恶性淋巴瘤组织中nm23、Survivin蛋白表达及意义

王黎，李红，覃骏，杨华强

(湖北医药学院附属人民医院，湖北十堰442000)

恶性淋巴瘤组织中nm23、Survivin蛋白表达及意义

王黎，李红，覃骏，杨华强

(湖北医药学院附属人民医院，湖北十堰442000)

目的检测恶性淋巴瘤组织中nm23、Survivin蛋白表达情况，并分析其临床意义。方法选择58例恶性淋巴瘤患者和27例反应增生性淋巴结炎患者，应用免疫组化染色法检测恶性淋巴瘤组织(观察组)和反应增生性淋巴结组织(对照组)中nm23、Survivin蛋白表达情况。结果观察组nm23、Survivin呈过表达，对照组nm23、Survivin呈低表达(P均<0.01)。nm23过表达与B组症状、临床分期高、恶性程度高、结外累计部位数多有关(P均<0.05)，Survivin过表达与临床分期高、恶性程度高及乳酸脱氢酶增高有关(P均<0.05)。nm23与Survivin表达呈正相关(r=0.323，P<0.05)。结论恶性淋巴瘤组织中nm23蛋白与Survivin蛋白均过表达，且nm23蛋白、Survivin蛋白过表达与恶性淋巴瘤的发生、发展过程密切相关。

恶性淋巴瘤；nm23蛋白；Survivin蛋白

恶性淋巴瘤由霍奇金淋巴瘤(HL)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)两大类组成[1]。nm23基因是一种肿瘤转移抑制基因，在肿瘤细胞的转移和植入过程中有十分重要的抑制作用[2]。在人体各组织细胞实体瘤中，nm23基因对肿瘤细胞远处转移的抑制作用均有研究报道[3]。Survivin基因是细胞凋亡的抑制基因之一[4]。Survivin基因表达蛋白存活素，在各种人类恶性肿瘤中具有不同程度的表达。有研究报道存活素是肿瘤患者预后不良的重要指标之一。本研究采用免疫组化法检测恶性淋巴瘤组织中nm23、Survivin蛋白表达情况，分析二者在恶性淋巴瘤发生、发展过程的作用。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集2005年1月～2017年1月在我院行手术切除的恶性淋巴瘤患者58例，男38例、女20例，年龄(57.35±6.57)岁。均经病理学检查证实。HL 9例，NHL 49例；临床分期按照AnnAr-bor标准，Ⅰ级20例，Ⅱ级13例，Ⅲ级16例，Ⅳ级9例。恶性度分级参照1993年“国际淋巴瘤预后指标”。较低恶性程度淋巴瘤：Ⅰ级+Ⅱ级33例；较高恶性程度淋巴瘤：Ⅲ级+Ⅳ级25例。取手术切除的恶性淋巴瘤组织作为观察组，另收集反应增生性淋巴炎患者27例，取反应增生性淋巴组织做为对照组。

1.2 nm23、Survivin蛋白检测方法 采用免疫组化法。nm23抗体、Survivin抗体、免疫组化MaxvisionTM/HRP检测试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司。标本遵照常例取材、固定、石蜡包埋，4 μm厚连续切片。石蜡切片脱蜡、水化，抗原EDTA热修复，PBS冲洗，3.3%双氧水孵育10 min，PBS冲洗。切片上滴加一抗，4 ℃过夜，PBS冲洗；滴加MaxvisionTM/HRP试剂，室温孵育15 min，PBS冲洗。DAB显色，苏木素复染，1%盐酸乙醇分化，PBS返蓝，切片经梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。以PBS替换一抗作为阴性空白对照，以迈新生物公司提供的阳性对照切片作为阳性对照。nm23阳性表现为细胞质呈淡黄、棕黄或棕褐色颗粒，不着色或着色浅且不特异者为阴性。阳性细胞比例<10%为低表达，阳性细胞比例≥10%为过表达。Survivin阳性表现为细胞核呈淡黄、棕黄或棕褐色颗粒，不着色或着色浅且不特异者为阴性。阳性细胞比例<10%为低表达，阳性细胞比例≥10%为过表达。

1.3 统计学方法 采用SPSS21.0统计软件。计数资料比较采用χ2检验和Fisher确切概率法检验。等级相关分析应用非参数Spearman检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组nm23、Survivin蛋白表达比较 对照组中nm23蛋白低表达27例、过表达0例，观察组中低表达34例、过表达24例，两组nm23蛋白过表达率比较差异有统计学意义(χ2=13.593，P<0.01)。对照组Survivin蛋白低表达21例、过表达6例，观察组低表达23例、过表达35例，两组Survivin蛋白过表达率比较差异有统计学意义(χ2=10.724，P<0.01)。

