寒热交替刺激对正常及免疫低下大鼠一般情况的影响

程天虹，张瑞卿，杨 蓉，赵延龙，齐 铮，李俊莲

（山西中医学院，山西太原030024）

祖国医学认为“肺为娇脏，不耐寒热”，又因“肺为华盖”，位居诸脏之上，“外邪上受，首先犯肺”，肺极易感受外邪侵袭。玉屏风散益气固表，现代药理研究表明玉屏风散具有提高免疫、治疗哮喘、抗变态反应［1］等作用。本实验借助人工气候箱模拟寒热交替的气候环境，皮下注射氢化可的松注射液建立免疫低下大鼠模型，采用玉屏风散进行干预，通过观察寒热交替刺激大鼠的饮食、体重、精神活动等，探讨外邪对正常及免疫低下大鼠一般情况的影响。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 SPF级健康雄性 Wistar大鼠108只（由中国人民解放军医学科学院实验动物中心提供），体重180~220 g，合格证号为SCXK-（军）2012-0004。实验动物环境设施符合I级标准。室温20℃~25℃，相对湿度为60%~80%，自然采光。自由进食饮水，以清洁级饲料喂养，适应性饲养1 w后开始实验。

1.1.2 药物与试剂 氢化可的松注射液，批号：H12020887，天津金耀药业有限公司。玉屏风颗粒，5 g×21 袋，批号：Z10930036，国药集团广东环球制药有限公司。

1.1.3 实验仪器 人工气候箱：LRH-800-GSI型，韶关市泰宏医疗器械有限公司；电子天平：FA2204型，上海皓庄仪器有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 分组 SPF级健康雄性Wistar大鼠108只，按照随机数字表法分为6组，每组18只：正常常温组、正常寒热交替组、正常寒热交替加中药干预组、免疫低下常温组、免疫低下寒热交替组、免疫低下寒热交替加中药干预组。于造模前测体重，观察大鼠精神状态、活动情况、饮食饮水量、毛色、皮肤、关节及二便等情况。实验期间每日定时观察各组大鼠的精神活动、皮肤毛色、关节、鼻部分泌物、粪便等，并定时记录各组大鼠的进食饮水量、体重等一般情况。

1.2.2 造模 免疫低下大鼠模型的制备［2］：适应性饲养结束后，低免各组大鼠均皮下注射免疫抑制剂氢化可的松注射液20 mg/（kg·d），连续5 d。

寒热刺激大鼠模型的制备［3-5］：寒热交替各组大鼠每天定时置于人工气候箱喂养，并设定RH（空气中实际含量占同等温度下饱和含水量的百分比值）、T（温度）。寒刺激设定 RH（50±4）%，T（0±2）℃，每天40 min；寒刺激结束后接着进行热刺激，热刺激设定 RH（50±4）%，T（33±2）℃，每天20 min；寒热交替各组大鼠每天定时接受1次寒热交替刺激，其余时间为常温环境喂养。

1.2.3 给药 中药干预各组大鼠按中药给药剂量等效换算方法计算，将玉屏风颗粒成人每日所需药量换算成大鼠所需药量为25 g/kg［6］，连续灌胃28 d，实验期间动物均自由进食饮水。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 精神状态及毛色情况

大鼠在接受寒热交替刺激7 d后均出现精神倦怠、背毛脱落明显、背毛凌乱、毛色无光泽等外观表现；寒刺激期间大鼠主要表现为扎堆、蜷缩、怕冷、背毛竖立、耳朵及尾巴颜色变浅；热刺激期间大鼠主要表现为精神烦躁、抓挠鼠笼、活动度增加、身上出现明显汗斑、皮肤颜色加深等。造模第14天后，以低免寒热交替组大鼠的精神活动状况最为不佳，多现嗜睡、嗜卧，且较其他各模型组实验期间、大鼠死亡数量多。第28天正常寒热交替组和低免寒热交替组出现精神萎靡、扎堆蜷缩、毛色暗淡脱落的大鼠数量明显增多，且低免寒热交替组大鼠死亡数量较前增多。正常常温组大鼠始终精神活动良好，毛色顺滑，无异常改变。

