miR-586对骨肉瘤的诊断价值研究

魏冀荣

miR-586对骨肉瘤的诊断价值研究

魏冀荣

目的探讨miR-586对骨肉瘤的诊断价值，为该指标在诊断骨肉瘤的应用上提供理论依据。方法选取接受手术治疗的35例骨肉瘤患者作为病例组，同时选取35例健康人群作为对照组。对比两组受试者的血清miR-586的检测结果；对比病例组患者骨肉瘤瘤体组织和周围正常骨组织的miR-586的检测结果；通过Pearson相关性分析检验骨肉瘤瘤体组织中miR-586表达与血清miR-586表达的相关性；通过ROC曲线分析两组受试者的血清miR-586检测结果，评估血清miR-586对骨肉瘤的诊断价值。结果病例组miR-586的检测结果为(1.43±0.52)，均显著高于对照组(P<0.05)；骨肉瘤瘤体组织miR-586的检测结果为(5.38±0.31)，显著高于正常骨组织miR-586的检测结果(P<0.05)；Pearson相关性分析结果显示，骨肉瘤瘤体组织中miR-586表达与血清miR-586表达呈正相关关系(γ=0.912，P<0.05)；ROC曲线分析结果显示，血清miR-586诊断骨肉瘤的曲线下面积为0.879，0.952为最佳筛查阳性界值，血清miR诊断骨肉瘤的敏感度和特异度均为85%。结论骨肉瘤患者血清以及瘤体组织的miR-586水平显著升高，两者呈正相关的关系。血清miR-586水平的检测对临床诊断骨肉瘤有一定的参考价值。

miR-586；骨肉瘤；诊断价值

骨肉瘤是较为常见的恶性骨肿瘤，好发于20岁以下人群，研究调查显示，骨肉瘤的发病率约0.4‰[1]，且本病的恶性程度高，严重威胁患者的健康和生命。目前临床治疗主要以肿瘤组织学分级为根据，制定针对性的治疗方案，以新辅助化疗联合手术治疗为主[2]。近年来，随着临床研究的深入，新辅助化疗方案的不断改进，提高了骨肉瘤的临床治疗效果，改善患者的预后。肿瘤细胞的转移以及化疗抵抗是影响临床疗效和患者预后的重要因素[3]，因此，早期的诊断是提高骨肉瘤临床治疗效果的关键。寻找理想的血清学治疗作为骨肉瘤的早期诊断和预后判断的依据是目前临床研究的重要方向。目前已经有研究指出microRNAs与骨肉瘤的发生和发展有关[4]。本研究探讨miR-586对骨肉瘤患者的诊断价值，为该指标在诊断骨肉瘤的应用上提供理论依据，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取自2014年1月到2016年12月期间住院接受手术治疗的骨肉瘤患者35例作为病例组，同时选取同期接受体检的健康人群35例作为对照组。病例组中，男性19例，女性16例，患者年龄20～45岁，平均年龄为(26.42±7.35)岁；对照组中，男性18例，女性17例，受试者年龄20～47岁，平均年龄为(25.24±6.97)岁。两组受试者的性别、年龄的对比，差异均没有统计学意义(P均>0.05)，具有可比性。本研究所有受试者均签署知情同意书，同意纳入本研究，同时本研究通过医院伦理委员会的批准。

1.2 纳入和排除标准

参照《SEOM clinical guidelines for the treatment of osteosarcoma in adults》[5]中的标准进行诊断。病例组所有患者均根据其临床症状、体征、影像学检查结果及病理学诊断结果，明确骨肉瘤的临床诊断。同时排除术前已经接受化疗、放疗等其他抗肿瘤治疗的患者；排除合并消化道肿瘤、白血病等其他可影响miR-586检测结果疾病的患者。

