芎归六君子汤对实验性大鼠冠心病的治疗作用

郑丽莉

(山东协和学院，济南 250109)

心血管疾病在我国城市居民死因中位居前三位，而冠心病是心血管疾病的第一死因[1]。冠心病属于中医学“胸痹”范畴，其病位在心，广泛存在气虚痰浊血瘀的病机。六君子汤源于《医学正传》，主治脾胃气虚兼痰湿证，症见食少便溏，胸脘痞闷呕逆者，现代医学常用于治疗慢性胃炎、消化性溃疡等属于脾胃气虚者。芎归六君子汤在六君子汤基础上，加味补血活血之当归、川芎组成，具有补气健脾，化痰散瘀之效，是治疗脾胃气虚，痰瘀内阻的常用方药。本研究拟采用芎归六君子汤治疗大鼠冠状动脉粥样硬化性心脏病，观察该方对于冠心病的治疗效果。

1 材料和方法

1.1 实验动物

SPF级SD大鼠60只，雄性，体重(200±20) g，山东省济南市朋悦实验动物繁育有限公司提供 [SCXK (鲁) 2014-0007]，[SYXK (鲁) 2014-0008]。

1.2 主要试剂与仪器

1.2.1 中药材

芎归六君子汤由人参、白术、茯苓、炙甘草、陈皮、姜半夏、川芎、当归组成，药物购于建联药店，经山东中医药大学中药鉴定教研室鉴定。上述药材按照比例3∶3∶3∶2∶1∶2∶3∶3称取，加水浸泡2 h，常规煎煮3次，药液混合，60℃水浴箱中浓缩至每毫升制剂相当于生药0.6 g。灭菌，4℃冰箱保存备用。

1.2.2 对照药

辛伐他丁，购于江苏恒瑞医药股份有限公司，批号：国药准字H32020856。复方丹参滴丸，购于天津天士力制药股份有限公司，批号：国药准字H20013423。

1.2.3 造模用药

胆固醇(百灵威科技有限公司，批号LR600108)；丙硫氧嘧啶(上海朝晖药业有限公司，批号1404F12)；脱氧胆酸钠(北京奥博星生物制药有限公司，批号20151028)；维生素D3(哈尔滨市华晟科技动物药品厂，兽药字2015080511417)；垂体后叶素(南京新百药业有限公司，批号100401)。脂肪乳的配比，每500 mL含10%胆固醇、20%猪油、1%丙硫氧嘧啶和2%脱氧胆酸钠。

1.2.4 其他试剂

TC、TG、HDL-C、LDL-C试剂盒(南京建成生物有限公司，批号分别为20150311、20150327、20150328、20150403)；NO试剂盒(南京建成生物有限公司，20151216)，ET-1、PGI2、TXA2 ELISA试剂盒(武汉华美生物工程有限公司，CSB-E06979r、CSB-E13706r、CSB-E12689r)，血浆PAI-1、t-PA ELISA试剂盒(南京森贝伽生物科技有限公司，批号分别为SBJ-R0574、SBJ-R0585)，TNF-α、IL-1β、IL-6 ELISA试剂盒(深圳达科为生物技术有限公司，批号分别为20151121、20151012、20150923)，hs-CRP ELISA试剂盒(武汉华美生物工程有限公司，批号D19018885)，MCP-1、ICAM-1 ELISA试剂盒(美国R&D公司，批号20150101A、20150211A)。

1.2.5 主要仪器

Synergy2酶标仪 [美国伯腾仪器有限公司(Bio Tek)]；冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂)；LG-10A电热恒温水浴箱(北京科伟永鑫仪器厂，HH-S4)；MS-18型全自动生化测定仪(奥普森公司)。

1.3 实验方法

1.3.1 动物分组

将大鼠随机分为5组，每组12只，分别为空白对照组、模型对照组、西药对照组(辛伐他丁)、中药对照组(复方丹参滴丸)、芎归六君子汤组。

1.3.2 给药方法

以等效剂量计算，于实验开始即口服灌胃给药，每日一次，持续12周。其中，空白对照组和模型对照组分别给予生理盐水20 mL/kg；西药对照组给予辛伐他丁2.1 mg/kg，中药对照组给予复方丹参滴丸85 mg/kg；中药组给予芎归六君子汤6.3 g/kg。

1.3.3 模型制备

除空白对照组外，按每千克60万单位一次性腹腔注射维生素D3，同时每天灌服脂肪乳10 mL/kg，连续12周。实验结束前72 h，对照组腹腔注射生理盐水1 mL/kg，其余各组腹腔注射垂体后叶素30 U/kg，连续3次，每次间隔24 h，诱发冠状动脉痉挛，制备冠心病模型[2-3]。记录造模前和末次给药后30 min心电图。本文的动物实验已通过实验动物使用与管理委员会批准(编号：IACUC-2016-017)。

