酶联免疫吸附法与甲苯胺红不加热血清试验在梅毒检验中应用价值比较

郭姝君，陈言伟，秦晓燕

(1.平煤神马医疗集团总医院检验科，河南 平顶山 467000；2.解放军第一五二医院检验科)

梅毒的病原体为梅毒螺旋体，传播途径以性传染、母婴传染多见，疾病感染性强、危害性大，是一种慢性传染疾病，感染后会对患者全身性器官、组织造成功能性损害，近几年相关数据显示疾病发病率明显上升[1]。此病传染快速，若未及时诊治不仅影响患者生活质量，对社会发展也会造成严重影响，因此，有效选择梅毒抗体检测试剂对提高疾病诊断准确度、及时治疗有重要意义。目前临床公认梅毒螺旋体明胶颗粒凝集法(TPPA)是疾病诊断金标准，但其试剂盒较为昂贵，无法广泛用于基层临床检验[2]。酶联免疫吸附法(ELISA)、甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)是目前临床梅毒检查较为常用的检测方法，本次对这两种检测方法疾病诊断准情况进行分析，现报告如下。

1 资料与方法

1．1 一般资料

回顾性分析2015年7月至2016年9月期间入我院进行梅毒感染检查的414例受检者，按检测方法分为ELISA组和TRUST组，男184例，女230例，年龄25～54岁，平均(37.2±4.5)岁，其中孕妇64例；以TPPA结果为金标准，其中264例确诊为梅毒患者，150为正常者，研究经伦理委员会批准，取得患者知情同意。

1.2 方法

1.2.1 仪器和试剂

检测仪器有：微量加样器(深圳汇松科技有限公司)、ELISA仪器(上海舜百生物科技有限公司)、SM800多功能酶标仪(北京东力环宇电子科技有限公司)、FS-1高速匀浆器(常州市金坛区环宇科学仪器厂)、离心机、恒温箱、振荡器。检测所用试剂：ELISA试剂盒(上海舜百生物科技有限公司)、TRUST试剂盒(上海荣盛生物药业有限公司)。

1.2.2 检测方法

研究对象入院后次日清晨空腹采集静脉血3～5mL，放置于抗凝管中，以离心机进行离心处理，参数为3000r/s，离心10min，取血清置于4℃冰箱中保存，检验时提前从冰箱中取出放置至室温。将血清样本加入样板条孔中，进样量为50μL，并在恒温箱中以37℃培养1h，后在所有对照孔内加入酶标记物，量为50μL并使用振荡器混合均匀，后在恒温箱中培养30min，温度设定为37℃。洗板后在对照孔中加50μL底物缓冲液，并使用振荡器混合均匀，室温下培养30min，最后在样板孔中加终止液50μL，混合均匀后用酶标仪读数。TRUST组将血清在卡片圆圈中涂布，在涂抹均匀后摇匀抗原液，通过试剂盒上提供的针头滴加1滴抗原液，将卡片置于脱色摇床中，以100r/min进行振荡8min后，在亮光下进行观察，所有操作严格按照试剂盒说明进行。

1.3 观察指标

对两种不同检查方法疾病检测阳性率情况进行比较，评价两组检验效能(灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值)，灵敏度=真阳性/(真阳性+假阴性)×100%，特异度=真阴性/(真阴性+假阳性)×100%，阳性预测值=真阳性/(真阳性+假阳性)×100%，阴性预测值=真阴性/(真阴性+假阴性)×100%。

1.4 统计学方法

本研究采用SPSS 16.0统计软件进行数据处理。计数资料比较采用χ2检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两种检测梅毒阳性率情况统计

TRUST组检查阳性率为54.3%(225/414)，低于ELISA组63.0%(261/414)；通过金标准得知，ELISA组疾病诊断准确度为98.9%(261/264)明显高于TRUST组85.2%(225/264)，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 疾病检查诊断准确性比较

2.2 两种方法梅毒检验效能情况

ELISA组较TRUST组在灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值上准确度高(P<0.05)，见表2。

表2 两种方式检验效能比较情况[n(%)]

