术后序贯DC—CIK细胞治疗对局部晚期非小细胞肺癌术后生存率及免疫功能的影响

艾月琴 江龙委 赵华 高艳荣 贾绍昌

[摘要] 目的 探討分析树突状细胞（DC）、细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）治疗对局部非小细胞肺癌术后生存率及免疫功能的影响。 方法 选取2014年1月～2017年1月南京中医药大学附属八一医院收治的非小细胞肺癌术后患者40例，采用随机数字表法将其分为治疗组（22例）和对照组（18例）。治疗组患者术后采用DC、CIK细胞联合放化疗，对照组患者采用单纯辅助放化疗的方式；比较两组患者术后生存率、血清肿瘤标志物、免疫功能及不良反应情况。 结果 治疗组中位生存期与对照组比较，差异无统计学意义（P > 0.05），而无病生存期高于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。治疗后两组患者血清肿瘤标志物（CEA）及细胞角质素片段抗原21-1（CYFRA21-1）比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。治疗后治疗组患者辅助性T细胞及CD4+/ CD8+T细胞的比值与对照组比较显著上升，且治疗后治疗组T淋巴细胞rDNA转录活性显著高于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。两组患者化疗相关不良反应无明显差别，治疗组患者有3例发生DC、CIK治疗相关发热反应。 结论 对局部晚期非小细胞肺癌患者手术后序贯采用DC-CIK细胞治疗能使患者无病生存期延长，免疫功能增强，是一种安全有效的治疗方法，值得临床推广和应用。

[关键词] 局部晚期非小细胞肺癌；树突状细胞；细胞因子诱导的杀伤细胞；免疫功能；生存率

[中图分类号] R734.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2018）10（b）-0100-05

[Abstract] Objective To investigate the influence of Dendritic cell （DC） and Cytokine-induced killer （CIK） cell therapy on the survival rate and immune function of local non-small cell lung cancer. Methods From January 2014 to January 2017， in Bayi Hospital Affiliated Nanjing University of Chinese Medicine， 40 NSCLC patients were selected， they were divided into treatment group （22 cases） and control group （18 cases） by random sampling table method. The control group was treated with adjuvant chemotherapy alone， and the treatment group was treated with DC， CIK combined with chemotherapy. The postoperative survival rate， serum tumor markers， immune function， and adverse reactions of patients in two groups were compared. Results The median survival time of the treatment group was compared with the control group， the difference was not statistically significant （P > 0.05）， but the disease-free survival time of the treatment group was higher than the control group， the difference was statistically significant （P < 0.05）. After treatment， serum tumor markers CEA and CYFRA21-1 in two groups were compared， the difference was not statistically significant （P > 0.05）. After treatment， the ratio of helper T cells and CD4+/CD8+ T cells in the treatment group were significantly higher than the control group， the differences were statistically significant （P < 0.05）， and the rDNA transcription activity of T lymphocytes in the treated group was significantly higher than the control group， the difference was statistically significant （P < 0.05）. There was no significant difference in chemotherapy-related adverse effects between the two groups， in the treatment group， 3 patients with DC and CIK treatment had related fever reactions. Conclusion Sequential use of DC-CIK cells in patients with locally advanced non-small cell lung cancer can lead to clinical benefit of disease-free survival and enhanced immune function. It is a safe and effective treatment and worthy of clinical promotion and application.

[Key words] Local advanced non-small cell lung cancer； Dendritic cell； Cytokine-induced killer； Immune function； Survival rate

