12株雏鸡大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

卢国民 韩明宝 陈书文 尤永君*

（1.天津瑞普生物技术股份有限公司，天津 300380；2.河北廊坊康达畜禽养殖公司，河北廊坊 065000）

12株雏鸡大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

卢国民1韩明宝1陈书文2尤永君1*

（1.天津瑞普生物技术股份有限公司，天津 300380；2.河北廊坊康达畜禽养殖公司，河北廊坊 065000）

本文通过对河北某大型孵化场雏鸡卵黄囊进行病料采集，利用病原分离、培养特性、染色特性、生化试验等对病原进行了分离鉴定，结果表明，分离出的大肠杆菌对大多数抗菌药物敏感。

雏鸡；大肠杆菌；分离鉴定；药敏试验

早期雏鸡检测对早期雏鸡细菌性疾病具有重要意义，本文对河北某孵化场60只雏鸡进行卵黄囊细菌分离鉴定及药敏试验，为开口药及细菌病的预防提供依据。

1 材料与方法

1.1 病料来源

病料采自河北某孵化场雏鸡。

1.2 主要试剂

普通营养琼脂培养基、麦康凯琼脂、三糖铁琼脂（TSI）均购自北京路桥技术有限公司；大肠杆菌显色培养基为青岛海博生物技术有限公司产品；葡萄糖蛋白胨水、糖发酵管、西蒙氏枸橼酸盐琼脂、药敏纸片均购自杭州天和微生物试剂有限公司。

1.3 细菌的分离

无菌取雏鸡的卵黄囊，分别划线接种于普通营养琼脂、麦康凯琼脂培养基，37℃恒温培养24h，观察细菌生长情况及菌落特征。划线接种于麦康凯培养基及大肠杆菌显色培养基上，培养24h，挑取一环细菌的纯培养，进行革兰氏染色镜检。

1.4 生化鉴定

挑取纯培养物，接种糖发酵管、三糖铁琼脂培养基，37℃恒温培养24h观察结果。

挑取典型菌落进行吲哚试验、MR试验、VP试验及柠檬酸盐利用试验。

1.5 纸片扩散法药敏试验

将浓度为108CFU/mL的新鲜菌液涂布普通营养琼脂平板，放置5min后，将10种药敏纸片贴于平板表面，37℃培养18h后观察结果，根据CLSL标准进行药物敏感性评价。

2 结果与分析

2.1 培养结果

60只雏鸡共分离出15株细菌。分离菌在普通琼脂培养基上为圆形隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐、半透明的灰白色菌落；其中12株分离菌在麦康凯培养基上形成桃红色、光滑、中等大小的菌落。在大肠杆菌显色培养基上形成蓝绿色菌落。

2.2 形态及生化鉴定

各分离菌革兰氏染色镜检，可看到淡红色、短小的杆状细菌。各分离菌均可以分解葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇，产酸产气，60%的菌株还利用蔗糖；三糖铁琼脂培养基上斜面和底层均产酸，变黄，产气，不产生硫化氢；IMViC试验结果为“+ + --”。根据伯杰氏细菌鉴定手册，上述分离菌均符合大肠杆菌的特性，因此可以确定其为大肠杆菌。

2.3 药敏试验结果

根据CLSI标准，12株大肠杆菌对不同药物的药敏纸片的抑菌情况如下表。

表1 药敏试验结果

由表1可以看出，从雏鸡卵黄囊中分离的大肠杆菌对头孢喹肟、恩诺沙星、新霉素、安普霉素最为敏感，对林可霉素、替米考星、卡那霉素耐药。12株大肠杆菌均为多耐菌株，其中3个2耐菌株，4个3耐菌株，1个4耐菌株，1个5耐菌株，2个6耐菌株，1个7耐菌株。

3 讨论

本次分离的12株雏鸡大肠杆菌对头孢喹肟、恩诺沙星、新霉素、安普霉素4种抗菌药物敏感率为超过60%，可根据此结果进行雏鸡的开口用药及1日龄与油苗混合注射的抗生素的筛选，在12株大肠杆菌中有多株多重耐药菌，有3株细菌对6种以上细菌耐药。多重耐药现象的出现可能与种鸡滥用抗生素有关，许多养殖户滥投抗生素，或在饲料及饮水中长期添加抗菌药物进行疾病预防，都会造成耐药性提高。药敏试验结果表明，应对雏鸡卵黄囊进行分离细菌，应尽可能通过药敏试验筛选敏感药物，为开口药提供依据。

[1] 胡桂学.兽医微生物学实验教程[M].北京：中国农业大学出版社，2006：47-60.

卢国民（1990—），男，硕士生，山东潍坊人，主要从事兽医微生物与免疫学方面的研究工作。

尤永君，博士，主要从事动物临床诊断。