2.2 恶性淋巴瘤组织中nm23、Survivin蛋白表达与患者临床病理参数的关系 nm23蛋白过表达与患者性别、年龄、HL/NHL、免疫表型及乳酸脱氢酶(LDH)增高无明显相关性(P均>0.05)，而与B组症状、临床分期高、恶性程度高、结外累计部位数多有关(P均<0.05)。Survivin蛋白过表达与患者性别、年龄、结外累计部位数、B组症状、HL/NHL及免疫表型无明显相关性(P均>0.05)，与临床分期高、恶性程度高及LDH增高有关(P均<0.05)。见表1。

表1 恶性淋巴瘤组织中nm23、Survivin蛋白表达与患者临床病理参数的关系(例)

2.3 恶性淋巴瘤组织中nm23蛋白与Survivin蛋白表达的相关性 58例恶性淋巴瘤中，nm23、Survivin蛋白均呈过表达19例，nm23过表达而Survivin呈低表达5例，nm23低表达而Survivin过表达16例，两者均呈低表达18例。相关性分析显示，nm23与Survivin蛋白表达呈正相关(χ2=4.794，r=0.323，P<0.05)。

3 讨论

恶性淋巴瘤是来源于淋巴造血系统细胞异常增殖、分化的恶性肿瘤。研究显示，nm23基因在肿瘤细胞的增殖、分化及浸润转移中起着十分重要的作用,抑制nm23基因表达可逆转分化耐受细胞对分化诱导剂的敏感性[5]。Survivin基因具有肿瘤特异性，其只表达于肿瘤和胚胎组织，与肿瘤细胞的增殖、分化及浸润转移密切相关[6]。这两个基因均与恶性肿瘤的增殖分化和侵袭转移相关，本研究就nm23、Survivin蛋白在恶性淋巴瘤的表达情况进行分析，探讨二者之间可能存在的关系。

nm23基因编码蛋白主要定位于细胞质与细胞核中，拥有多种生物学功能，主要与细胞内信号转导、细胞增殖、细胞分化和癌细胞的转移潜能紧密相关。在实体肿瘤组织(如乳腺癌、胃癌和黑素瘤等)中，nm23蛋白能有效抑制肿瘤细胞的远处转移与植入[7～11]。有研究发现，在正常淋巴组织细胞的早期发育中，nm23蛋白表达明显增加，可以有效抑制小鼠和人白血病细胞分化；当nm23基因被沉默、抑制或者敲除后，可有效提高分化诱导剂对耐受细胞分化作用的敏感性[5]。nm23基因的表达在正常淋巴组织细胞和肿瘤干细胞增殖与分化中起着十分重要的作用[12]。造血细胞肿瘤的发生、发展过程与nm23基因的过表达密切相关。本研究结果显示，观察组nm23蛋白过表达率高于对照组，nm23过表达与患者性别、年龄、HL/NHL、免疫表型及LDH增高无关，而与B组症状、Ann Arbor分期高、恶性程度高、结外累及部位数多有关。恶性淋巴瘤组织中nm23蛋白过表达率明显高于对照组，且其过表达率与淋巴瘤恶性程度呈正相关。提示恶性淋巴瘤组织中nm23基因表达增强，nm23基因表达蛋白增加。在恶性淋巴瘤细胞中，负责浸润、转移的多种原癌基因表达增强，然而，多种原癌基因的增强程度超过了肿瘤转移抑制基因nm23所能拮抗的最大强度或是拮抗的范围，因此，肿瘤转移抑制基因nm23不能有效中止肿瘤细胞的生物学行为，从而导致了肿瘤细胞的浸润、播散。这些结果表明，nm23基因的过表达率可以在一定程度上反映出恶性淋巴瘤的恶性程度，对恶性淋巴瘤的诊断存在着一定的参考价值。已有研究[5，13]发现，nm23基因可以抑制造血系统肿瘤中肿瘤细胞的分化，nm23基因过表达水平与肿瘤恶性肿瘤呈正相关。Niistsu等[2]采用免疫组织化学方法检测恶性淋巴瘤患者nm23蛋白的表达情况，结果显示，随着淋巴瘤恶性程度的升高，nm23蛋白表达明显升高，而且与患者血清LDH水平、结外病变数量、临床分期、有无伴随临床症状和年龄存在着显著相关性。此外，Lee等[14]研究150例NHL患者时发现，nm23蛋白的过表达率随肿瘤恶性程度的增加而增加。蓝建平等[15]对107例淋巴瘤的研究也证实，恶性淋巴瘤组织中nm23蛋白表达水平高于正常淋巴结组织的对照组，nm23蛋白过表达水平与淋巴瘤恶性程度存在显著相关性。