在全球范围内，肺癌是导致肿瘤相关死亡的首要因素，也占据了每年新发肿瘤的第一位，尤其是在男性中其发病率和死亡率均远高于其他肿瘤[1]。非小细胞肺癌（none small cell lung cancer，NSCLC）是一种主要的肺癌类型，发病率约占肺癌的85%[2]。NSCLC的病理类型有大细胞癌、腺癌、鳞状细胞癌。相比小细胞肺癌而言，其恶性程度较低，大部分患者在发现时已处于中晚期[2]。其中，局部晚期的患者的治疗方法选择是临床上的一个难点。局部晚期NSCLC是指肿瘤仅局限于肺部而无远处转移的ⅢA及ⅢB期NSCLC。手术切除是局部晚期NSCLC的重要治疗方法。近些年，随着外科技术的提高及设备的更新，越来越多的患者可以进行手术切除，术后再予以常规放化疗，其治疗效果有了长足的进步。但是局部晚期NSCLC患者总体的生存率仍不容乐观。免疫治疗是一种有潜力的治疗方法，近些年发展迅猛。树突状细胞（dendritic cell，DC）是肿瘤特异性免疫反应的始动细胞，能将肿瘤相关抗原提呈给T细胞，激活T细胞发挥抗肿瘤作用，在肿瘤免疫治疗中有重要的作用[3-4]。细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine-induced killer，CIK）是使用细胞因子体外诱导培养的一群异质性细胞，主要效应细胞為CD3+ CD56+具有NK样特征的T细胞，具有广谱抗肿瘤作用，适应性广，可联合DC使用[5]。既往的研究[6-8]显示，DC、CIK治疗肿瘤负荷较大的患者的疗效并不让人满意。因此，本课题组设计在术后肿瘤负荷小的时机进行DC、CIK治疗，利用其能对微小病灶杀伤的优点，观察其对局部晚期手术后NSCLC患者生存率、复发情况及免疫功能的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2014年1月～2017年1月南京中医药大学附属八一医院（以下简称“我院”）收治的局部晚期NSCLC患者40例，采用随机数字表法将其分为治疗组（22例）和对照组（18例）。治疗组中男13例，女9例，年龄41～77岁；大细胞癌5例，腺癌12例，鳞癌5例；ⅢA期患者15例，ⅢB期患者7例。对照组中男12例，女6例，年龄39～74岁；大细胞癌3例，腺癌11例，鳞癌4例；ⅢA期患者13例，ⅢB期患者5例。两组患者性别、年龄、病理分型及分期等一般资料比较，差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。本研究经我院医学伦理委员会批准，所有患者均签署知情同意书。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：①经病理学或细胞学诊断明确为非小细胞肺癌，根据AJCC发布的TNM分期标准分为ⅢA期或ⅢB期患者；②患者在确诊后3个月内行手术治疗，肺部病灶已切除，且手术后未行常规放化疗以外的其他针对肿瘤的相关治疗；③中性粒细胞≥1.5×109/L，KPS评分≥60分[9]，血小板≥100×109/L。排除标准：①妊娠或哺乳期女性；②艾滋病病毒（HIV）阳性、梅毒阳性；③严重自身免疫性疾病患者；④任何不可控的活动性感染；⑤对免疫治疗及相关药物过敏；⑥无法抽取血液的肿瘤患者；⑦严重精神疾病者。

1.3 主要试剂及仪器

淋巴细胞分离液购自加拿大Stemcell公司，注射用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）购自厦门特宝生物工程股份有限公司，白细胞介素-4（IL-4）及肿瘤坏死因子α（TNF-α）购自Peprotech公司。培养所用培养液为美国Corning公司产品KBM-551培养液及KBM581培养液，抗人CD3单克隆抗体（anti-CD3 mAb）购自北京同立海源公司。流式检测所使用抗体均为beckman公司产品，流式细胞仪型号为Beckman公司的Beckman Coulter XL。

1.4 DC及CIK细胞培养及鉴定

采集患者外周血单个核细胞，体外分离培养。参照文献[10]，悬浮细胞用于CIK细胞培养，贴壁细胞则用于DC的培养。两组患者回输的细胞的数量及表型的均值详见表1～2。

1.5 治疗方法

治疗前对患者行常规肺CT、血常规、心电图及肝肾功能检查，对照组患者仅进行辅助常规放化疗，并做对症处理及相关检查。治疗组患者除辅助常规放化疗外同步进行DC、CIK治疗。DC治疗方案：以单个核细胞采集当天为第0天，DC细胞分别在第7、14、21、28天分4次回输，回输方式为双侧锁骨下区、双侧腋窝及双侧腹股沟淋巴结引流区皮下注射。CIK治疗方案：以单个核细胞采集当天为CIK细胞在第8、10、12天分3次回输，回输方式为静脉回输。以4次DC及3次CIK治疗为1个治疗周期，治疗组患者至少进行一个周期的治疗。

1.6 随访及疗效评价

临床疗效评估指标为总生存期（overall surviral，OS）、无病生存期（disease free survival，PFS）及治疗前后血清肿瘤标志物癌胚抗原（carcino-embryonic antigen，CEA）和细胞角质素片段抗原21-1（cytokeratin fragment antigen 21-1，CYFRA21-1）。OS是手术之后到随访截止或患者死亡的时间。PFS是从手术之后到肿瘤复发的时间。免疫反应评估为外周血淋巴细胞亚群及T-淋巴细胞rDNA转录活性分析，采用流式细胞法检测患者外周血淋巴细胞亚群的变化，再通过KL-Ⅱ免疫图像分析系统计算淋巴细胞Ag-NORs面积与核面积的比值（IS%）。

1.7 统计学方法

采用统计软件SPSS 18.0对数据进行分析，正态分布的计量资料用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验，组内治疗前后的比较采用配对t检验。计数资料用率表示，采用χ2检验。两组之间生存率的比较采用Kaplan-meier检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 临床疗效

