DS-1-47促着床的靶点分子筛选研究*

章晓燕 李彦玲 吴艳丽 吴云霞

华中科技大学同济医学院药学院中药系，武汉 430030

10.3969/j.issn.1674-4616.2017.03.005

·实验研究·

*国家自然科学基金资助项目(No.81373873)

△通信作者，Corresponding author，E-mail：wuyunxia@hust.edu.cn

#共同为第一作者

DS-1-47促着床的靶点分子筛选研究*

章晓燕#李彦玲#吴艳丽 吴云霞△

华中科技大学同济医学院药学院中药系，武汉 430030

目的研究筛选DS-1-47促着床的分子靶点。方法采用皮下注射吲哚美辛的方法建立胚泡着床障碍动物模型，动物随机分为正常组(N)、模型组(M)和中药组(Z)，运用蛋白组学激光捕获显微切割技术-二维电泳-质谱(LCM-DE-MS)的技术路线研究分析DS-1-47作用前后子宫组织中蛋白分子的变化，筛选得到DS-1-47促进着床的关键分子，从而深入阐明其发挥作用的分子机制。结果Z组能使11种蛋白质的表达发生明显改变，其中3种蛋白质的表达M组较N组明显下调，Z组较M组明显上调，这3种蛋白质经鉴定分别为肝羧酸酯酶、丝氨酸蛋白酶抑制剂、载脂蛋白A-Ⅰ；另外8种蛋白质的表达M组较N组明显上调，Z组较M组明显下调，蛋白质分别为血液结合素、激肽原-1、丝氨酸蛋白酶抑制剂A3K、α-1-抗胰蛋白酶1-3、结合珠蛋白、延伸因子-1-Δ、膜联蛋白A5、血清淀粉样蛋白P成分。结论血液结合素、结合珠蛋白、载脂蛋白A-Ⅰ、膜联蛋白A5、激肽原-1、延伸因子-1-Δ、丝氨酸蛋白酶抑制剂等可能是复方DS-1-47促进着床的重要靶点。

DS-1-47；着床；蛋白质组学；激光捕获显微切割技术-二维电泳-质谱

DS-1-47是从临床促孕复方中筛选得到的具有促进胚胎着床作用的中药复方有效组分[1]，复方由黄芪、黄芩、白术和续断组成，这四味中药是临床常用的妊娠安全用药。黄芪、白术、续断三药君臣相配，使胎元稳固，胎有所系，胎有所长，还可安胎、抑制宫缩，从母体与胚胎双方面保证妊娠顺利进行。黄芩凉血安胎，既可佐助白术，降低自然流产小鼠蜕膜的凋亡反应，具有一定保胎作用[2]；亦可反佐白术之温，调和药性，与白术相反相成。4味中药，寒温并用，补泻兼顾，充分协调脏腑功能，使机体处于最佳受孕状态。

蛋白质组学是对蛋白质结构和功能的大规模研究，包括蛋白质的表达水平、翻译后的修饰、蛋白与蛋白的相互作用等，由此获得蛋白质水平上的关于疾病发生、细胞代谢等过程的整体而全面的认识。蛋白质组学已成为生物、临床和药学研究不可或缺的重要组成部分。蛋白组学激光捕获显微切割技术-二维电泳-质谱(LCM-DE-MS)是由马克·威尔金斯提出的一条经典的蛋白质组学研究的技术路线[3]。质谱在解决重要生物学问题中是必不可少的[4]。将质谱应用于深入分析蛋白质组学、生物分子复合物以及翻译后修饰的识别与定位等，有助于发现药物疗效相关分子。目前，此技术已被广泛应用于传统针灸经络的作用基础研究、中医疗效评价、中药鉴定等领域，是当前中医领域中的研究热点[5]。

中药的化学成分复杂，而临床上又多以复方为主，致使其药效物质基础和作用机制的研究非常困难。这严重阻碍了中医药走向世界的步伐。因此，在中医药理论指导下，借助现代生物医学的研究方法，通过多视角切入、多技术联合辅助、多学科渗透交叉，对中药进行系统全面的研究势在必行。中医药的发展要取得突破性进展必须依靠系统生物学技术[6]，蛋白质组学作为系统生物学的组成部分，与中药的多成分、多靶点作用、多代谢途径的特点相契合，是研究中医药作用机制的强有力工具[7]。