2.2 鼻部分泌物情况

寒热交替刺激7 d后大鼠出现鼻部分泌物，质地稀，而玉屏风颗粒药物干预组与寒热交替组相比，大鼠鼻部分泌物较少。14 d后寒热交替组大鼠鼻部分泌物增多，尤以低免寒热交替组大鼠表现明显。至28 d寒热交替组大鼠鼻部分泌物比7 d时明显增多，且次数增加，而玉屏风颗粒药物干预组大鼠的鼻部分泌物有所减轻，次数相对减少。正常常温组大鼠无异常鼻部分泌物。

2.3 关节情况

大鼠在接受寒热交替刺激7 d后，部分出现足背关节肿大、畸形、后肢伴糜烂等表现，并以低免寒热交替组大鼠的关节病变比较显著。至14 d后，低免寒热交替组大鼠关节肿大、畸形的病变程度更为严重，且关节水肿处皮肤发红，经玉屏风颗粒药物干预后大鼠的病变情况有所减轻。至28 d，低免寒热交替组大鼠关节及足背红肿、糜烂、畸形的病变情况最为显著，且病变大鼠的数量明显增多。正常常温组大鼠关节无异常改变。

2.4 大便情况

造模7 d后，低免常温组和低免寒热交替组大鼠便质较软，正常常温组大鼠便质无异常。至14 d后，低免寒热交替组大鼠的便质最为稀溏，并伴黏液状分泌物，而玉屏风颗粒药物干预组大鼠的便质稍有好转。至28 d，低免寒热交替组出现便溏的大鼠数量明显增多，且正常寒热交替组部分大鼠也出现稀便。正常常温组大鼠的粪便正常，呈颗粒状，硬度适中，无异常表现。

2.5 进食饮水情况

随着时间的延长，各组大鼠的进食量及饮水量都逐渐增加，但与正常常温组相比，寒热交替刺激组的大鼠进食及饮水量增长缓慢，低免寒热交替组大鼠的进食饮水量最少，经玉屏风颗粒药物干预后，大鼠的进食量和饮水量均有所增加。结果见表 1、表 2。

表1 寒热交替刺激对大鼠进食量的影响 （g±s）

表1 寒热交替刺激对大鼠进食量的影响 （g±s）

注：与同期正常常温组相比，1）P＜0.01；与同期低免常温组相比，2）P＜0.01；与同期正常寒热交替组相比，3）P＜0.01；与低免寒热交替组相比，4）P＜0.01

组别 n 第7天 第14天 第28天正常常温组 6 124.83±3.43 156.33±3.61 172.33±2.34正常寒热交替组 6 91.67±2.161） 109.50±5.091） 122.33±5.201）正常交替加干预组 6 110.17±1.173） 135.33±3.503） 143.17±3.603）低免常温组 6 106.00±1.261） 114.50±2.661） 133.00±2.371）低免寒热交替组 6 80.17±5.421）2）3） 96.83±2.641）2）3）107.33±2.731）2）3）低免交替加干预组 6 93.67±2.254） 106.00±2.834） 126.17±2.234）

表2 寒热交替刺激对大鼠饮水量的影响 （mL，±s）

表2 寒热交替刺激对大鼠饮水量的影响 （mL，±s）

注：与正常常温组相比，1）P＜0.01；与低免常温组相比，2）P＜0.01；与正常寒热交替组相比，3）P＜0.05，4）P＜0.01；与低免寒热交替组相比，5）P＜0.01

组别 n 第7天 第14天 第28天正常常温组 6 292.67±17.36 389.17±6.49 418.17±19.29正常寒热交替组 6 250.17±2.231） 315.67±3.611） 326.33±6.561）正常交替加干预组 6 266.33±3.613） 358.50±7.824） 371.67±10.764）低免常温组 6 235.00±9.471） 325.50±4.761） 328.83±10.571）低免寒热交替组 6 180.17±20.651）2）4） 269.83±15.131）2）4） 289.33±8.781）2）4）低免交替加干预组 6 212.00±6.725） 306.50±5.965） 308.00±6.075）

表1、表2显示，正常寒热交替组、低免常温组、低免寒热交替组与正常常温组相比，分别于第7天、14天、28天时，大鼠进食量及饮水量都明显下降（P＜0.01）。低免寒热交替组与低免常温组相比，分别于第7天、14天、28天大鼠的进食量及饮水量都明显下降（P＜0.01）。与正常寒热交替组相比，低免寒热交替组分别于第7天、14天、28天的进食量及饮水量都明显降低（P＜0.01）。与正常寒热交替组相比，正常交替加干预组分别于第7天、14天、28天的进食量及饮水量都增加（P＜0.05或P＜0.01）。与低免寒热交替组相比，低免交替加干预组经玉屏风颗粒药物干预后，大鼠的进食量及饮水量增加（P＜0.01）。

