Gene—Xpert MTB/RIF在西藏地区结核病诊断中的应用研究

2017-11-07 11:58嘎松卓嘎普芝巴桑琼达小尼玛
中国实用医药 2017年26期
关键词:利福平耐药

嘎松卓嘎+普芝+巴桑琼达+小尼玛

【摘要】 目的 探讨Gene-Xpert MTB/RIF在西藏地区结核病诊断中的应用价值。方法 对974例可疑结核病患者的标本同时进行结核涂片抗酸染色镜检和Gene-Xpert MTB/RIF检测。对比两种检测结果。结果 974例检测标本中, Gene-Xpert MTB/RIF检测阳性率为12%(118/974), 其中利福平敏感的标本为93例, 利福平耐药的标本为25例(耐药率为21%)。抗酸染色阳性标本为15例, 检测阳性率为2%。Gene-Xpert MTB/RIF检测阳性率高于抗酸染色, 差异具有统计学意义 (P<0.05)。结论 Gene-Xpert MTB/RIF在西藏地区结核病诊断和治疗中具有较好的临床应用价值, 且方法简便、快速。

【关键词】 Gene-Xpert MTB/RIF;结核分枝杆菌;利福平;耐药

DOI:10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.26.012

【Abstract】 Objective To investigate the application value of Gene-Xpert and MTB/RIF in the diagnosis of tuberculosis in Tibet. Methods Specimens of 974 suspected tuberculosis patients all received acid fast staining microscopy and Gene-Xpert MTB/RIF test by tuberculosis smear, and the two test results were compared. Results Among 974 test specimens, the positive rate of Gene-Xpert MTB/RIF was 12% (118/974), including 93 rifampicin-sensitive specimens and 25 rifampicin-resistant specimens (resistance rate as 21%). There were 15Acid-positive specimens, with detection positive rate as 2%. The positive rate of Gene-Xpert MTB/RIF was higher than that of acid-fast staining, and the difference was statistically significant (P<0.05). Conclusion Gene-Xpert

MTB/RIF shows excellent clinical application value in diagnosis and treatment of tuberculosis in Tibet, and this method is simple and rapid.

【Key words】 Gene-Xpert MTB/RIF; Mycobacterium tuberculosis; Rifampin; Resistance

在中國, 结核病患者高达130万, 位居世界第二, 是全球22个结核高负担国家之一[1]。而结核病治疗中耐药成为严重影响治疗效果的问题, 在我国15岁以下人群结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis, MTB)的耐药率达6.8%[2]。西藏自治区结核病发病率高, 是因结核病致贫的重灾地区之一, 截止2013年统计, 西藏自治区现有结核杆菌感染者约为80万人, 传染性肺结核患者占15642/800000, 81.8%的患者来自偏远农牧地区, 以青壮年为主, 并每年约有360人死于结核病[3]。结核病的诊断中, 实验室病原学检测成为确诊的重要依据, 是结核病治疗和防治效果评价的技术关键, 是确诊耐多药结核病的重要依据。随着基层医院条件及技术人员的不断增强, 引进的新型检测技术Gene-Xpert MTB/RIF在结核病的诊断和治疗, 提高农牧民为主的患者的治愈率, 减轻农牧民患者经济和精神负担发挥着重要的作用。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 收集2016年5~12月西藏自治区人民医院门诊及住院974例疑似结核病患者的痰、尿液、脑脊液、胸腹水等标本。患者年龄12~66岁, 其中男562例, 女412例。标本类型中痰标本822例, 积液标本84例, 尿标本53例, 脑脊液标本8例, 腹水标本3例, 脓液标本2例, 肺泡灌洗液标本2例。

1. 2 仪器与试剂 Gene-Xpert MTB/RIF检测仪器为美国Cepheid 公司生产的全自动医用PCR分析系统, 试剂名称为Gene-Xpert MTB/RIF试剂盒(批号:1000029824)。抗酸染色试剂为贝索公司的抗酸染液(批号:41611)。