本实验采用皮下注射吲哚美辛的方法建立胚胎着床障碍小鼠，吲哚美辛是一种前列腺素抑制剂，前列腺素在胚胎着床以及子宫蜕膜化过程中发挥重要作用[8-9]，既往已有研究[10]发现前列腺素抑制剂吲哚美辛的抗着床作用，并且其抑制子宫血管渗透性和子宫内膜的蜕膜化有关。本研究运用LCM-DE-MS技术路线，分析DS-1-47作用前后子宫组织细胞中蛋白质表达差异的变化，以期筛选得到DS-1-47促进胚泡着床的关键作用分子，从而为深入阐明其药效作用的分子调控机制和作用靶点打下基础。

1 材料与方法

1.1 实验动物

选用健康清洁级昆明小鼠，雌鼠未交配，雄性证明有生育能力，体重(25.0±3.0) g，由华中科技大学同济医学院动物实验中心提供。饲养于室温20～22 ℃，相对湿度40%～60%的动物房内，自由摄食、饮水，光照12 h，黑暗12 h。

1.2 药材及药物制备

黄芪、人参、白术、续断四味药材均购置于安徽亳州，由华中科技大学同济医学院药学系汪建平博士鉴定。上述药材按比例混合，用60%的乙醇加热回流提取2次，每次2 h。40 ℃真空浓缩获得粗提物。然后用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取，40 ℃真空浓缩乙酸乙酯部分，得到的粗提物进行硅胶柱层析，用二氯甲烷和甲醇进行梯度洗脱(CH2Cl2：MeOH 40：1→1：1)。收集合并40：1，38：1，36：1，28：1，16：1，12：1，2：1馏份，浓缩至25 mg/ml，即促孕有效活性成分DS-1-47。

1.3 仪器与试剂

冷冻离心机(湘仪H5050R)，超声仪(宁波新芝生物科技股份有限公司，JY96-Ⅱn)，等电聚焦仪(GE ETTAN IPGphor3)，扫描仪(MICROTEK Scan Maker i800)，真空干燥仪，水浴锅，质谱仪(美国ABI4700 MALDI TOF)。

吲哚美辛、去离子水、胎牛血清、甲醇、丙酮、乙醇、冰醋酸、甲醛、硝酸银、Na2EDTA•H2O、硫代硫酸钠、无水乙酸钠、磷酸、盐酸，以上化学试剂皆为分析纯试剂，购自广州化学试剂厂，溴酚蓝(Bio Basic Inc)，Tris-base(Amresco)，丙烯酰胺(Amresco)，N，N’-methylenebisacrylamide(Sigma)，胰酶(Promega V5280)，胰酶重溶液(Promega V530)，碳酸氢铵(Sigma A6141)，ZipTipC-18微量层析柱(Millipore ZTC18 M096)，三氟乙酸(GE Health Care)。

1.4 实验方法

1.4.1 建立小鼠胚泡着床障碍模型 将体重(40.0±2.0) g的雌鼠按照雌雄1：1比例合笼，次日晨8：00检查雌鼠阴道，发现阴栓的小鼠为造模成功小鼠，计为妊娠第1天。将明确有阴栓的小鼠随机分为正常组(N)、模型组(M)和中药组(Z)。M组和Z组分别在妊娠第3天和第4天的晨9：00和16：00于颈背部皮下注射吲哚美辛溶液，N组在相同时间注射麻油，3组均连续给药至第5天。于妊娠第5天颈椎脱臼处死小鼠，剖腹，取出小鼠子宫，置于液氮中保存。

1.4.2 双向凝胶电泳(2-DE)实验

1.4.2.1 蛋白质的提取和纯化 取小鼠子宫组织0.05～0.10 g，加入裂解液1.0 ml(40.0 mmol/L Tris、8.0 mol/L尿素、2.0 mol/L硫脲、3.0 mmol/L EDTA、50.0 mmol/L DTT、1.0 mmol/L PMSF和5.0 mg/ml亮肽酶素)，超声波提取，充分悬浮，12 000 r/min离心20 min，去除沉淀，收集蛋白质上清液。以牛血清蛋白为标准，用Bradford法测定蛋白质含量。