2.6 体重变化情况

造模期间，各组大鼠的体重均呈增长趋势，与正常常温组相比，寒热交替组大鼠的体重增长缓慢，低免寒热交替组大鼠的体重减轻明显，经玉屏风颗粒干预后，大鼠体重均有不同程度的增长。结果见表3。

表3 寒热交替刺激对大鼠体重的影响 （g，±s）

表3 寒热交替刺激对大鼠体重的影响 （g，±s）

注：与正常常温组相比，1）P＜0.01；与低免常温组相比，2）P＜0.01；与正常寒热交替组相比，3）P＜0.05，4）P＜0.01；与低免寒热交替组相比，5）P＜0.01

组别 n 第7天 第14天 第28天正常常温组 6 283.50±17.28 338.83±12.40 388.33±10.29正常寒热交替组 6 245.33±6.191） 299.17±6.651） 339.00±16.531）正常交替加干预组 6 269.17±7.334） 323.33±10.883） 371.83±10.133）低免常温组 6 279.67±7.15 291.00±22.951） 256.67±11.891）低免寒热交替组 6 226.33±23.831）2）3） 267.50±16.681）2）4） 315.67±6.801）2）4）低免交替加干预组 6 266.83±3.605） 278.00±17.92 334.00±8.105）

表3显示，第7天时正常寒热交替组、低免寒热交替组与正常常温组相比，大鼠的体重明显减轻（P＜0.01）；正常寒热交替组、低免常温组、低免寒热交替组与正常常温组相比，第14天、28天时大鼠体重都明显下降（P＜0.01）。与低免常温组相比，低免寒热交替组于第7天、14天、28天时体重均明显减轻（P＜0.01）。与正常寒热交替组相比，低免寒热交替组分别于第7天、14天、28天时体重降低（P＜0.05 或P＜0.01）。正常交替加干预组与正常寒热交替组相比，不同时段大鼠体重均有所增加（P＜0.05 或P＜0.01）。与低免寒热交替组相比，低免交替加干预组分别于第7天、28天经玉屏风颗粒药物干预后，大鼠体重皆有所增加（P＜0.01）；第14天与低免寒热交替组比较，低免寒热交替加干预组体重指数虽有增高，但差异无统计学意义（P＞0.05）。

3 讨论

课题组前期研究认为［7］，机体发病的关键在于环境—微生物—机体三者之间的平衡失调，如气候的突变、环境的恶化、微生物菌群失调、机体免疫机制紊乱等都能引起疾病的发生。自然界六淫外邪尤以寒热之邪为阴阳两类外环境致病的典型代表，其中寒为阴邪，其性收引、凝滞，易伤阳气，寒邪侵袭肌表可损伤肺卫，导致卫阳郁闭；而热为阳邪，易伤津耗气。寒热交替对大鼠刺激明显，会使大鼠出现恶寒、发热、流涕、倦怠嗜卧、蜷缩等一系列病理表现。此外，由于肺为娇脏，外合于皮毛，因此寒热之邪侵袭肌表，会使大鼠出现背毛脱落、凌乱，毛色无光泽；肺开窍于鼻，在液为涕，因此在寒热交替刺激下大鼠的鼻部分泌物也会增多。玉屏风散由黄芪、白术、防风三味药物组成，具有益气固表止汗之功效，乃中医“扶正固本”之良方。研究表明，玉屏风散可以提高低下的免疫力，抑制免疫亢进，对免疫失调性疾病疗效颇佳，临床上可以治疗荨麻疹、过敏性鼻炎、呼吸道感染、多汗症等多种疾病［8］。本实验观察结果显示，随着时间的延长，正常及免疫低下大鼠在寒热交替刺激环境下，其精神活动、皮肤毛色、鼻部分泌物、粪便、进食饮水量及体重等一般情况都会受到不同程度的影响，对于本身免疫力低下的大鼠影响更为显著。显示外邪刺激导致大鼠卫外力量减弱，通过玉屏风颗粒可以得到纠正。