产ESBLs肠杆菌科细菌检测及药敏分析

刘艳洁 张灵利

ESBLs主要由肠杆菌科细菌产生, 这些酶能够水解青霉素、头胞菌素、氨曲南等β-内酰胺类抗生素, 是介导阴性杆菌对广谱β-内酰胺酶类抗菌药物耐药的主要机制之一［1,2］。随着广谱抗菌药物广泛应用, 细菌耐药性不断增加, 各地因使用的抗生素种类和习惯的不同, 产ESBLs肠杆菌科细菌分离率和耐药率可能存在明显的不同。现对本院2016年1～12月产ESBLs菌株的菌谱分布情况和细菌耐药情况进行统计分析, 为临床医生抗感染治疗提供有力的理论依据。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1标本来源 所有标本均来自本院2016年1～12月住院患者送检的各种标本。

1.1.2培养基 5%兔纤维血培养基、麦康凯琼脂、巧克力琼脂、M-H培养基均购自温州康泰有限责任公司。

1.1.3鉴定及药敏试条 自动化鉴定及药敏板购自上海星佰生物技术有限公司；药敏纸片购自北京天坛。

1.1.4质控标准菌株 金黄色葡萄球菌ATCC29213、大肠埃希菌ATCC25922、铜绿假单胞菌ATCC27853均购自卫计委药品和生物制品检定所。

1.2方法

1.2.1室内质控 微生物人员、仪器和设备、平板、鉴定及药敏试条和纸片均在质控范围之内。

1.2.2将送检标本立即接种于血平板、麦康凯、巧克力平板培养基, 36℃、5%～7% CO2、24～48 h, 分离出可疑菌落。

1.2.3用上海星佰BIOJOSUN-Ⅱ微生物鉴定药敏分析仪进行细菌鉴定及药物敏感试验。

1.2.4对仪器提示为产ESBLs的菌株, 用纸片协同法进行ESBLs的确证试验。细菌培养鉴定和药敏试验严格按全国临床检验操作规程(第4版)进行［3］。

1.2.5细菌鉴定及药敏试验结果通过WHONET5.6进行统计。

2 结果

2.1细菌分离率 2016年1～12月共检出大肠埃希菌677株,其中产ESBLs237株, 占 35.0%；检出克雷伯菌属276株,产ESBLs116株, 占42.0%；检出变形杆菌46株, 其中产ESBLs20株, 占 43.5%。

2.2产酶株与非产ESBLs株耐药率 产ESBLs的大肠埃希菌为237株, 对哌拉西林的耐药率为98.0%, 对哌拉西林/他唑巴坦的耐药率为22.6%, 对头孢吡肟的耐药率为78.9%, 对头孢他啶的耐药率为82.6%, 对美罗培南的耐药率为1.5%, 对亚胺培南的耐药率为1.2%, 对庆大霉素的耐药率为50.6%, 对环丙沙星的耐药率为80.5%, 对阿米卡星的耐药率为28.6%。非产ESBLs的大肠埃希菌为440株, 对哌拉西林的耐药率为78.9%, 对哌拉西林/他唑巴坦的耐药率为14.3%, 对头孢吡肟的耐药率为20.5%, 对头孢他啶的耐药率为30.7%, 对美罗培南的耐药率为0.5%, 对亚胺培南的耐药率为0.5%, 对庆大霉素的耐药率为41.2%, 对环丙沙星的耐药率为39.9%, 对阿米卡星的耐药率为2.3%。产ESBLs的肺炎克雷伯菌为116株,对哌拉西林的耐药率为89.1%, 对哌拉西林/他唑巴坦的耐药率为14.8%, 对头孢吡肟的耐药率为70.5%, 对头孢他啶的耐药率为80.4%, 对美罗培南的耐药率为1.8%, 对亚胺培南的耐药率为0.7%, 对庆大霉素的耐药率为59.7%, 对环丙沙星的耐药率为45.1%, 对阿米卡星的耐药率为21.8%。非产ESBLs的肺炎克雷伯菌为160株, 对哌拉西林的耐药率为49.4%,对哌拉西林/他唑巴坦的耐药率为9.6%, 对头孢吡肟的耐药率为30.2%, 对头孢他啶的耐药率为40.3%, 对美罗培南的耐药率为0, 对亚胺培南的耐药率为0, 对庆大霉素的耐药率为25.4%, 对环丙沙星的耐药率为26.6%, 对阿米卡星的耐药率为9.3%。根据药敏试验结果显示, 产酶株比非产酶株的耐药率高。