1.4.2.2 双向凝胶电泳 吸取适量样品溶液，加入水化液(7.0 mol/L尿素、2.0 mol/L硫脲、2% CHAPS、50.0 mmol/L DTT和0.4% IPG缓冲液)，放入标准型胶条槽中，为确保样品充分进入胶条，不要加过量的水化液。等电聚焦程序为4个阶段，第1阶段：500 V 1 h，第2阶段：1 000 V 1 h，第3阶段：10 000 V 3 h，第四阶段：10 000 V 4 h，整个聚焦过程所用总电压约60 kV/h。等电聚焦后，将胶条放入平衡A液[6.0 mol/L尿素、29.3%甘油、2% SDS、75.0 mmol/L Tris-HCl(pH=8.8)，2%(w/v)DTT]中平衡15 min，再将胶条放入平衡B液[6.0 mol/L尿素、29.3%甘油、2% SDS、75.0 mmol/L Tris-HCl(pH=8.8)，2.5%碘乙酰胺]。将IPG胶条转移至12%的SDS-PAGE凝胶上进行二维电泳。第二向电泳的程序为2个阶段，第1阶段：2 W/gel，60 min，第2阶段：17 W/gel直到溴酚蓝跑到底，约4.5 h。取出胶条进行考染，用Image Master 2D Platinum 5.0(GE)软件对染色的凝胶进行扫描和分析。

1.4.2.3 胶条酶解和质谱分析 选取图像分析得到的差异蛋白质点，从胶条上取下这些点，转入离心管中反复漂洗，加入脱色液进行脱色，颜色脱去后加水冲洗停止反应，再加入50%乙腈脱水，而后在蛋白质样品中加入胰酶37 ℃消化过夜。以2.5%三氟乙酸溶解肽段，用50%乙腈-0.5%三氟乙酸浓缩除盐，用等体积饱和基质混匀，在点靶仪上点样，风干后进行质谱分析。利用ABI4700 MALDI TOF质谱仪进行质谱分析。UV波长为355 nm，重复速率为200 Hz，加速电压为20 000 V，最优质量分辨率为1 500 Da，扫描质量范围为700～3 200 Da，收集信号。胰酶自切峰为内标校正质谱仪。所有实验样品的质谱图均用默认模式获得。

1.4.2.4 蛋白质鉴定及数据库查询 利用Matrix Science公司的Mascot软件搜索IPI-mouse数据库，寻找匹配的相关蛋白质，查询其功能，明确鉴定蛋白质为何种蛋白质。参数设置如下：物种来源选择为小家鼠；肽质量控制在800～4 000 Da；肽片段分子量最大容许误差为±50 ppm；酶解片段不完全选择为1～2个；固定修饰为半胱氨酸碘乙酰胺化，可变修饰为蛋氨酸氧化。

2 结果

2.1 3组的二维凝胶电泳

用分析软件Image Master 2D Platinum 5.0进行差异表达分析，得到相关数据。对比3组的分析数据，N组与M组比较，M组有29种蛋白质的含量降低，有31种蛋白质的含量升高；M组与Z组比较，Z组有30种蛋白质的含量升高，标记为A1～A30，有25种蛋白质的含量降低，标记为B1～B25。综合分析N组、M组和Z组的数据，有15种蛋白质是3组共有，其中12种蛋白质Z组含量比M组低，剩下3种蛋白质Z组的含量比M组高，这15种蛋白质很可能就是DS-1-47促进小鼠胚泡着床的作用靶点。见图1～2。

N：正常组；M：模型组；Z：中药组图1 二维凝胶电泳图

2.2 3组的质谱鉴定结果

用质谱分析鉴定被胰酶消化后的蛋白质点，其中B21所对应的蛋白质点没有检测出。通过序列相似性，M组上调但Z组下调的蛋白质被鉴定为血液结合素、激肽原-1(2个点重复)、丝氨酸蛋白酶抑制剂A3K(3个点重复)、α-1-抗胰蛋白酶1-3、结合珠蛋白、延伸因子-1-Δ(2个点重复)、膜联蛋白A5、血清淀粉样蛋白P成分；M组下调但Z组上调的蛋白质被鉴定为肝羧酸酯酶、丝氨酸蛋白酶抑制剂、载脂蛋白A-Ⅰ。见表1。

N：正常组；M：模型组；Z：中药组 注：标记为A类和B类的点是3组样本共有的含量改变的15种蛋白质，A类为Z组上调蛋白质，B类为Z组下调蛋白质。图2 3组中差异表达的蛋白质点