1.3.4 检测指标与方法

于12周末，末次给药后12 h，称重，戊巴比妥麻醉，下腔静脉取血，低温离心10 min，转速3000 r/min，分离血清或血浆。

(1)心电图检测：戊巴比妥麻醉，连接BL-420E+生物机能实验系统，记录造模前和末次造模后30 min标准Ⅱ导联心电图，以QRS波群的终点与ST段交接处的J点位移判断心肌缺血发生与否，并以PR段为基线记录J点位移，以J点上升或下降超过0.1 mV视为发生心肌缺血。

(2)血脂测定：采用酶学法，用全自动生化分析仪检测血清血脂(TC、TG、HDL-C、LDL-C)，具体操作按照试剂盒上说明进行。

(3)炎症因子测定：ELISA法分别测定TNF-α、IL-1β、IL-6、hs-CRP、ICAM-1、MCP-1的浓度，实验严格按照试剂盒步骤操作。

(4)血管内皮活性物质和纤溶系统检测：硝酸还原酶法测定血清NO含量，ELISA法检测血清ET-1、PGI2、TXA2和血浆PAI-1、t-PA的水平，严格按照试剂盒说明完成操作。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 芎归六君子汤对冠心病大鼠心电图ST段变化的影响

造模前后，模型组ST段变化超过0.1 mV，与空白对照组相比，ST段变化差异有显著性(P< 0.05)，说明造模成功，出现冠脉痉挛，导致心肌缺血。与模型对照组相比，各给药组ST水平改善，差异有显著性(P< 0.05)。辛伐他丁组与丹参滴丸组差异无显著性，芎归六君子汤组效果优于辛伐他丁与丹参滴丸组，差异有显著性(P< 0.05)。

2.2 芎归六君子汤对冠心病大鼠血脂的影响

与空白对照相比，模型对照组TC、TG、LDL-C显著升高，HDL-C显著降低(P< 0.01)，说明模型对照组出现明显高血脂，造模成功。与模型对照组相比，各给药组血脂水平均改善，差异有显著性，其中，辛伐他丁组与丹参滴丸组仅HDL-C差异有显著性，TC、TG、LDL-C差异无显著性，而芎归六君子汤组效果优于辛伐他丁与丹参滴丸组，差异有显著性。

2.3 芎归六君子汤对冠心病大鼠炎症因子的影响

与空白对照组相比，模型对照组TNF-α、IL-1、hs-CRP、MCP-1、ICAM-1显著升高，说明模型对照组出现明显的炎症反应。与模型对照组相比，各给药组炎症因子均显著降低，芎归六君子汤组降低最为明显，与辛伐他丁组和丹参滴丸组相比差异有显著性。

2.4 芎归六君子汤对冠心病大鼠血管内皮活性物质的影响

与空白对照组相比，模型对照组ET-1、TXA2显著升高，缩血管作用增强，NO、PGI2显著降低，扩血管作用减弱。各用药组血管活性物质的水平均有所改善，与模型对照组相比差异有显著性，其中芎归六君子汤组效果优于辛伐他丁组及丹参滴丸组，而辛伐他丁组与丹参滴丸组相比差异无显著性。

表1 芎归六君子汤对冠心病大鼠心电图ST段变化的影响

注：与空白对照组相比，*P< 0.05；与模型对照组相比，△P< 0.05；与辛伐他丁组相比，☆P< 0.05；与丹参滴丸组相比，●P< 0.05。下同。

Note. Compared with the blank control group,*P< 0.05. Compared with the model control group,△P< 0.05. Compared with the simvastatin group,☆P< 0.05. Compared with the Danshen dripping pill group,●P< 0.05. The same bellow.

表2 芎归六君子汤对冠心病大鼠血脂的影响

表3 芎归六君子汤对冠心病大鼠炎症因子的影响

表4 芎归六君子汤对冠心病大鼠血管内皮活性物质的影响

表5 芎归六君子汤对冠心病大鼠纤溶系统的影响

2.5 芎归六君子汤对冠心病大鼠纤溶系统的影响

与空白对照组相比，模型对照组t-PA显著降低，PAI-1显著升高，说明模型对照组纤溶功能降低，凝血功能增强。各给药组t-PA升高，PAI-1降低，与模型对照组相比差异均有显著性。芎归六君子汤组改善最为明显，优于辛伐他丁组和丹参滴丸组。

3 讨论

动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是一种以脂质沉积、纤维组织增生、炎症细胞浸润为特征的累及全身大、中动脉的慢性疾病，严重者导致急性心肌梗死或脑梗死等。脂质代谢紊乱和炎性反应贯穿于动脉粥样硬化病变过程始终。

高血脂是动脉硬化的始动因素和主要危险因素，血清胆固醇和低密度脂蛋白水平升高与动脉硬化发生呈正相关[4]。高密度脂蛋白可将胆固醇逆向运至肝脏处理，降低机体胆固醇水平，且能抗氧化和抗炎，延缓动脉硬化进程。

