ATP7B、Kiss-1、Skp2在CIN及子宫颈癌中的表达和意义

段旭艳

（菏泽医学专科学校，山东 菏泽 274000）

子宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤，子宫颈上皮内病变（Cervical intraepithelial neoplasia,CIN）发展为宫颈鳞癌（Squamous cell carcinoma of cervix,SCC）一般10～15年，早期诊断和治疗CIN可明显降低宫颈鳞癌的发病率。研究发现，肝细胞癌组织中P型铜转运ATP酶β链（ATP7B）阳性表达率显著升高[1]。Kiss-1基因一种肿瘤转移抑制基因[2]。Skp2是一种原癌基因。为此，我们自2014年3月—2015年6月间采用组织芯片技术及免疫组化SP法检测ATP7B、Kiss-1及Skp2在子宫颈不同病变组织中的表达情况，分析三者在SCC发生、发展中的作用及相互关系。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料（1）标本材料：手术切除及活检的子宫颈组织标本196例，制成组织芯片，有效样本175例：正常子宫颈24例，CINⅠ34例，CINⅡ36例，CINⅢ33例，SCC 48例。（2）仪器与试剂:病理切片机为德国ZEISS，光学显微镜为日本OLYMPUS。ATP7B抗体（bs-1718R）和Kiss-1抗体(bs-0749R)购自北京博奥森生物技术公司；SP试剂盒(sp-9000)、Skp2抗体购自北京中杉生物技术公司。

1.2 实验方法 制作组织芯片[3](图1），用免疫组化方法（SP法）检测ATP7B、Kiss-1及Skp2在正常宫颈组织、CIN及SCC中的表达。免疫组化结果判定：ATP7B和Kiss-1定位于细胞质，Skp2定位于细胞核，镜下以细胞质或细胞核内出现棕黄色细颗粒为阳性信号。根据Beesley[4]分级方法:随机选取5个高倍视野，计算阳性细胞数及细胞染色深浅进行评价：阳性细胞数＜10%为（－）、11%～25%为（+）、26%～75%为（++）、≥75%为（+++）。

1.3 统计学处理 应用SPSS17.0软件所获数据采用χ2检验和Spearman等级相关分析。

2 结果

2.1 子宫颈鳞癌组织中ATP7B、Kiss-1及Skp2的表达与年龄、肿瘤大小、分化程度、临床分期、淋巴结转移情况之间的关系 ATP7B的表达与年龄、肿瘤大小、分化程度的相关性P＞0.05，在SCCⅡ期中的表达高于Ⅰ期（P＜0.05)，在SCC有淋巴结转移患者中的表达高于无转移的患者(P＜0.05)，见表1。

2.2 ATP7B的表达 正常子宫颈中，ATP7B不表达或弱阳性（图2）。从CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ（图3、4）到SCC（图5），ATP7B的表达逐渐增加。ATP7B在SCC及CINⅢ、CINⅡ中的表达均高于正常宫颈及CINⅠ组，P＜0.05，在SCC与CINⅢ比较，P＞0.05；在正常宫颈与CINⅠ比较，P＜0.05。见表2。

2.3 Kiss-1的表达 从正常子宫颈（图6）、CIN（图7）到 SCC（图 8），Kiss-1 的表达逐渐降低(P＜0.05)。Kiss-1在SCC和各级别CIN中的表达均低于正常子宫颈(P＜0.05)；Kiss-1在SCC中的表达低于各级别CIN(P＜0.05)；从CINⅠ、CINⅡ到CINⅢKiss-1逐渐降低(P＜0.05)。见表2。

2.4 Skp2的表达 在正常宫颈中Skp2无表达（图9），从CIN（图10）到SCC（图11）中表达强度逐渐增加。Skp2在SCC及CINⅢ、CINⅡ中的阳性表达率均高于正常子宫颈组织及CINⅠ(P＜0.05)，在SCC与CINⅢ之间P＞0.05，在正常子宫颈与CINⅠ之间比较P＜0.05，Skp2的表达在各级别CIN之间P＜0.05，随级别增加表达增强。见表2。

2.5 子宫颈鳞癌中ATP7B、Kiss-1及Skp2表达的相关性 三者的表达无显著相关性(P＞0.05)。rATP7B与Kiss-1＝-0.856，rATP7B与 Skp2＝0.361，rSkp2与Kiss-1＝-0.309。见表3、4。

Kiss-1的表达与年龄、肿瘤大小、分化程度的相关性P＞0.05。在SCCⅡ期患者中的表达低于Ⅰ期(P＜0.05)；Kiss-1在淋巴结有转移的SCC患者中的表达低于无转移的患者(P＜0.05)见表4。Skp2的增高与淋巴结转移、临床分期、分化程度、肿瘤大小、年龄之间P＞0.05，见表4。

