RF、抗CCP抗体、抗APF抗体、抗AKA抗体、抗MCV抗体联合检测诊断类风湿关节炎的价值

孙佳颖 王鑫 谢科杰 岳丽霞 汪佳佳 俞钟明

●临床研究

RF、抗CCP抗体、抗APF抗体、抗AKA抗体、抗MCV抗体联合检测诊断类风湿关节炎的价值

孙佳颖 王鑫 谢科杰 岳丽霞 汪佳佳 俞钟明

目的 探讨类风湿因子（RF）、抗环瓜氨酸（CCP）抗体、抗核周因子（APF）抗体、抗角蛋白（AKA）抗体、抗突变型瓜氨酸波形蛋白（MCV）抗体联合检测诊断类风湿关节炎（RA）的价值。方法 检测RA组（196例）、非RA组（157例）、健康对照组（73例）上述5种指标的阳性率、灵敏度和特异度，以及不同方案联合检测后的灵敏度和特异度。 结果 RF、抗CCP抗体、抗APF抗体、抗AKA抗体、抗MCV抗体灵敏度分别为76.02%、75.00%、45.92%、44.39%、72.45%，特异度分别为79.57%、96.52%、94.78%、96.09%、94.78%。RF与抗CCP抗体联合检测灵敏度为93.37%，特异度78.26%，RF、抗CCP抗体、抗APF抗体、抗AKA抗体、抗MCV抗体5个指标联合检测灵敏度为96.43%，特异度为75.65%。结论 在5种指标中，RF、抗CCP抗体、抗MCV抗体灵敏度相对较高，除RF外，抗CCP抗体、抗APF抗体、抗AKA抗体、抗MCV抗体特异度均很高。5种指标联合检测后，灵敏度大大提高，特异度略有下降。

类风湿关节炎 联合检测 类风湿因子 抗环瓜氨酸抗体 抗核周因子抗体 抗角蛋白抗体 抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种以关节软骨侵蚀为主要表现的多系统炎症性自身免疫性疾病，早期病理改变主要是自身免疫性抗体产生和免疫复合物形成[1]。RA全球患病率约0.5%～1%，中国RA发病率约0.3%。RA可造成不同程度的关节破坏和功能障碍，是致残率较高的疾病之一[2]。早期诊断与治疗可以尽早阻止RA疾病进展，延缓和控制关节滑膜侵蚀，避免造成患者肢体残疾及自理能力障碍。目前有越来越多的RA相关抗体已应用于临床。早在1987年，美国风湿病学会（American College of Rheumatology，ACR）就将类风湿因子（rheumatoid factor，RF）纳入诊断标准，抗环瓜氨酸（cyclic citrullinated peptide，CCP）抗体也于 2010年被ACR/欧洲抗风湿病联盟（EULAR）引入指南。尽管新标准较老标准有较高的敏感性，但当RF与抗CCP均阴性时，许多症状尚未发生或临床前阶段的RA患者通过新标准很难被鉴别出来，这时候联合检验其他RA相关的自身免疫抗体就能发挥其诊断作用[3]。笔者探讨了RF、抗CCP抗体、抗核周因子（anti-perinuclear factor，APF）、抗角蛋白（anti-keratin antibodies，AKA）抗体、抗突变型瓜氨酸波形蛋白（anti-mutated citrullinated vimentin，MCV）抗体联合检测在诊断RA的意义。

1 对象和方法

1.1 对象 选择2016年1月至12月在本科住院的RA患者196例（RA组）和其他自身免疫性疾病且不合并RA患者157例（非RA组）。RA的诊断根据2010年ACR/EULAR修订的RA分类标准。选择同期本院体检且体检结果无明显异常的73例作为健康对照组。3组间性别、年龄比较差异均无统计学意义，详见表1。

表1 3组间性别、年龄的比较

1.2 仪器与试剂 RF检测试剂由芬兰欧琳公司提供，采用免疫比浊法测定，检测仪器为奥林巴斯AU5400，＞12.5U/ml为阳性。抗CCP抗体试剂由上海科新生物技术有限公司，采用ELISA测定，＞25U/ml为阳性。抗AKA抗体与抗APF抗体试剂均由北京和杰创新生物技术有限公司提供，采用间接免疫荧光法，若包被人颊黏膜上皮细胞核周围圆形不规则荧光颗粒的细胞数量≥5个，则判定为APF阳性，若包被大鼠食管细胞角质层出现线状荧光，则判定为AKA阳性。MCV抗体试剂由德国OGENTIC公司提供，采用ELISA法检测，＞30U/ml为阳性。其中，RF、抗CCP抗体、抗MCV抗体为定量分析，抗APF抗体、抗AKA抗体为定性分析。