1. 3 方法

1. 3. 1 抗酸染色及镜检 按照中国结核病防治规划《痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册》中要求进行操作。

1. 3. 2 Gene-Xpert MTB/RIF检测 将标本(痰、脑脊液、胸腹水等标本)与含氢氧化钠及异丙醇的处理液常规按1∶2比

例混合, 震荡, 室温静置15 min, 再将混合液转移至一次性多室塑料反应盒中, 置于Gene-Xpert 检测仪器进行全自动检测, 约2 h即可在检测软件窗口直接读取结果。此反应体系中还包含1个球芽孢杆菌特异性探针作为内对照, 以判断DNA扩增效率及检测效率。

1. 4 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件进行统计分析。计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。endprint

2 结果

2. 1 Gene-Xpert MTB/RIF检测结果 974例检测标本中, 结核分枝杆菌聚合酶链式反应(PCR)阳性结果为118例, 阳性率为12%;阳性标本中, 痰标本有109例, 积液有3例, 尿标本有6例。118例阳性标本中, 利福平敏感的标本为93例, 利福平耐药的标本为25例(耐药率为21%)。

2. 2 抗酸染色结果 974例检测标本中, 抗酸染色阳性标本为15例, 阳性率为2%。其中13例痰标本, 2例尿液标本。

2. 3 Gene-Xpert MTB/RIF检测和抗酸染色结果比较 Gene-Xpert MTB/RIF检测阳性率为12%, 高于抗酸染色的2%, 差异具有统计学意义 (P<0.05)。见表1。

3 讨论

西藏自治区作为结核病高发地区, 特别在农牧民地区, 结核病已成为严重危害群众健康重大疾病, 也是导致群众生活水平下降的重要因素。为此, 提高诊断技术, 精确发现和提供结核耐药结果, 提高结核治愈率, 减少人际传播成为阻断结核病在西藏地区进一步传播的重要措施之一。

Gene-Xpert MTB/RIF系统采用半巢式实时荧光定量PCR技术, 利福平耐药相关rpoB基因为靶基因, 采用6种分子信标同时检测6种探针, 其中5个相互重叠的分子探针选择性覆盖rpoB基因利福平耐药决定区81bp核心区, 以检测利福平耐药[4-6]。全自动医用PCR仪, 不受高海拔低气压的影响, 可在高原地区使用。

本研究结果显示: 974例检测标本中, Gene-Xpert MTB/RIF检测阳性率为12%(118/974), 其中利福平敏感的标本为93例, 利福平耐药的标本为25例(耐药率为21%)。抗酸染色阳性标本为15例, 阳性率为2%。Gene-Xpert MTB/RIF检测阳性率高于抗酸染色, 差异具有统计学意义 (P<0.05)。Gene-Xpert MTB/RIF阳性检出率明显高于抗酸染色, 适合涂片阴性的患者。采用Gene-Xpert MTB/RIF检测方法可以发现94%以上的经培养证实的结核病患者, 包括90%以上涂片阴性的患者, 可以大大提高结核病的实验室诊断效率[7-10]。

综上所述, Gene-Xpert MTB/RIF检测系统操作简单, 生物安全要求较低, 易于在西藏地区开展。但Gene-Xpert MTB/RIF检测虽然方便、快捷, 但成本较高, 检验费用较高。在西藏地区更适用于区县级疾病预防控制中心, 以免费用于当地农牧民的结核病的诊断和治疗。

参考文献

[1] 林雪峰, 支晓阳. Gene-Xpert MTB/RIF实时荧光定量PCR在肺结核诊断和利福平耐药检测中的应用. 中国卫生检验杂志, 2017, 27(6):853-854.

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[4] 夏輝, 赵雁林. Xpert MTB/RIF在我国的应用前景. 实用医学杂志, 2013, 29(23):3799-3800.

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[收稿日期:2017-07-18]endprint

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