治疗组和对照组中位生存期分别为25个月和18个月，1年生存率分别为77.3%（17例）和83.3%（15例），2年生存率为45.4%（10例）和55.6%（10例），3年生存率为22.7%（5例）和33.3%（6例）。两组之间的OS差异无统计学意义（P > 0.05）。见图1。治疗组和对照组PES分别为（13.4±6.4）个月和（9.1±5.8）个月，治疗组显著高于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。

两组患者治疗前CEA、CYFRA21-1比较，差异均无统计学意义（P > 0.05）；两组治疗后CEA、CYFRA21-1比较，差异均无统计学意义（P > 0.05）。同时，两组组内治疗前、后CEA、CYFRA21-1比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。见表3。

2.2 免疫反应评估

两组患者治疗前淋巴细胞亚群各项差异无统计学意义（P > 0.05）。治疗后治疗组患者CD4+及CD4+/CD8+ T细胞的比值较对照组有显著上升，差异有统计学意义（P < 0.05），其余各项两组间差异无统计学意义（P > 0.05）。对照组患者治疗前后淋巴细胞亚群各项差异无统计学意义（P > 0.05），治疗组患者治疗后CD4+/CD8+T细胞的比值较治疗前有显著上升，差异有统计学意义（P < 0.05），其余各项差异无统计学意义（P > 0.05）。见表4。治疗前两组患者T淋巴细胞rDNA转录活性差异无统计学意义（P > 0.05），治疗后，治疗组显著高于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。对照组治疗前后rDNA转录活性差异无统计学意义（P > 0.05），而治疗组治疗后rDNA转录活性显著高于治疗前，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表5。

2.3 不良反应

所有行DC、CIK治疗患者中，仅有3例在回输时出现发热的不良反应，均不超过39℃，采用物理降温处理后恢复正常。

3 讨论

肺癌是当今世界上最常见的一种恶性肿瘤，NSCLC是其主要的一种类型，引发此病的因素有大气污染、电离辐射、吸烟、职业、既往肺部慢性感染、环境接触等因素，患者均有不同程度的胸部胀痛、低热、痰血、咳嗽、呼吸困难、咯血、食欲下降等临床症状[11]。外科治疗是早期肺癌的首选治疗方法。局部晚期的NSCLC，其手术治疗的指征受到很多限制，只有当肿瘤局限于局部范围之内，才适用于手术治疗。有些微小的肿瘤病灶肉眼观察不到，手术治疗往往不能达到完全切除的目的，故而局部晚期的NSCLC患者术后一般予以常规放化疗。肿瘤免疫治疗是利用机体免疫功能抑制肿瘤细胞的一种新的治疗模式，其作用机制决定了其对微小的转移灶乃至单个的肿瘤细胞都能进行有效杀伤，而且肿瘤免疫治疗对患者术后的免疫功能恢复也有一定的作用。因此，局部晚期肺癌患者术后除予以常规放化疗外，序贯免疫治疗可能是一种有利于提高患者生存率的治疗途径[12-13]。

本研究结果显示，经DC、CIK治疗的NSCLC患者中位生存期为25个月，虽略高于对照组的18个月，但差异无统计学意义。这可能是由于本研究入组患者的病例数不够多，无法产生统计学上的差异。而本研究中治疗组的无病生存期却显著高于对照组，提示DC、CIK治疗能使局部晚期NSCLC患者临床获益。同时，本研究的结果显示，经DC、CIK治疗后，局部晚期NSCLC患者的血清肿瘤标志物未产生明显变化，可能是因为肿瘤已经手术切除，而血液中的肿瘤标志物主要来源于肿瘤细胞，故DC、CIK治疗对其没有太大影响。

肿瘤患者免疫功能往往较正常人低下，而局部晚期NSCLC患者大多需要进行开放性手术。研究显示，开放性手术患者较微创手术患者术后恢复不佳，免疫功能受到显著抑制，而免疫功能的高低将直接影响患者的术后康复和远期肿瘤复发[14-16]。本研究结果显示，经DC、CIK治療的患者其免疫功能相较于对照组有显著上升，提示DC、CIK治疗能使手术后患者获得免疫功能的获益。

本课题组既往的研究都显示，DC、CIK治疗无严重不良反应[10，17-20]，本研究中22例患者均无严重不良反应出现，提示术后序贯DC、CIK治疗是安全的。

综上所述，对局部晚期非小细胞肺癌患者手术后序贯采用DC-CIK细胞治疗能使患者受到临床获益，增强免疫功能，是一种安全有效的治疗方法，值得临床推广和应用。

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（收稿日期：2018-07-02 本文编辑：苏 畅）