1.3 方法 清晨空腹抽采集3ml血液标本，室温静置30min后离心，分离血清。RF为当日检测，抗CCP抗体、抗APF抗体、抗AKA抗体、抗MCV抗体为当日或2d内检测，非当日检测的血清标本放置于-20℃冰箱保存，采用同一批次的试剂盒由同1位技术人员进行操作及结果判断。

1.4 统计学处理 应用SPSS 19.0统计软件，计量资料以表示，多组间比较采用方差分析，两两比较采用SNK-q检验；计数资料组间比较采用χ2检验；计算5种抗体单一检测及联合检测的灵敏度和特异度。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3组间RF、抗CCP抗体、抗APF抗体、抗AKA抗体、抗MCV抗体阳性率的比较 5项指标阳性率RA组＞非RA组＞健康对照组，RA组5项指标阳性率均高于非RA组与健康对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.01）。详见表 2。

表2 3组间RF、抗CCP抗体、抗APF抗体、抗AKA抗体、抗MCV抗体阳性率的比较[例（%）]

2.2 RF、抗CCP抗体、抗APF抗体、抗AKA抗体、抗MCV抗体的灵敏度、特异度比较 检测单一抗体，灵敏度分别为RF＞抗CCP抗体＞抗MCV抗体＞抗AKA抗体＞抗APF抗体。在5种指标中，RF、抗CCP抗体、抗MCV抗体灵敏度相对较高，除RF外，抗CCP抗体、抗APF抗体、抗AKA抗体、抗MCV抗体特异度均很高。详见表3。

表3 RF、抗CCP抗体、抗APF抗体、抗AKA抗体、抗MCV抗体的灵敏度、特异度比较（%）

2.3 不同联合检测方案阳性率和灵敏度、特异度的比较 设定其中一项检测指标阳性则为联合测定阳性。其中RF、抗CCP抗体、抗APF抗体、抗AKA抗体、抗MCV抗体5个指标联合灵敏度最高，抗APF抗体、抗AKA抗体、抗MCV抗体3项指标联合检测特异度最高。抗CCP抗体、抗APF抗体、抗AKA抗体、抗MCV抗体4项指标联合检测的灵敏度和特异度均较好，联合检测后，灵敏度大大提高，特异度略有下降。详见 表4。

表4 不同联合检测方法阳性率和灵敏度、特异度的比较[例（%）]