编号蛋白质名称分子量PI等电点序列覆盖率(%)肽匹配数匹配分数A3肝羧酸酯酶N614185.101610259A6丝氨酸蛋白酶抑制剂A3K470215.054116369A28载脂蛋白A-Ⅰ305695.64277170B2血液结合素520497.923313238B3激肽原-1741406.05116140B4激肽原-1741406.051310176B5丝氨酸蛋白酶抑制剂A3K470215.053816347B8丝氨酸蛋白酶抑制剂A3K468595.592713216B9α-1-抗胰蛋白酶1-3459665.25198154B12结合珠蛋白392415.88197110B14延伸因子-1-Δ313884.9127694B15延伸因子-1-Δ313884.914130B16膜联蛋白A5357874.8318685B17血清淀粉样蛋白P成分264015.98266257

注：将蛋白的分子量、PI等电点、序列覆盖率、肽匹配数以及匹配分数5个指标与IPI-mouse数据库相比较，寻找出匹配的相关蛋白质，鉴定出差异表达蛋白的种类。

3 讨论

在前期研究[11]中已经发现DS-1-47具有良好的促胚胎着床效果，本研究运用LCM-DE-MS技术路线对差异表达的蛋白进行筛选，以期找到其作用的分子靶点。

胚泡的植入过程是妊娠的关键步骤，这是一个非常复杂的过程，其调控机制既复杂又微妙，涉及多种基因、生物分子、细胞因子和信号通路。成功的着床依赖于胚胎和子宫内膜的同步发育、识别和容受，亦与子宫内膜微环境、激素水平及免疫反应相关，这一过程与蛋白质的表达密切相关。已有研究[12]发现，胚胎正常发育和非正常发育时，子宫内膜中蛋白质表达有很大差异。

结合珠蛋白主要存在于血浆中，在肾脏、肺和其他器官中也有存在，具有抗氧化、抗炎、免疫调节和血管生成作用。妊娠涉及免疫耐受和血管生成，而这正好与结合珠蛋白的作用相关。Herrler等[13]测定围胚胎植入期结合珠蛋白表达的变化，结果表明，受精后第5～6天，结合珠蛋白在子宫内表达量升高并且达峰值；研究[14]也表明怀孕妇女血清的结合珠蛋白水平明显高于未怀孕妇女，故结合珠蛋白被认为是预测着床成败的潜在标志。但本实验中N组和Z组结合珠蛋白的表达并未升高，而M组的结合珠蛋白表达很高，这种现象说明吲哚美辛使结合珠蛋白的表达升高，但DS-1-47降低了结合珠蛋白的表达。前期研究[11]中发现促孕复方是通过抑制NF-κB诱导免疫耐受，这可能是NF-κB在诱导免疫耐受占更主导地位，结合珠蛋白的作用被抵消。

膜联蛋白是一组结构上相关的蛋白质，涉及多种细胞及细胞生长、膜融合、信号转导等。膜联蛋白A5是钙依赖性磷脂结合蛋白，是磷脂酶A2和蛋白激酶C内源性抑制物，抑制钙离子通道的活性和信号转导，调控炎症及细胞的生长和分化。活化的磷脂酶A2水解甘油磷脂，产生花生四烯酸，具有促进细胞增殖的作用，也可活化蛋白激酶，导致细胞增殖。Karube等[15]发现与正常组织相比，子宫内膜的膜联蛋白A5的表达受到抑制。更重要的是，膜联蛋白A5和磷脂酰丝氨酸结合可能妨碍吞噬细胞对凋亡细胞的识别和结合，从而抑制细胞的凋亡[16]。胚胎着床包括定位、黏附和植入，本研究中，Z组膜联蛋白A5呈低表达，它在一定程度上促进了细胞的凋亡。从而有利于胚胎的黏附和着床，为胚胎着床提供了适宜的内部环境。

载脂蛋白在肝脏中合成。它是血浆脂蛋白的重要组成部分。载脂蛋白A-Ⅰ的主要作用是促进脂质运输，稳定脂蛋白的结构，调节酶的活性，并使血浆脂蛋白与细胞表面受体结合。研究[17]发现，怀孕期间载脂蛋白A-Ⅰ水平升高。从本研究中也可看到Z组的载脂蛋白A-Ⅰ的表达高于M组，表明DS-1-47可以上调载脂蛋白A-Ⅰ的表达从而为胚胎着床及发育提供足够的物质供应。

