凋亡抑制因子Livin和Survivin在大肠癌组织中的表达和意义*

盛文文

(皖西卫生职业学院，安徽 裕安 237005)

大肠癌的发生和发展是多因素共同作用的结果，包括抑癌基因的失活，原癌基因突变及染色体稳定性的改变等[1]。Livin和Survivin是近年来新发现的凋亡抑制因子，同属凋亡抑制蛋白LAP家族[2]，研究发现Survivin具有双重作用，既有调节细胞增殖作用，又具抑制细胞凋亡作用[3]。本研究应用免疫组化SP法检测了大肠癌组织、大肠肿瘤组织及正常组织中Livin和Survivin表达，探讨其临床意义，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2016年某院72例病理诊断确诊的大肠癌患者，其中男41例，女31例，年龄38～79岁，平均(62.4±13.8)岁；均行根治性和姑息性手术切除，患者标本留取前均未进行放化疗；11份大肠正常组织取肿瘤切缘15cm外经病理证实无癌组织，11例大肠良性肿瘤组织，手术切除后立即放入液氮中，并在60min后放入-80℃冰箱冷冻保存待检测。

1.2 检测方法

1.2.1 检测试剂

免疫组化试剂盒(北京中杉金桥技术有限公司)，SP系列试剂盒(美国ZYMED公司)；一抗鼠抗人 Livin单克隆抗体(美国Imgenex公司)，鼠抗人 Survivin 单克隆抗体(福州迈新生物技术开发公司)。

1.2.2 检测方法

采用免疫组化SP法检测72份大肠癌组织、11例大肠良性肿瘤组织和11份大肠正常组织中Livin和Survivin蛋白，严格按试剂说明书步骤操作，阴性对照以 PBS 缓冲液分别代替一抗。

1.3 结果判定

Livin和Survivin一般表达于胞浆和胞核。HE染色蜡块切片判断标本性质。结果采用半定量法，由两名经验丰富的病理医师独立评分。①染色细胞计数评分：显微镜下每个视野100个细胞，计数5个视野中染色阳性细胞比例，并按比例评分。显色细胞占总细胞数≤ 5%计0分；占5%～25%计1分；占25%～50%计2分，占50%～75%计3分，占75%～100%计4分。②染色细胞深浅评分：光镜下排除非特性染色，以切片中细胞染色的深浅计分，即无色、黄、棕黄、棕褐色分别计0～3分。③计算每个标本染色积分：染色积分=染色细胞计数评分×染色细胞深浅评分。④阳性和阴性判定标准：阴性标准为标本染色积分≤ 1；阳性标准为标本染色积分> 1。

1.4 统计学方法

2 结 果

大肠癌组织Livin和Survivin表达率明显高于大肠良性肿瘤和大肠正常组织，差异有统计学意义(P<0.05)。大肠癌DukesA、B、C、D期标本Livin表达率差异无统计学意义(P>0.05)。Survivin表达率随Dukes分期增加而增加，不同Dukes分期表达率比较差异有统计学意义(P<0.05)。详见表1、表2。

表1 大肠癌、良性肿瘤及大肠正常组织Livin和Survivin表达情况比较[n(%)]

表2 不同Dukes分期大肠癌标本Livin和Survivin表达[n(%)]

3 讨 论

凋亡抑制因子在肿瘤组织中的表达及意义的研究一直受到临床的关注，其中研究的方向主要集中在内源性细胞凋亡抑制物上，如Bcl- 2家族、LAP家族及ODD家族等。而对于新发现的LAP家族成员Livin和Survivin的研究则起步较晚阶段，也是临床研究的热点。目前对Survivin蛋白的研究取得了明显的进展，发现其在胚胎组织早期中有一定的表达，而在健康机体终末分化组织中为零表达[4]。Livin的发现晚于Survivin，因此Livin蛋白在肿瘤组织中的表达及意义值得探索。郑国文[5]研究显示，Survivin在肿瘤组织中的阳性表达率为70%，Livin在肿瘤组织中阳性表达为75%，均高于癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.05)。认为其与恶性肿瘤的发生和进展关系密切。

现代医学认为肿瘤的发生、发展一方面是由于细胞分裂失控，周期发生紊乱而无限期的增殖，另一方面是由于细胞凋亡不足所致。本研究应用免疫组化SP法检测了72份大肠癌组织标本、11例大肠良性肿瘤组织标本和11例正常大肠组织标本中凋亡抑制因子Livin和Survivin蛋白表达。结果显示大肠癌组织Livin和Survivin表达率明显高于大肠良性肿瘤组织，差异有统计学意义(P<0.05)。Livin和Survivin在大肠正常组织中均无表达，与郑国文[5]研究相符。本研究进一步对不同大肠癌Dukes分期标本进行了检测，结果显示，Dukes A、B、C、D期标本Livin表达率差异无统计学意义，而Survivin表达率随Dukes分期增加而增加，不同Dukes分期表达率差异有统计学意义(P<0.05)。说明Livin与Survivin一样，在肿瘤的发生和发展中起着重要作用，同时说明在肿瘤组织中Survivin的表达呈渐进性，与肿瘤的进展呈正相关。

Livin与Survivin均具有Caspases抑制活性，且都含有一个或多个BIR结构域的胞内蛋白[6-8]，两因子有许多共性，在正常组织→良性肿瘤→恶性肿瘤的发生中均起着重要作用，使正常组织异常分化至癌组织。提示两种因子可作为新的肿瘤标志物，而且可能是潜在的治疗靶点，随着两种因子作用机制研究的深入，可开辟大肠癌生物治疗的新途径。但两种因子也存在差异，可能是促凋亡的途径、原理和作用机制不同。前者在不同Dukes分期中大肠癌中的表达基本相同，说明Livin表达与预后无关；而后者随着Dukes分期的升高而升高，可作为预后和治疗敏感性预测的指标。

[1]刘玲丽.星形胶质瘤患者癌组织中S100、Survivin和Ki-67表达及其临床意义[J].中国老年学杂志，2014，34(18):5073

[2]马广友，李俊杰，邵珠福，等.大肠癌凋亡抑制蛋白表达与奥沙利铂化疗敏感性的相关性[J].中国老年学杂志，2014，34(4):876

[3]曲贝贝，左金华，朱玉红，等.Survivin 和 PDCD5在黏液表皮样癌组织中的表达及临床意义[J].实用口腔医学杂志，2016，32(2):225

[4]魏琳琳，王蕊，关淑梅，等.老年子宫内膜样腺癌患者癌组织中Cirpto-1、Survivin和基质金属蛋白酶-14表达及意义[J].中国老年学杂志，2014，34(17):4764

[5]郑国文.大肠癌中Livin和Survivin的表达及相关性研究[J].实用医院临床杂志，2014，11(2):86

[6]崔忠，赵清涛，孙建斌，等.肝细胞癌患者癌组织中survivin、PTEN、EGFR表达水平及临床意义[J].空军医学杂志，2017，33(1):30

[7]郭晓东，杨美，余灵祥，等.Caspase-9和Survivin在肝细胞癌患者癌组织中的表达[J].肝脏，2014，16(9):661

[8]王海莹，金美善，马洪喜，等.甲状腺乳头状微小癌中survivin、galectin-3、TPO蛋白表达与BRAFV600E基因突变关系的研究[J].中国免疫学杂志，2014，30(11):1462