高效液相色谱指纹图谱法在测定白芍质量中的应用价值

高喜凤

（平凉市崆峒区食药监局，甘肃 平凉 744000）

高效液相色谱指纹图谱法在测定白芍质量中的应用价值

高喜凤

（平凉市崆峒区食药监局，甘肃 平凉 744000）

目的：探讨高效液相色谱指纹图谱法在测定白芍质量中的应用价值。方法：采用高效液相色谱指纹图谱法测定33批白芍样品，总结高效液相色谱指纹图谱法在测定白芍质量中的应用价值。以乙腈（A）与磷酸水溶液（PH值为2.7，B）为流动相，在Scincehome C18柱的色谱条件下进行梯度脱洗。色谱峰的采集范围为200～400 nm，检测波长为230 nm，温柱为20℃，进样量为10 μl，流速为1.0 ml/min。结果：成功获取白芍高效液相色谱指纹图谱，指认出没食子酸、儿茶素、4-O-没食子酰白芍苷、白芍苷、没食子酸甲酯、6-O-没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖和芍药苷、（1，2，3，4，6）-五没食子酰基葡萄糖、甲苯酸、6'-O-没食子酰白芍苷、没食子酸乙酯共计10个峰，且33个白芍样品高效液相色谱指纹图谱的相似度与聚类分析的结果基本近似。用高效液相色谱指纹图谱法测定白芍的质量具有较强的专属性和较好的重复性。结论：用高效液相色谱指纹图谱法测定白芍的质量具有较强的专属性和较好的重复性，既能完善白芍药品的质量控制，同时也能为科学评价白芍药品的质量提供参考和借鉴。

高效液相色谱指纹图谱法；白芍质量；应用价值

白芍具有养血调经、柔肝止痛等功效，常用于治疗头痛、眩晕、胁痛、腹痛、四肢挛痛、月经不调及盗汗诸证。另外，现代药理学研究表明，白芍还具有提高免疫力和调节女性内分泌的作用[1]。在本次研究中，笔者主要探讨高效液相色谱指纹图谱法在测定白芍质量中的应用价值。

1 材料与方法

1.1 仪器

配置有Waters600型泵的Waters高效液相色谱仪、配置有四元梯度的洗脱泵、柱温箱、在线脱气机、2996型二极管阵列检测器、Empower工作站及KQ3200型超声波洗涤器。

1.2 试剂与材料

试剂：色谱纯乙腈、色谱分析水、分析纯乙醇、二氯甲烷、磷酸以及笔者自行分离提取的定性用对照品白芍苷、没食子酰芍药苷、芍药苷、6-O-没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖、苯甲酸、4-O-没食子酰白芍苷、没食子酸甲酯、没食子酸乙酯、（1，2，3，4，6）-五没食子酰基葡萄糖、6'-O-没食子酰白芍苷、儿茶素及没食子酸。材料：33批白芍样品均购自国内各大药店。

1.3 白芍指纹图谱的建立

1.3.1 供试品溶液的制备：精密称取2 g经60目筛筛过的白芍粉末。将20 ml浓度为60%的乙醇加入到上述白芍粉末中进行回流处理，间隔2 h提取一次溶液，共提取3次。将3次提取的液体混合在一起，进行减压处理，蒸除其中的乙醇，得到白色粉末。用二氯甲烷与乙酸乙酯对上述白色粉末进行萃取，减压回收乙酸乙酯萃取液。残渣用乙醇进行溶解并将其定容至10 ml的容量瓶中，晃动摇匀，在0.45 μm的滤网上过滤一遍，留置滤过溶液备用[2]。

1.3.2 色谱条件：色谱柱为Scincehome C18柱，以乙腈（A）与磷酸水溶液（PH值为2.7，B）作为流动相。检测波长为230 nm，进样量为10 μl，柱温为20℃，流速为1.0 ml/min。

1.4 白芍主要成分含量的测定

1.4.1 色谱条件：白芍主要成分含量测定的色谱条件与1.3.2相同。

1.4.2 制备对照品溶液：分别精密称取剂量为9.6 mg的没食子酸、5.1 mg的白芍苷、2.8 mg的没食子酸乙酯、1.9 mg的儿茶素、6.4 mg的芍药苷、1.0 mg的没食子甲酯。用10 ml容量瓶盛装上述样品。用甲醇对上述样品进行溶解，然后将溶液定容至刻度。将上述溶液摇晃均匀，用0.45 μm的微孔滤膜进行过滤，留取滤过溶液备用。

