究对其安全性进行了进一步研究，皮肤刺激实验结果显示，无论是单次用药还是多次用药，京族药浴液对完整和破损皮肤均无刺激性；皮肤组织病理学检查中，有1只家兔用药侧与生理盐水侧均出现皮肤轻微红斑，皮肤病理检查有淋巴细胞浸润及轻度间质水肿，可能与该家兔在试验中挣扎过猛，不小心碰到固定器碰伤所致，其余家兔用药侧与生理盐水侧皮肤组织病理学检查均无异常；肝肾功能检测结果显示，实验后完整皮肤多次试验组TBil水平降低，破损皮肤多次试验组ALB和DBil水平降低，完整皮肤多次试验组和破损皮肤多次试验组实验后BUN、Cr、UA水平与实验前及空白对照组比较差异均无统计学意义。上述结果说明京族药浴液对皮肤无刺激性，对肝、肾功能无明显影响，临床应用安全。

表1 多次试验组和空白对照组家兔肝功能指标水平比较

注：①与实验前比较，P<0.05；②与对照组比较，P<0.05。

表2 多次试验组和空白对照组肾功能指标水平比较

[1] 王卫平. 儿科学[M]. 8版. 北京:人民卫生出版社,2013:119-126

[2] 冯伟伟，阮为勇，王宇军，等. 中药泡浴联合新生儿抚触治疗新生儿黄疸疗效观察[J]. 现代中西医结合杂志，2015，24(32)：3618-3619

[3] 高燕. 水疗联合抚触对新生儿黄疸影响的研究进展[J]. 华夏医学，2013，26(2)：402-403

[4] 张玲. 药浴方治疗新生儿黄疸100例[J]. 陕西中医，2013，34(3)：284-286

[5] 段富霞. 中药药浴加抚触对30 例新生儿黄疸的影响[J]. 泰山医学院学报，2015，36(9)：1045-1046

[6] 陈青，岑杨成，吴飞燕，等. 中药药浴加抚触治疗新生儿病理性黄疸30例疗效观察[J]. 右江医学，2014，42(6)：641-643

[7] 吴肖妮，费健丽，陈祺雅，等. 中西医治疗新生儿黄疸的研究进展[J]. 中医儿科杂志，2013，9(3)：52-55

[8] 王艳宁，黄武珍，程志勇，等. 新生儿退黄洗液对黄疸治疗作用的实验及临床研究[J]. 广西医学，2013，35(12)：1604-1607

[9] 国家食品药品监督管理局. 中药、天然药药物研究技术指导原则[S]. 2005

[10] 刘同方， 于华忠， 刘建兰，等. 红丝线化学成分及药理活性研究进展[J]. 广东农业科学，2013，19(1)：116-124

[11] 王玉兰,栾欣. 广防风中的苯乙醇苷类化合物[J]. 中草药，2004，35(12)：1325-1327

[12] 黄婧，马健雄． 汉桃叶总黄酮的提取及其镇痛抗炎活性研[J]． 中国药业，2014，23(22):33-34

[13] 周荣光，杨兆祥，王金，等. 扁桃叶的化学成分研究[J]. 天然产物研究与开发，2012，24(9)：1217-1219

[14] 蒙丽丽, 刘红星 , 吴怀恩，等. 扁桃叶挥发油化学成分的研究[J]. 广西植物，2011，31(2)：278-280

[15] 彭亮，何励，姚思宇，等. 红丝线草亚慢性毒性及抗氧化功能的研究[J]. 毒理学杂志，2012，26(2)：136-138

[16] 谢双峥，党思捷． 桃叶熏洗法的古代文献研究与现代临床应用[J]． 江西中医药，2013，44(9):43-44