鸭2型腺病毒感染导致番鸭“肝白化病”的研究

陈仕龙，俞 博，肖世峰，江 斌，程晓霞，林锋强，王 劭，朱小丽，黄梅清，陈秀琴，陈少莺*

(1.福建省农业科学院畜牧兽医研究所， 福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心 350013； 2.福建农林大学动物科学学院)

鸭2型腺病毒感染导致番鸭“肝白化病”的研究

陈仕龙1，俞 博2，肖世峰1，江 斌1，程晓霞1，林锋强1，王 劭1，朱小丽1，黄梅清1，陈秀琴1，陈少莺1*

(1.福建省农业科学院畜牧兽医研究所， 福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心 350013； 2.福建农林大学动物科学学院)

2015年以来，福建省番鸭饲养区的雏番鸭群流行一种以肝脏肿大、颜色变淡呈黄白色、表面有斑驳状或散在点状出血点为特征的疫病，俗称番鸭“白肝病”“肝白化病”。经流行病学调查、病原排查和分离病毒人工感染试验，初步表明该病病原为鸭2型腺病毒。

雏番鸭；鸭新型腺病毒；肝白化病

2015年以来，在福建省南平市、漳州市、莆田市及广东省番鸭饲养区的雏番鸭流行一种以肝脏肿大、颜色变淡呈黄白色、表面有斑驳状或散在点状出血点为主要特征的新疫病，俗称番鸭“肝白化病”“白肝病”。病因不明，现有药物、疫苗和免疫制剂无防治效果，给番鸭养殖户造成很大的经济损失。本团队从病死鸭脏器匀浆中分离到多株病毒，并经人工感染、流行病学调查和病原排查等方面进行研究，初步证实该病是由一种有别于EDSV和禽腺病毒血清4型的新型鸭腺病毒感染导致的。现将该病毒诊断结果报道如下。

1 流行病学调查

番鸭“肝白化病”在临床上只发生于番鸭，其他品种鸭未见发病，发病日龄10～40 d，以20～30 d多见。出现临床病症后1、2 d开始出现死亡，随着病情的发展，发病率和死亡率日趋升高，在第5～10 d死亡达到高峰，而后逐渐减少，病程持续10～15 d。总体发病率20%～50%，日均死亡率1%～3%，总体死亡率10%～50%。发病率和死亡率高低与继发感染和鸭场管理水平密切相关，尤其饲养管理差且发病后使用氟苯尼考、磺胺药、强力霉素等药物的鸭群，其发病率和死亡率较高，部分病例能检测到番鸭小鹅瘟的混合感染。传染源为病鸭、带毒鸭及其粪便污染物，该病一年四季均可发生，以春秋两季多见，目前该病在福建省和广东省番鸭饲养地区普遍流行。

2 临床症状和剖检变化

病鸭表现为精神萎顿、缩头弓背、食欲减少或废绝、拉黄白色稀粪，发病后1、2 d开始出现死亡。病死鸭膘情尚好，剖检可见肌肉苍白，肝脏肿大、呈黄褐色或黄白色、质地较脆(图1 A)；脾脏有不同程度的肿大(图1 D)，胆囊肿大，有些可见点状坏死；肾脏肿大，表面有不同程度的出血点或出血斑(图1 E)，法氏囊萎缩变小。病情中后期，肝脏表面有散在出血点或出血斑(图1 B、C)，有些肝脏表面出现大小不等的坏死点或坏死斑，长骨骨髓呈黄褐色。

图1 临床病死鸭的剖检病变注：A、B、C为肝脏肿大、散在出血点；D为脾脏肿大；E为肾脏肿大、出血。

3 病原检测

3.1 IFA检测

取病死番鸭肝、脾等组织制备冰冻切片，应用本研究室制备的特异性单克隆抗体进行IFA检测，结果表明部分病料番鸭小鹅瘟呈阳性反应，其他病原(番鸭细小病毒、番鸭呼肠孤病毒、新型鸭呼肠孤病毒、鸭副粘病毒、禽坦布苏病毒)检测均为阴性。

3.2 PCR检测

应用实验室建立的鸭病毒性肝炎(DHAV1和DHAV3)、番鸭细小病毒、番鸭呼肠孤病毒、新型鸭呼肠孤病毒、鸭副粘病毒、禽坦布苏病毒的RT-PCR或PCR检测方法对送检的60多份病料进行检测，结果仅有少量病料出现番鸭小鹅瘟、番鸭呼肠孤病毒阳性。

根据GenBank数据库中鸭2型腺病毒法国GR 株(登录号：NC_024486.1 )和广东CH-GD-12-2014 株(登录号：KR135164.1 )的22K蛋白核苷酸序列设计引物并进行PCR扩增(引物序列为F:CGAGGACACGTATTCGGAGG；R:CGCCCGTAGTATGCCAAGAT)，预期扩增片段为396bp。PCR检测绝大部分病料均为鸭2型腺病毒阳性，阳性率达92%，取阳性PCR产物送测核苷酸序列，其核苷酸序列与CH-GD-12-2014株和GR株的同源性分别为90%～100%和88%～90%，与产蛋下降综合征病毒(EDSV-76)和禽腺病毒4型(FAV-4)的同源性很低。

4 病毒分离

将PCR检测为鸭2型腺病毒阳性的病料，制备匀浆，取上清接种11日龄番鸭胚后，分离到多株病毒，经PCR检测均为鸭2型腺病毒阳性，分离毒不能凝集鸡红细胞，其中1株命名为FJ034-DAdV-2，用于人工感染试验。