血液结合素是一种糖蛋白，主要在肝脏中合成，是一种急性期反应蛋白。此外，在免疫细胞、骨骼肌细胞、视网膜感光细胞和神经节细胞也有少量的合成[18]。血红素-血液结合素复合物诱导的淋巴细胞HO-1激活能抑制自身免疫反应，限制T细胞活化[19]。此外，它还具有抗凋亡和器官保护功能[20]。然而，与M组相比，DS-1-47下调血液结合素的表达，这可能与M组中强烈的免疫反应有关。

丝氨酸蛋白酶抑制剂是维持动物体内环境稳定性的重要因素。一旦平衡失调，就会导致各种疾病。丝氨酸蛋白酶抑制剂还参与免疫反应，对细胞迁移和分化、细胞基质的重构、激素生成和运输及其他重要的生理生化功能具有重要影响[21]。另外，它还具有抗血管生成的作用。血管的生成发生在着床和胎盘形成的早期。子宫内丰富的血管生成能为胚胎植入提供充足的血液供应。一旦血管生成出现障碍，胚胎着床以及胎盘的发育都会受到影响，更有甚者造成妊娠终止[22]。

激肽原是一种多功能的单链糖蛋白，主要由肝脏合成，在其他组织中也有少量表达[23]，参与血液的凝血反应。有研究[24]表明胎盘组织中激肽原的低表达有可能是子痫前期发生的重要原因。目前，还没有研究证明其是否在胚泡着床过程中发挥作用。

此外，延伸因子-1-Δ、肝羧酸酯酶、血清淀粉样蛋白P成分等因子在胚胎着床中的重要性有待进一步研究证明。

根据血液结合素、结合珠蛋白、载脂蛋白A-Ⅰ、膜联蛋白A5、激肽原-1、延伸因子-1-Δ、丝氨酸蛋白酶抑制剂的功能，它们在妊娠期间发挥着重要作用，是妊娠过程中必不可少的蛋白质，推测血液结合素、结合珠蛋白、载脂蛋白A-Ⅰ、膜联蛋白A5、激肽原-1、延伸因子-1-Δ、丝氨酸蛋白酶抑制剂等可能是复方DS-1-47促进着床的重要分子靶点，后期需进一步研究。

[1] 邓少荣.促孕复方促着床活性成分及作用机制的研究[D].武汉：华中科技大学，2013.

[2] 吴婧，吴焱森，赵长瑶.黄芩白术对自然流产小鼠保胎作用及对蜕膜细胞的bcl-2、bax表达影响的研究[J].现代中西医结合杂志，2011，20(8)：931-932.

[3] NAKAZONO M，QIU F，BORSUK LA，et al.Laser-capture microdissection，a tool for the global analysis of gene expression in specific plant cell types：identification of genes expressed differentially in epidermal cells or vascular tissues of maize[J].Plant Cell，2003，15(3)：583-596.

[4] DOMON B，AEBERSOLD R.Mass spectrometry and protein analysis[J].Science，2006，312(5771)：212-217.

[5] CHO WC.Application of proteomics in Chinese medicine research[J].Am J Chin Med，2007，35(6)：911-922.

[6] QIU J.Traditional medicine：a culture in the balance[J].Nature，2007，448(7150)：126-128.

[7] SUO T，WANG H，LI Z.Application of proteomics in research on traditional Chinese medicine[J].Expert Rev Proteomics，2016，13(9)：873-881.

[8] 邓文波，杨增明.前列腺素在胚胎着床和蜕膜化中的作用[J].中国细胞生物学学报，2008，30(3)：342-346.

[9] 赵振奥，杨增明.胚胎着床过程中的前列腺素调控网络[J].中国细胞生物学学报，2011，33(7)：808-815.

[10] 吴云霞，黄光英，龚萍，等.吲哚美辛致小鼠胚泡着床障碍模型的建立[J].中国药理学通报，2005，21(3)：373-375.

[11] DENG SR，LI JI，ZHANG ZQ，et al.DS147 Improves pregnancy in mice with embryo implantation dysfunction induced by controlled ovarian stimulation[J].J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci，2013，33(4)：573-580.

[12] 吕爱明，梁琳，王少为.围着床期血清差异蛋白质筛选[J].中国生育健康杂志，2013，24(6)：468-471，封3.

[13] HERRLER A，KRUSCHE CA，MULLER-SCHOTTLE F，et al.Haptoglobin expression and release by rabbit oviduct and endometrium，its localization in blastocyst extra-embryonic matrix and fluid during preimplantation time[J].Hum Reprod，2004，19(12)：2730-2737.