图1 石蜡组织芯片

图2 ATP7B在正常宫颈鳞状上皮中的表达

图3 ATP7B在CINⅡ中的表达

图4 ATP7B在CINⅢ中的表达

图5 ATP7B在宫颈鳞癌中的表达

图6 Kiss-1在正常宫颈鳞状上皮中的表达

图7 Kiss-1在CINⅡ中的表达

图8 Kiss-1在宫颈鳞状细胞癌中的表达

图9 Skp2在正常宫颈鳞状上皮中的表达

图10 Skp2在CINⅢ中的表达

图11 Skp2在宫颈鳞状细胞癌中的表达

表1 Kiss-1、ATP7B、Skp2与子宫颈鳞癌临床指标的相关性

表2 ATP7B、Skp2和Kiss-1在宫颈不同病变组织中的表达

表3 ATP7B与Kiss-1在宫颈鳞癌中表达的相关性

表4 ATP7B、Kiss-1与Skp2在宫颈鳞癌中表达的相关性

3 讨论

CIN是子宫颈鳞癌（SCC）的癌前疾病，分CINⅠ、CINⅡ和CINⅢ。CINⅠ病变的自然消失率为60%，CINⅡ和CINⅢ消失率明显低于CINⅠ，癌变率显著升高。故早期发现CIN及SCC，对于指导SCC临床治疗和判断预后有重要意义。

ATP7B在肝脏转运铜，Wilson患者ATP7B的8、13号外显子突变[5]。有研究发现喉癌耐药细胞Hep-2/v的ATP7B表达明显高于Hep-2细胞[6]。本研究发现：ATP7B在SCC及CINⅢ、CINⅡ中的阳性表达率均高于正常宫颈及CINⅠ组，P＜0.05；在正常宫颈与CINⅠ之间P＜0.05。表明ATP7B在正常宫颈向CIN、SCC发生发展过程中可能发挥了促进作用。检测ATP7B有助于准确判断CIN的分期，还有助于鉴别诊断CIN及SCC。本研究还发现ATP7B的表达与临床分期、淋巴结转移情况之间有显著相关性(P＜0.05)，提示ATP7B的过表达与SCC的浸润和转移有关，检测ATP7B对于指导SCC临床化疗用药、对病情发展和预后评价有重要意义。

Kiss-1是一种肿瘤转移抑制基因,在结直肠癌细胞中,Kiss-1的过表达能有效地抑制肿瘤细胞的浸润和转移[7]。Kiss-1蛋白在子宫内膜样腺癌中的表达明显低于正常子宫内膜组,在子宫内膜癌中随着侵袭程度增加,Kiss-1蛋白的阳性表达率下降[8]。本研究显示：Kiss-1在SCC及各级别CIN中的表达均低于正常宫颈，P＜0.05，差异具有显著性。Kiss-1在SCC明显低于各级别CIN中表达(P＜0.05)；各级别CIN之间有显著性差异(P＜0.05)，随级别增加表达减低。这印证了抑癌基因的失活在肿瘤发生中起促进作用。检测Kiss-1有助于了解SCC的发病机制，还能对CIN病变进行更客观准确的分级。另外即Kiss-1的表达与临床分期、淋巴结转移情况之间有显著相关性(P＜0.05)，提示Kiss-1的低表达促进SCC的浸润和转移，Kiss-1有望作为SCC浸润转移的标志物。

在ATP7B与Kiss-1的相关性分析中，发现两者无相关(P＞0.05)。因此还不能确定Kiss-1表达降低与ATP7B的表达增加在肿瘤浸润和转移中有协同作用，还需要更深入的研究。

Skp2是一种调节细胞周期的激酶相关蛋白,它通过对多种靶蛋白的泛素化降解作用而参与细胞周期的调控,其功能的改变与肿瘤的发生、发展及预后密切相关[9]。研究发现Skp2在前列腺癌紫杉醇耐药细胞高表达[10]。Skp2在乳腺肿瘤中与肿瘤分化程度、组织学分级和肿瘤转移有关[11]。过表达Skp2的乳腺癌细胞较对照组生长速度明显加快,S期细胞显著增多[12]。本研究发现Skp2在SCC及CINⅢ、CINⅡ中的阳性表达率均高于正常宫颈鳞状上皮及CINⅠ组，P＜0.05；在正常子宫颈与CINⅠ之间也是P＜0.05。各级别CIN之间Skp2的表达也存在显著性差异，P＜0.05。可认为Skp2在正常子宫颈上皮转变为CIN、SCC的过程中起促进作用。Skp2的增高与淋巴结转移、临床分期、分化程度、肿瘤大小、患者年龄之间P＞0.05，无显著相关性。子宫颈鳞癌中ATP7B 、Kiss-1及Skp2的表达之间P＞0.05，无显著相关性，不支持它们在子宫颈鳞癌的发生、发展中起协同作用。

单独检测ATP7B、Kiss-1、Skp2这3项指标有助于CIN的准确分级及各级CIN与宫颈鳞癌的鉴别诊断。检测ATP7B、Kiss-1这两项指标有助于深入了解宫颈鳞癌的浸润、转移机制，还可为宫颈鳞癌的临床治疗制定更合理的方案提供理论参考。

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