1.3 研究方案

病例组患者在术前新辅助化疗前，对照组在体检时，在清晨空腹状态下，采用肝素抗凝管采集外周静脉血2 ml后，立即送至医院检验科。将200 μl全血分装于内含研磨珠和Trizol的冻存管中，经过充分震荡后，将检测标本置于-80 ℃的环境内保存待测。收集患者手术切除的骨肉瘤瘤体组织标本及其周围正常骨组织标本，将上述组织标本保存于液氮内。根据RNA提取试剂盒说明书的要求操作，提取总RNA。总RNA的浓度和纯度采用紫外线分光光度计进行测定，总RNA的完整性采用电泳进行检测并将其保存在-80 ℃的环境中。根据反转录试剂盒说明书的要求进行操作，配制逆转录反应体系。由1 μL的总RNA，4 μL的反转录缓冲液(5×)，1 μL的反转录酶，以及14 μL的Rnase Free水共同组成20 μL的逆转录反应体系。在37 ℃ 1 h，95 ℃ 5 min的反应条件下，将RNA逆转录为cDNA。实时荧光定量聚合酶链式反应采用miScript SYBR Green PCR kit进行检测，根据其说明书的要求进行操作，配制反应体系。以95 ℃ 5 min预变性，变性和延伸95 ℃ 10 s，60 ℃ 20 s，72 ℃ 20 s，共40个循环，荧光收集78 ℃ 20 s作为反应条件。内参采用管家基因U6，miR-586相对表达量的计算根据相对定量法计算得出。以5’-CGCGGATCCGTA-AGAAGAAATCTGAATGCTTTTGT-3’作为miR-586的引物。

1.4 观察指标

对比两组受试者的血清miR-586的检测结果；对比病例组患者骨肉瘤瘤体组织和周围正常骨组织的miR-586的检测结果；通过Pearson相关性分析检验骨肉瘤瘤体组织的miR-586表达与血清miR-586表达的相关性；通过ROC曲线分析两组受试者的血清miR-586检测结果，评估血清miR-586诊断骨肉瘤的价值。

1.5 统计学分析

2 结果

2.1 两组受试者血清miR-586检测结果对比

病例组miR-586的检测结果为(1.43±0.52)，均显著高于对照组(P<0.05)，见表1。

表1 两组受试者血清miR-586检测结果的对比

注：与对照组对比，a为P<0.05。

2.2 病例组骨肉瘤瘤体组织和周围正常骨组织miR-586检测结果的对比

骨肉瘤瘤体组织miR-586的检测结果为(5.38±0.31)，显著高于正常骨组织miR-586的检测结果(P<0.05)。见表2。

表2 病例组骨肉瘤瘤体组织和周围正常骨组织miR-586检测结果的对比

注：与正常骨组织对比，a为P<0.05。

2.3 miR-586在骨肉瘤瘤体组织和血清中表达的Pearson相关性分析

Pearson相关性分析结果显示，骨肉瘤瘤体组织miR-586表达与血清miR-586表达呈正相关关系(γ=0.912，P<0.05)。见图1。

图1 miR-586在骨肉瘤瘤体组织和血清中表达的Pearson相关性分析

2.4 血清miR-586对骨肉瘤的诊断价值分析

ROC曲线分析结果显示，血清miR-586诊断骨肉瘤的曲线下面积为0.879(95%可信区间分别为0.769，0.985，P均<0.05)。在0.952的最佳筛查阳性界值(cut-off值)时，血清miR诊断骨肉瘤的敏感度和特异度均为85%。见图2。

图2 血清miR-586诊断骨肉瘤的ROC曲线分析

3 讨论

骨肉瘤是较为常见的恶性骨肿瘤，青少年及儿童是本病的高发人群。骨肉瘤的恶性程度较高，可在较短时间内发生肺转移等远处转移，临床的治疗难度大，患者的预后较差[6]。早期的诊断和治疗是提高本病临床疗效，改善患者预后的关键。骨肉瘤的发病机制目前尚不明确，可能与遗传因素、病毒感染、放射性损伤、慢性炎症刺激等有关[7]。骨肉瘤的临床诊断目前主要依据为患者的临床诊断、影像学资料以及病理检查结果[8]。寻找可靠的血清学指标可为临床早期诊断骨肉瘤提供诊断依据。