恶性肿瘤细胞存在一种典型、标志的生物学行为是异常增强的细胞增殖、分裂能力。Survivin蛋白是参与细胞分裂、增殖的一种蛋白质。已有研究[16]表明，Survivin蛋白的表达水平是推断细胞恶性程度与增殖状态的重要指标之一。Survivin蛋白在恶性淋巴瘤中的阳性表达主要定位于细胞核中。在反应增生性淋巴结组织中Survivin蛋白呈低表达，而在恶性淋巴瘤中却呈过表达。Survivin蛋白在反应增生性淋巴结、恶性淋巴瘤组织中的表达差异有统计学意义。Survivin的过表达与患者性别、年龄、结外累计部位数、B组症状、HL/NHL及免疫表型无相关性，与临床分期高、恶性程度高及LDH增高有相关性。本研究表明，随着恶性淋巴瘤恶化程度的增加，Survivin蛋白的表达水平逐渐升高，表明Survivin蛋白是评价恶性淋巴瘤细胞增殖、分裂的重要指标，对恶性淋巴瘤的诊断有一定的参考价值。Survivin蛋白表达程度可为恶性淋巴瘤临床分型、组织分级提供参考。相关性分析显示，nm23与Survivin蛋白表达呈正相关。

综上所述，nm23蛋白与Survivin蛋白过表达与恶性淋巴瘤的发生、发展过程密切相关。二者在基因通路信号中是否存在协同作用及其机制尚不清楚，需要进一步深入研究。

[1] Bouchoucha M, Devroede G, Bon C, et al. Is-it possible to distinguish irritable bowel syndrome with constipation from functional constipation[J]. Tech Coloproctol, 2017,21(2):125-132.

[2] Niitsu N. The association of nm23-H1 expression with a poor prognosis in patients with peripheral T-cell lymphoma, not otherwise specified[J]. J Clin Exp Hematop, 2014,54(3):171-177.

[3] Niitsu N, Tamaru J, Yoshino T, et al. A study on nm23-H1 expression in diffuse large B-cell lymphoma that was treated with CyclOBEAP plus rituximab therapy[J]. Ann Hematol, 2011,90(2):185-192.

[4] Bae IS, Kim CH, Kim JM, et al. Correlation of survivin and B-cell lymphoma 2 expression with pathological malignancy and anti-apoptotic properties of glial cell tumors[J]. Biomed Rep, 2017,6(4):396-400.

[5] 尹相丛,杨金平,李贵新,等.nm23、ki67在恶性淋巴瘤中的表达及意义[J].山东医药,2009,49(2):97-98.

[6] 杨顺娥,李迅,赵兵.NF-κB、c-myc和survivin在非霍奇金淋巴瘤中的表达及临床意义[J].肿瘤,2009,29(9):868-873.

[7] Li Y, Tong Y, Wong YH. Regulatory functions of Nm23-H2 in tumorigenesis: insights from biochemical to clinical perspectives[J]. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol, 2015,388(2):243-256.

[8] Fang M, Tao Y, Liu Z, et al. Meta-Analysis of the Relationship between NM23 Expression to Gastric Cancer Risk and Clinical Features[J]. Biomed Res Int, 2017,2017:8047183.

[9] Han W, Zhang C, Cao FY, et al. Prognostic and clinicopathological value of NM23 expression in patients with breast cancer: A systematic review and meta-analysis[J]. Curr Probl Cancer, 2017,41(1):80-93.

[10] Han W, Shi CT, Cao FY, et al. Prognostic value of NME1 (NM23-H1) in patients with digestive system neoplasms: a systematic review and meta-analysis[J]. PLoS One, 2016,11(8):e160547.

[11] Han W, Ma J, Cao F, et al. The role of NM23 in patients with colorectal cancer: A systematic review and meta-analysis[J]. J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci, 2017,37(1):1-10.

[12] Ning F, Cai SJ, Zhang TJ, et al. Expression of nm23 H(1) gene in childhood acute lymphoblastic leukemia and the relationship between nm23 H(1) expression and immunophenotype[J]. Zhongguo Dang Dai Er Ke Za Zhi, 2009,11(11):881-884.

[13] 尹相丛,闫丽萍,杨颉,等.恶性淋巴瘤组织和血清中nm23的表达及其意义[J].齐鲁医学杂志,2013,28(6):476-478.

[14] Lee JH, Cho SJ, Zhang X, et al. nm23-H1 protein expression and gene mutation in 150 patients with non-Hodgkin′s lymphomas[J]. J Korean Med Sci, 2006,21(4):645-651.

[15] 蓝建平,钱美华,徐文娟,等.恶性淋巴瘤nm23、CD44表达及其预后意义[J].实用肿瘤杂志,2003,18(3):202-205.

[16] Samuel J, Kanwar RK, Kanwar JR, et al. A study of gene expression of survivin, its antiapoptotic variants, and targeting survivin in vitro for therapy in retinoblastoma[J]. J Pediatr Hematol Oncol, 2016,38(7):e230-e242.

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.42.031

R733

B

1002-266X(2017)42-0094-03

李红(E-mail: 342517624@qq.com)

2017-06-02)