[14] SHIBATA S，SATO H，MAKI M.Calphobindin I(annexin V)inhibits protein kinase C[J].Tohoku J Exp Med，1992，166(4)：479-481.

[15] KARUBE A，SHIDARA Y，HAYASAKA K，et al.Suppression of calphobindin I(CPB I)production in carcinoma of uterine cervix and endometrium[J].Gynecol Oncol，1995，58(3)：295-300.

[16] 王小杰，李欣，武彦秋，等.膜联蛋白A5的结构与功能研究进展[J].承德医学院学报，2010，27(4)：413-415.

[17] BROSENS JJ，HODGETTS A，FEROZE-ZAIDI F，et al.Proteomic analysis of endometrium from fertile and infertile patients suggests a role for apolipoprotein AⅠ in embryo implantation failure and endometriosis[J].Mol Hum Reprod，2010，16(4)：273-285.

[18] CAMBORIEUX L，BERTRAND N，SWERTS JP.Changes in expression and localization of hemopexin and its transcrjpts in injured nervous system：a comparison of central and peripheral tissues[J].Neuroscience，1998，82(4)：1039-1052.

[19] CHORA AA，FONTOURA P，CUNHA A，et al.Heme oxygenase-1 and carbon monoxide suppress autoimmune neuroinflammation[J].J Clin Invest，2007，117(2)：438-447.

[20] MURATOGLU SC，MIKHAILENKO I，NEWTON C，et a1.Low density lipoprotein receptor-related protein 1(LRP1)forms a signaling complex with platelet-derived growth factor receptor-beta in endosomes and regulates activation of the MAPK pathway[J].J Biol Chem，2010，285(19)：14308-14317.

[21] 张兵，赵明沂，张嵘.丝氨酸蛋白酶抑制剂的研究进展[J].沈阳药科大学学报，2014，31(10)：836-842.

[22] KLAUBER N，ROHAN RM，FLYNN E，et al.Critical components of the female reproductive pathway are suppressed by the angiogenesis inhibitor AGM-1470[J].Nat Med，1997，3(4)：443-446.

[23] PALIOURAS M，DIAMANDIS EP.The kallikrein world：an update on the human tissue kallikreins[J].Biol Chem，2006，387(6)：643-652.

[24] 陈静，沈理，滕银成.组织激肽释放酶、激肽原在子痫前期患者胎盘中表达的研究[J].现代妇产科进展，2008，17(9)：676-679.

StudyandScreenoutPossibleMolecularTargetsofDS-1-47PromotingEmbryoImplantation*

ZHANG Xiaoyan#，LI Yanling#，WU Yanli，et al

DepartmentofTraditionaryChineseMedicine，SchoolofPharmacy，TongjiMedicalCollege，HuazhongUniversityofScienceandTechnology，Wuhan430030，China

ObjectiveTo study and screen out possible molecular targets of DS-1-47 promoting embryo implantation.MethodsSubcutaneous injection of indomethacin was used to establish the model of embryo implantation dysfunction.Animals were randomly divided into normal group(N)，model group(M)，and traditional Chinese medicine group(Z)；Using the technique of proteomics laser capture microdissection-double dimension electrophoresis-mass spectum(LCM-DE-MS) to analyze the protein molecules that were regulated by DS-1-47 in uterine tissue，and to screen the key molecules in promoting implantation，so as to further clarify the molecular mechanism and function targets of the drug.ResultsTotally there were 11 proteins expression was regulated obviously，including 8 proteins which were up-regulated in M group but down-regulated in Z group and were identified as hemopexin，kallikrein-1，serine protease inhibitor A3K，α-1-antitrypsin1-3，haptoglobin，elongation factor-1-Δ，membrane associated protein A5，serum amyloid P-component；3 proteins which were down-regulated in M group but up-regulated in the Z group and were identified as liver acid esterase，serine protease inhibitor，and apolipoprotein A-Ⅰ.ConclusionHemopexin，haptoglobin，serine protease inhibitor，apolipoprotein A-Ⅰ，kallikrein-1，elongation factor-1-Δ，and membrane associated protein A5 may be important targets for DS-1-47 to promote implantation.

DS-1-47；implantation；proteomics；laser capture microdissection-double dimension electrophoresis-mass spectum(LCM-DE-MS)

2017-03-01)