近年来，临床上miR-586的相关研究主要关注其在肝癌、白血病等消化系统级血液系统疾病的应用价值上。罗耀玲等[9]的研究显示，miR-586可能通过Bcl-2通路对肝癌HepG2细胞的增殖和凋亡发挥调节作用。Wang等[10]的研究显示，异基因造血肝细胞移植后miR-586可能可成为急性移植物对抗宿主疾病的预测因子，并据此提出可将miR-586作为治疗靶点。目前，关于miR-586与骨肉瘤关系的研究较少，有研究通过体外细胞实验，证实骨肉瘤细胞的分化、侵袭、凋亡等均与miR-586有关，miR-586表达的下调有助于抑制骨肉瘤细胞的分化和侵袭，并可加速其凋亡[11]。在本研究中，病例组患者骨肉瘤瘤体组织的miR-586的检测结果显著高于周围正常骨组织的miR-586检测结果，这与魏任雄等[12]的研究结果基本一致。

在本研究中，病例组患者的血清miR-586检测结果显著高于对照组受试者的血清miR-586检测结果。这说明血清miR-586水平的上升对骨肉瘤的诊断有一定的提示意义。同时，血清miR-586的水平和骨肉瘤瘤体组织miR-586水平呈正相关关系，这说明血清miR-586的水平显著升高可提示miR-586在骨肉瘤瘤体组织内的高表达状态。根据目前的文献研究资料，结合本次研究的结果，miR-586参与了骨肉瘤的发病以及肿瘤病情的进展，miR-586可能是作为信号分子促进骨肉瘤细胞的增殖。ROC曲线分析结果显示，miR-586诊断骨肉瘤的最佳筛查阳性界值为0.952，其诊断敏感度和特异度均为85%，具有良好的诊断价值。因此，这可说明miR-586对骨肉瘤的诊断上有一定的应用价值，有助于早期发现骨肉瘤，可作为骨肉瘤诊断的一项血清学指标。下来的进一步研究可通过动态检测患者治疗过程中的miR-586水平的变化，揭示miR-586与骨肉瘤病情变化的相关性。

综上，骨肉瘤患者血清以及瘤体组织的miR-586水平显著升高，两者呈正相关的关系。血清miR-586水平的检测对临床诊断骨肉瘤有一定的参考价值。

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DiagnosticValueofmiR-586inOsteosarcoma

WEIJirong.

GuangzhouMilitaryRegionGeneralHospital,Guangzhou,510100

ObjectiveTo investigate the diagnostic value of miR-586 in osteosarcoma,and to provide a theoretical basis for the diagnosis of osteosarcoma.Methods35 patients with osteosarcoma were selected as the study group.35 healthy patients were selected as the control group.The miR-586 test results were compared between the 2 groups.The miR-586 test results were compared between the osteosarcoma tumor tissues and the surrounding normal bone tissues in the study group.The Pearson correlation analysis was used to examine the correlation between miR -586 expression and serum miR-586.The serum miR-586 test was analyzed by ROC curve to evaluate the value of serum miR-586 in the diagnosis of osteosarcoma.ResultsThe results of miR-586 in patients group were (1.43±0.52),which were significantly higher than those of the control group (P<0.05).The results of miR-586 in the osteosarcoma tumor tissue were (5.38±0.31),which was significantly higher than that of the normal bone tissue miR-586 (P<0.05).Pearson correlation analysis showed that the expression of miR-586 in osteosarcoma tumor tissue was positively correlated with the expression of serum miR-586 (γ= 0.912,P<0.05).ROC curve analysis showed that the area under the curve of serum miR-586 diagnosed osteosarcoma was 0.879,0.952 was the best screening positive margin.Sensitivity and specificity of serum miR diagnosis for osteosarcoma both were 85%.ConclusionThe serum and tumor tissue miR-586 levels in patients with osteosarcoma are significantly higher than those of the control group.Detection of serum miR-586 level has a certain reference value for clinical diagnosis of osteosarcoma.

miR-586;Osteosarcoma;Diagnostic value

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:1756～1758)

510100 广州军区广州总医院

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.11.005

R738.1

A

1001-5930(2017)11-1756-03

2017-04-13

2017-08-02)

(编辑：吴小红)