5 人工感染试验

7日龄雏番鸭注射FJ034-DAdV-2，感染后3 d开始发病，表现为精神沉郁、吃料减少、打堆、拱背、羽毛蓬松，感染后4 d死亡1羽，4～6 d再现死亡高峰。死亡鸭多见嘴角出血(图2 A)，剖检死亡鸭肝脏颜色变淡(黄白色或淡黄色)、表面有大量散在出血点(图2 C、D、E)；脾脏肿大(图2 G)；肾脏肿大，颜色发黄，有B出血(图2 I)；法氏囊萎缩(图2 K)。人工感染鸭出现与临床相似的病症和剖检病变。与攻毒鸭同居感染的雏番鸭也能发病和死亡。同时，将人工感染病死鸭肝脾匀浆接种11日龄番鸭胚，能从死胚尿囊液中回收到相同病毒。

图2 人工感染鸭的剖检病变注：A为病死鸭嘴角出血；B、F、H、J为正常鸭肝脏、脾脏、肾脏和法氏囊；C、D、E为病死鸭肝脏发白、出血；G为病死鸭脾脏肿大；I为病死鸭肾脏出血；K为病死鸭法氏囊萎缩。

6 讨论

福建省是全国番鸭的主产区，根据养殖户反馈和调查结果，该病近年来在福建省大面积流行，病因不明，给养殖户带来巨大损失。本团队采集了60多份典型病料，经病原分离、动物回归、PCR检测、流行病学调查和病原排查，初步研究结果表明，该病与鸭2型腺病毒感染密切相关。

鸭2型腺病毒感染最早出现在法国番鸭养殖场[1]，从消瘦、坡脚和急性死亡的1月龄番鸭中分离到1株与现有血清型都不同的鸭腺病毒，命名为鸭2型腺病毒，但由于没有病毒基因序列数据，确切的分类地位存在争议。Ana Marek等采用高通量测序技术获得了法国株的全基因序列[2]。接着国内学者在雏番鸭急性死亡、肝脏出血和发黄的病料中检测到鸭2型腺病毒，并获得了病毒全基因序列[3-5]。本研究从福建省多个肝白化病死雏番鸭病料中分离到多株鸭2型腺病毒，PCR产物的测序表明FJ034-DAdV-2分离株的22K蛋白核苷酸序列与广东株CH-GD-12-2014 和法国株GR的同源性分别为99%～100%和88%～90%。腺病毒为线状双股 DNA 病毒，26～45 kbp，周镇海等发现广东CH-GD-12-2014株有fiber-1和fiber-2两个基因，而法国 GR 株只有1个fiber基因[6]，因此FJ034-DAdV-2的确切分类定位还有待主要基因序列和其他生物学特性的进一步鉴定。

[1]BOUQUET J F,MOREAU Y,MCFERRAN J B,et al.Isolation and characterisation of an adenovirus isolated from Muscovy ducks[J].Avian Pathology Journal of the Wvpa.1982,11(2):301.

[2] MAREK A, KAJáN GL, KOSIOL C, et al. Complete genome sequences of pigeon adenovirus 1 and duck adenovirus 2 extend the number of species within the genus Aviadenovirus[J].Virology,2014,462-463(1):107-114.

[3]ZHANG X, ZHONG Y, ZHOU Z, et al.Molecular characterization, phylogeny analysis and pathogenicity of a Muscovy duck adenovirus strain isolated in China in 2014[J].Virology,2016,493:12.

[4]陈峰,招丽婵,覃健萍,等.应用宏基因组学鉴定国内第一株鸭2型腺病毒[J].中国预防兽医学报，2015，37(12):903-907.

[5]陈亮,黄路生，刘晓文，等.鸭2型腺病毒的分离鉴定及hexon基因的序列分析[J].中国兽医科学，2016(12)：1538-1542.

[6]周镇海.鸭腺病毒3型基因组序列分析及致病性研究[D].广州：华南农业大学， 2016.

Primarystudyonduckadenovirus2infectionresultedinMuscovyducklings’paleliverdisease

CHEN Shi-long1, YU Bo2, XIAO Shi-feng1, JIANG Bin1, CHENG Xiao-xia1, LIN Feng-qing1,WANG Shao1, ZHU Xiao-li1, HUANG Mei-qing1, CHEN Xiu-qin1, CHEN Shao-ying1*
(1.InstituteofAnimalHusbandryandVeterinaryMedicine,FujianAcademyofAgriculturalSciences;FujianAnimalDiseasesControlTechnologyDevelopmentCenter, 350013;2.CollegeofAnimalSciences,FujianAgricultureandForestryUniversity)

Since 2015, an unknown epidemic disease was being emerged in Muscovy duck flocks in Fujian Province of China. The dead ducklings’ livers were swelling, brittle and pale, scattered much hemorrhagic spot on the surface， This disease was named “Pale liver disease” according the autopsy features. Basing on etiology screening, epidemiological investigation and artificial infection studies, the pathogen of this disease was a duck adenovirus 2-related adenovirus, which is different from EDSV and avian adenovirus serotype 4.

Muscovy duckling; new duck adenovirus; liver albinism

陈仕龙，男，1979年生，博士，副研究员。

并列第一作者：俞博，男，1991年生，硕士研究生。

*通讯作者：陈少莺，女，1962年生，硕士，研究员

(E-mail:chensy58@163.com)。

福建省农业科学院青年英才项目(YC2016-1)；福建省农业科学院创新团队项目(2016PI-6)。

10.13651/j.cnki.fjnykj.2017.08.001

(责任编辑：林玲娜)