3 讨论

在RA诊断依据中，RF应用最为广泛。60%～80%RA患者RF阳性，其他自身免疫性疾病、慢性炎性疾病，疟疾等感染性疾病，健康人群也可以显示RF阳性。RF是针对IgG Fc段的自身抗体，由血清学阴性转化为血清学阳性通常在疾病活动的第1年发生。RF、抗CCP抗体、抗APF抗体、抗AKA抗体阳性及其滴度与RA疾病活动度和严重度、预后相关。抗CCP抗体、抗APF抗体、抗AKA抗体、抗MCV抗体、瓜氨酸化纤维蛋白原、瓜氨酸化Ⅱ型胶原等均属于抗瓜氨酸化蛋白抗体（anti-citrullinated peptide antibodies，ACPAS），其靶抗原均是瓜氨酸蛋白。ACPAs在RA诊断中发挥着越来越重要的意义[4]。抗CCP抗体是目前公认的RA标记性抗体，血液、关节液等均可检出该抗体，在RA发生3～5年前即可被测到，是诊断和预测患者预后的可靠指标[5-6]。抗CCP抗体特异度95%～98%，第一代试剂盒灵敏度约60%～68%，第二代75%～80%，第三代则更高[7]。尽管抗CCP抗体特异度很高，在诊断RA意义重大，但也有报道原发性干燥综合征患者中有7.5%可以检测到抗CCP抗体阳性[8]。自1964年Nienhuis等首次发现APF后[9]，对其研究逐步深入，抗APF抗体靶抗原存在于人颊黏膜角质透明颗粒中，在疾病早期即可检出。1979年Young等以Wsitar大鼠食管上皮为底物，首先在RA患者血清中发现AKA[10]。与抗CCP抗体、抗APF抗体、抗AKA抗体不同，抗MCV抗体不仅具有良好的特异度（90.8%～96.6%）[11-12]，也表现出良好的灵敏度（69.5%～79.6%）。体外实验证实，瓜氨酸波形蛋白抗体引发构象改变从而引发细胞凋亡。波形蛋白是中间纤维蛋白表达的一种细胞骨架，它耦合与解耦受磷酸化与瓜氨酸化调节[2]。RF与抗CCP抗体、抗APF抗体、抗AKA抗体、抗MCV抗体都是目前诊断RA的有效工具。除了上述5个检测指标，越来越多类风湿相关的自身抗体被发现，如抗Carp抗体[13]、Ⅱ型胶原蛋白、组蛋白、抗不均一核糖核蛋白-A2（heterogeneous nuclear ribonucleoprotein-A2，RA33）抗体、Sa抗体、钙蛋白酶抑制蛋白、软骨糖蛋白 39（glycoprotein-39，gp39）、滑膜蛋白、细胞骨架成分[14]、6-磷酸葡萄糖异构酶（glucose-6-phosphate isomerase，GPI）、免疫球蛋白重链结合蛋白（Bip）、热休克蛋白（heat shock protein，HSP）、p68 以及更多的一系列 RA抗体等[15]。对这些新抗体进行研究开发，与目前RA抗体联合检测可提高RA诊断率，判断疗效、预后等。

本研究发现，通过联合检测，可以大大提高RA的灵敏度，帮助临床医生尽早准确地诊断疾病，且能发现将来有可能发展成为RA的健康人群，对患病风险高的患者可早期甄别并提前干预，延缓RA病程进展。在上述4种联合检测方案中，抗CCP抗体、抗APF抗体、抗AKA抗体、抗MCV抗体联合检测的特异度、灵敏度均较高。本文研究显示，上述5种指标联合检测能覆盖绝大部分RA患者，因此，对于血清RF及上述4抗体均阴性的关节炎，诊断RA时需慎之又慎[16]，以排除其他疾病可能。因此，在临床实践中，应辩证地解读RA相关指标，对RA进行更深入的研究，以期发现更灵敏更特异的RA相关抗体。

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（本文由浙江省医学会风湿病学分会推荐）

Combined detection of RF,ACCP,APF,AKA and AMCV in diagnosis of rheumatoid arthritis

SUN Jiaying,WANG Xin,XIE Kejie,et al.
Department of endocrinology and rheumatology,Shaoxing People's Hospital,Shaoxing 312000,China

Objective To assess the diagnostic value of combined detection of rheumatoid factor(RF),anti-cyclic citrullinated peptide antibodies(ACCP),anti-perinuclear factor(APF),anti-keratin antibodies(AKA)and anti-mutated citrullinated vimentin antibodies(AMCV)in rheumatoid arthritis(RA). Methods Serum levels of RF,ACCP,APF,AKA and AMCV were detected in 196 RA patients,157 non-RA patients and 73 healthy subjects.The sensitivity and specificity of individual indicators and various combination of above indicators in diagnosis of RA were analyzed.Results The sensitivities of RF,ACCP,APF,AKA and AMCV in diagnosis of RA were 76.02%,75.00%,45.92%,44.39%and 72.45%,respectively;the specificities were 79.57%,96.52%,94.78%,96.09%and 94.78%,respectively.The sensitivity and specificity of combined detection of RF and ACCP were 93.37%and 78.26%.The sensitivity and specificity of combined detection of 5 indicators were 96.43%and 75.65%. Conclusion RF,ACCP and AMCV have have sensitivities,while ACCP,APF,AKA and AMCV have high specificities in diagnosis of RA.Combined detection of these five indicators can improve the sensitivity in diagnosis of RA.

Rheumatoid arthritis Combined detection Rheumatoid factor Anti-perinuclear factor Anti-keratin antibodies Anti-mutated citrullinated vimentin antibodies

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.21.2017-932

312000 绍兴市人民医院内分泌代谢风湿免疫科

俞钟明，E-mail:yuzhongming5758@163.com

2017-04-22）

严玮雯）