3 讨 论

梅毒早期临床表现复杂、多样，是常见的全身性传染性疾病，疾病以母婴传播、血液接触、间接接触、性传播主要感染途径，一旦感染病毒会造成患者全身多器官、组织系受损，引发多器官功能障碍，给患者身心健康造成严重困扰[4]。疾病早期患者无明显病症，因此仅通过表征无法对疾病进行准确诊断，临床多通过血清学对患者检测，有学者研究发现患者感染后，体内会产生抗螺旋管体的特异性抗体，以及抗心磷脂的非特异性抗体[5]。目前临床疾病检查多是对特异性、非特异性抗体进行联合检测来判断疾病，TRUST法为非特异性检测，其通过测定患者血清中心磷脂抗体，来判断疾病。此法操作简单、便捷，可广泛用于基层检查、试剂盒价格相对低廉，但由于非特异性抗体检出时间较晚，因此对早期、潜伏期疾病患者检出率较低[6]。有学者提出使用ELISA法检查疾病准确度高，其为特异性检测，通过酶标板孔将病菌特异性抗原进行包被，并使用双抗原夹心法对患者血清中抗体进行检测，从而避免主观性缺点，同时使用酶标仪进行读数提高检出率[7]。

本次研究发现ELISA组梅毒诊断阳性率、准确度高于TRUST组；同时两种检查方式检验效能比较，TRUST法灵敏度为80.7%、特异度为92.0%、阴性预测值为73.0%、阳性预测值94.7%，明显低于ELISA组98.1%、98.7%、96.7%、99.2%，差异具有统计学意义(P<0.05)。结果表明ELISA法检测梅毒感染准确度高于TRUST法，我们推测TRUST法检测抗原为心磷脂类，而心磷脂同时存在与机体其他组织中，对于有自身免疫性疾病者，如肝炎、肺结核、关节炎等均可产生抗心磷脂抗体，因此临床出现漏诊、误诊几率较高，此结果与国内相关报道一致[8]。而ELISA法能检测特异性抗体，包括血清中梅毒抗体IgG、IgM，且其酶纯度高、专一性强、催化反应转化率高、性质稳定、灵敏度高，此方式既有高特异性又有高敏感度，所以检出率高[9]。但本次研究中仍有1.1%出现漏诊，我们推测这是由于其操作较为复杂，以及样本中梅毒抗体浓度过高、过低等因素导致。

综上所述，临床在对梅毒感染者进行检测时，采用ELISA法、TRUST法均有较高的检出率，但前者诊断准确度优于后者，出现漏诊、误诊情况少。

[1]孙红,朱安友,郭普，等.TP-ELISA、TRUST和TPPA联合检测在梅毒诊断中的应用[J].蚌埠医学院学报,2015,40(10):1392

[2]陈彬,徐克,林小敏，等.81946例住院患者梅毒抗体检测结果分析[J].中华传染病杂志,2013,31(8):479

[3]孟保福,宋红林,李翠芬.ELISA法在诊断梅毒螺旋体感染中的临床检验价值[J].中华医院感染学杂志,2016,26(20):4611

[4]梁服泉,朱秀兰,彭健华.酶联免疫吸附法检测与甲苯胺红不加热血清试验在梅毒检验中应用对比[J].中国实用医药,2016,11(13):20

[5]谢小平,刘双全,吴移谋.3种常用梅毒血清学检测方法的比较[J].南华大学学报(医学版),2010,38(5):679

[6]邵先兵,张燕,张娜.酶联免疫吸附试验、梅毒螺旋体颗粒凝集试验及甲苯胺红不加热血清试验在梅毒检测中的检验效能评价[J].中国性科学,2015,24(5):49

[7]吴晓红.酶联免疫吸附法与甲苯胺红不加热血清试验在梅毒检验中应用价值的比较[J].检验医学与临床,2016,13(1):212

[8]胡志刚,刘洁,叶燕，等.抗心磷脂抗体IgG时间分辨荧光免疫分析法的建立[J].中国实验诊断学,2012,16(1):16

[9]郭家权,洪敏,林永前.酶联免疫吸附法检测与甲苯胺红不加热血清试验在梅毒检验中应用价值的比较[J].广东医学,2014,35(5):738