3 讨论

ESBLs主要由肠杆菌科细菌产生, 大多为质粒介导的ESBLs, 往往是由普通的β-内酰胺酶基因(TEM-1、TEM-2、SHV-1)突变而来［4］。这些酶能够水解青霉素、头胞菌素、氨曲南等β-内酰胺类抗生素。随着广谱抗菌药物广泛应用于临床, 产ESBLs菌株越来越多。由于ESBLs的编码基因位于质粒上, 可通过接合、转化和转导、转移、转整、转座等形式使耐药基因在细菌间传递, 易造成耐药菌的流行, 从而导致严重医院内交叉感染［5］。ESBLs可以通过接合、转化和转导等形式使耐药基因在细菌中扩散, 从一个细菌传递到另一个细菌, 甚至在不同的菌种之间传递。三代头孢菌素能够诱导肠杆菌科细菌产生ESBLs, 本院三代头孢菌素使用已非常普及, 对头孢菌素类耐药率都非常高, 可能与这些药物为本院常规用药, 诱导产生耐药有关。以往认为ESBLs主要由克雷伯菌和大肠埃希菌产生, 现研究发现其他肠杆科细菌有明显上升趋势。第三、四代头孢菌素对产ESBLs菌株即使体外敏感, 也不能用于临床治疗［6-9］。目前认为可用于治疗产ESBLs菌引起感染的药物有：碳青霉烯类抗生素、头霉烯类抗生素、阿米卡星及广谱头孢菌素/β-内酰胺酶抑制剂。

随着广谱抗菌药物的大量应用, 细菌耐药性越来越严重,控制耐药菌株流行刻不容缓, 做好细菌耐药性监测, 及时切断传播途径, 加强抗生素的合理使用及管理, 对有效控制产ESBLs菌株的流行将起到至关重要作用。因此, 实验室对革兰阴性杆菌ESBLs检测显得更加重要, 对ESBLs检测应扩展到肠菌科所有阴性杆菌, 需引起临床和临床微生物检验工作人员的重视。

［1］ 金辉, 赵旺胜, 翁幸鐾, 等 .2006—2008年大肠埃希菌耐药基因的研究.中华医院感染学杂志, 2011, 21(24):5107-5110.

［2］ 李耘, 吕媛, 王珊.2010年度卫生部全国细菌耐药监测报告:非发酵革兰阴性杆菌耐药监测.中华医院感染学杂志, 2011,21(24):5133-5137.

［3］ 叶应妩, 王毓三.全国临床检验操作规程.南京:东南大学出版社, 1997:472-531.

［4］ 符永玫, 张永标, 席云, 等 .产 ESBLs肺炎克雷伯菌的流行状况与药敏谱调查.中国卫生检验杂志, 2010, 20(2):402-403.

［5］ 黄彬, 陈茶, 汤晓丽, 等.肺炎克雷伯菌对喹诺酮类及氨基糖苷类耐药基因检测及耐药机制分析.中华医院感染学杂志,2011, 21(1):5-7.

［6］ 李玉梅, 安宏志.产ESBLs肠杆菌科细菌检测及药敏分析.中外健康文摘, 2014(15):60-61.

［7］ 王卓, 王雨新, 陈强, 等 .产 ESBLs肠杆菌科细菌的检测及耐药性.中国微生态学杂志, 2016, 28(5):564-566.

［8］ 周勇, 张晶, 陶霞, 等 .广州市健康人群肠道携带产ESBLs肠杆菌科细菌的耐药分析.中国卫生检验杂志, 2014(14):2104-2107.

［9］ 王喜仁, 薛峰, 朱月秋, 等.肠杆菌科细菌中产超广谱 β-内酰胺酶菌株的检测及药敏分析.中国抗生素杂志, 2003, 28(12):730-732.