炎症是动脉粥样硬化的基本特征，炎症导致血管局部中性粒细胞和单核细胞浸润，脂质沉积，平滑肌细胞增殖迁移，细胞外基质合成降解紊乱及新生血管增多。炎症的活跃程度是鉴定不稳定斑块的指标之一。肿瘤坏死因子-α(TNF-α)可通过多种信号通路介导炎症反应，在炎症反应中具有核心作用地位，其表达量在一定程度上反映动脉粥样硬化的程度，并与再发心肌梗死的危险成正相关[5]。IL-6、IL-10被认为是动脉硬化的标志物[6]。C-反应蛋白(CRP)是冠心病发生事件的独立预测因子，动脉硬化不同阶段CRP的水平随之改变[7]。单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)对单核、巨噬细胞的迁移和激活起特异性调控作用，影响粥样斑块的增长及稳定性。ICAM-1是单核细胞迁移至血管内膜过程的重要诱导剂[8]。

内皮功能不全是动脉粥样硬化和冠心病发展过程中的关键步骤，炎症反应与内皮细胞功能损伤密切相关。内皮功能受损后，炎症因子释放增加，其他活性物质的分泌与释放也出现紊乱。内皮素(ET)、一氧化氮(NO)、前列环素(PGI2)、血栓素A2(TXA2)对血管舒缩功能、凝血系统及血小板聚集起平衡调节作用[9]。ET具有强烈的缩血管和促血管平滑肌细胞增殖作用。NO是能阻止动脉粥样硬化发展的内皮保护因子。PGI2是强烈的血管舒张剂和血小板聚集抑制剂，而TXA2作用正好与PGI2相拮抗。血管内皮损伤时，ET-1、TXA2释放增加，NO、PGI2减少，缩血管与凝血功能增强。

纤溶活性功能减低是急性冠脉综合征的重要病理生理基础。纤溶酶原激活物(t-PA/u-PA)能激活纤溶酶原，降解纤维蛋白。纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)能迅速与t-PA结合而使之失活，抑制纤维蛋白降解。PAI-1调节细胞黏附、迁移和增殖及凋亡等多个过程，促进动脉粥样硬化。t-PA、PAI-1活性与冠心病的临床类型和发展变化有关[10]，伴随不稳定型心绞痛病情进展，血液纤溶功能紊乱加重，斑块不稳定状态恶化。PAI-1活性与再发心肌梗死密切相关，是心肌梗死的独立危险因素。

本研究通过芎归六君子汤治疗大鼠冠状动脉粥样硬化性心脏病，结果显示，冠心病大鼠血脂和心电图ST段改善；炎症因子显著下降；血管内皮活性物质ET、TXA2降低，NO、PGI2增加；纤溶系统t-PA升高，PAI-1降低。说明芎归六君子汤对血管硬化和缺血心肌具有保护作用。

冠心病属于中医学胸痹范畴，病位在心。病机主要为心气亏虚，但多兼有气滞、痰浊和瘀血。《金匮要略·胸痹心痛短气病脉证治》曰：“胸痹，心中痞，气结在胸，胸满胁下逆抢心，枳实薤白桂枝汤主之，人参汤亦主之。”张仲景在《备急于金要方》提出：“心劳病者，补脾以益之。”现代中医名家邓铁涛教授认为，脾胃气虚，痰湿阻滞是冠心病的常见成因。沈绍功认为，冠心病的治疗应从传统的“补气活血”转到“补气祛痰”上来。徐秋[11]认为，心气虚的根源是脾气虚，临证多补脾气以促心气。王振涛[12]提出，老年冠心病患者其体质特点多为气血不足、津血同亏、脾胃和肠道功能下降。因此气血不足，痰瘀内阻是冠心病的重要病机。

六君子汤源于《医学正传》，由人参、白术、茯苓、甘草、半夏、陈皮组成，现代医学常用于治疗慢性胃炎、消化性溃疡等属于脾胃气虚者。芎归六君子汤在其基础上，加味补血活血之当归、川芎，功能健脾益气、化痰消脂、补血活血。本研究采用芎归六君子汤治疗冠心病，方中以人参、白术、茯苓和甘草增强脾胃功能，改善水谷运化，一则促进气血化生，增加心肌供血；二则消除水湿痰饮，改善脂质代谢；以半夏、陈皮化痰理气，调节血脂，改善动脉硬化；加之当归、川芎补血活血行气，改善血液高凝，促进纤溶；八药合参，共同改善血管硬化和心肌供血，与本实验结果相吻合。

该实验结果提示，补气健脾，化痰活血，能够化生气血，促进心肌供血，改善脂质代谢，缓解血液高凝，减轻血管硬化，对于冠心病治疗大有裨益。关于其治疗机制，尚有待下一步研究予以深入阐释。

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