1.4.3 制备供试品溶液：精密称取2 g经60目筛筛过的白芍粉末。将10 ml浓度为60%的乙醇加入到上述白芍粉末中进行回流处理，间隔2 h提取一次溶液，共提取3次。将3次提取的液体混合在一起，进行减压处理，蒸除其中的乙醇，得到白色粉末。分别使用二氯甲烷与乙酸乙酯对上述白色粉末进行萃取，减压回收乙酸乙酯萃取液。残渣用乙醇进行溶解并将其定容至10 ml的容量瓶中，晃动摇匀，在0.45 μm的滤网上过滤一遍，留置滤过溶液备用。

1.4.4 白芍主要成分含量测定方法的验证 将0.2 ml、0.4 ml、0.8 ml、1.0 ml、1.2 ml、1.6 ml、2.0 ml的对照品溶液分别装入10 ml的容量瓶中，用甲醇定容至刻度，并摇晃均匀。取上述溶液10 μl，重复进样3次，注入高效液相色谱仪中，测量色谱的峰面积。横坐标取对照溶液浓度，纵坐标取峰面积，建立标准曲线图，获取回归方程的线性范围。

2 结果

2.1 用高效液相色谱指纹图谱法测定白芍质量的专属性

通过向高效液相色谱仪中注入10 μl的白芍提取溶剂后所获得的色谱图得知，测定白芍样品并未受到提取溶剂与液相系统的影响，这充分说明用高效液相色谱指纹图谱法测定白芍的质量具有较强的专属性。

2.2 用高效液相色谱指纹图谱法测定白芍质量的重复性

参考1.3.1项的操作步骤制备供试品溶液，进样后获得的色谱图显示各共有峰相对保留时间与相对峰面积的RSD均低于3.0%，这充分说明用高效液相色谱指纹图谱法测定白芍的质量具有较好的重复性。

2.3 白芍高效液相色谱指纹图谱的建立

参照1.3.2项的色谱条件依次进33批白芍样品与11批对照品，获得相应的色谱图像。指认出没食子酸、儿茶素、4-O-没食子酰白芍苷、白芍苷、没食子酸甲酯、6-O-没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖和芍药苷、（1，2，3，4，6）-五没食子酰基葡萄糖、甲苯酸、6'-O-没食子酰白芍苷、没食子酸乙酯共计10个峰。

2.4 白芍样品高效液相色谱指纹图谱的相似度

参照1.3.1项的操作方法将33批白芍样品制备成供试品溶液，根据各样本图谱与对照图谱的相似度可将这33批白芍样品的相似度分为相似度在0.750～1.00之间（第1类）与相似度低于0.750（第2类）两种。

2.5 白芍样品的聚类分析

分析33批白芍样品的指纹图谱，对各指纹图谱相对于样品称样量的表观含量进行计算，得到9×33阶原始数据矩阵。据此矩阵得知33批白芍样品分布在九维特征空间，同类相聚，异类相分。聚类分析显示白芍样品可分两大类，S1、S4～S30、S32、S33为第1类样品，S2、S3、S31为第2类样品。第1类样品的质量良好，化学成分相似；第2类样品化学成分的差异较大，质量一般。

2.6 用高效液相色谱指纹图谱法测定白芍样品中6种化合物的回归方程与线性范围

用高效液相色谱指纹图谱法测定白芍样品中6种化合物的回归方程与线性范围详见表1。

表1 用高效液相色谱指纹图谱法测定白芍样品中6种化合物的回归方程与线性范围

3 讨论

白芍的有效成分主要包括芍药苷、芍药内酯苷等。但这些有效成分的含量受白芍的产地、采收时间、品种、气候、加工方法等多种因素的影响。因此，采用有效的方法对白芍进行质量检测十分必要[3]。近年来的临床研究表明，用高效液相色谱指纹图谱法测定白芍质量的效果显著。

本次研究的结果证实，用高效液相色谱指纹图谱法测定白芍的质量具有较强的专属性和较好的重复性，既能完善白芍药品的质量控制，同时也能为科学评价白芍药品的质量提供参考和借鉴。

[1] 严倩茹,邬伟魁.基于HPLC指纹图谱技术的白芍及其制剂质量控制[J].中国执业药师,2016,13(11)：35-38.

[2] 童黄锦,白发平,汪小莉,等.不同产地白芍药品的指纹图谱研究[J].中医学报 ,2014,29(9)：1326-1329.

[3] 马玉,郭力,黄玉慧,等.白芍原药材与不同炮制加工品的高效液相色谱对比研究[J].成都中医药大学学报,2012,35(4)：42-45.

R927.2

B

2095-7629-（2017）14-0069-03

高喜凤，女，1974年4月出生，甘肃平凉人，本科学历，主管中药师，研究方向为中药鉴定与制剂