Survivin和MMP—11在宫颈鳞癌中的表达及其相关性研究

王连云　　张普　　陈文兵　　熊文栋　　淮丽　　耿筱虹

[摘要] 目的 通過检测生存素（Survivin）、基质金属蛋白酶-11（matrix metalloproteinases-11，MMP-11）在宫颈鳞癌组织中的表达，探讨两者与宫颈鳞癌的临床病理特征关系及两者的相关性。 方法 采用免疫组化方法检测68例宫颈鳞癌组、27例宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）组和16例正常宫颈组中Survivin、MMP-11的表达情况，分析各组宫颈组织中Survivin及MMP-11的阳性表达与临床病理之间的关系。 结果 Survivin及MMP-11在宫颈鳞癌组中的阳性表达率（80.88%，69.12%）高于正常宫颈组（6.25%，6.25%）和CIN组（37.04%，40.74%），三组比较差异有统计学意义（P<0.01）。Survivin及MMP-11的阳性表达与宫颈鳞癌的临床分期、组织病理学分期及是否有淋巴结转移有关（P<0.05）。宫颈鳞癌组中Survivin与MMP-11的阳性表达呈正相关（r=0.609，P<0.05）。 结论 Survivin及MMP-11在宫颈鳞癌组织中呈高表达，两者阳性表达在宫颈鳞癌的发生、发展过程中起重要作用；联合检测Survivin及MMP-11的表达可能对早期诊断宫颈鳞癌及对改善宫颈鳞癌的预后起到重要作用。

[关键词] 宫颈癌；宫颈上皮内瘤变；生存素；基质金属蛋白酶-11

[中图分类号] R737.33 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2017）27-0026-04

Expression of Survivin and MMP-11 in cervical squamous cell carcinoma and correlation study

WANG Lianyun1 ZHANG Pu2 CHEN Wenbing1 XIONG Wendong1 HUAI Li1 GENG Xiaohong1

1.Department of Gynecology and Obstetrics，the Second Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University，Wenzhou 325027，China；2.Department of Pathology，the Second Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University，Wenzhou 325027，China

[Abstract] Objective To investigate the expression of Survivin and matrix metalloproteinase-11（MMP-11） in the tissues of cervical squamous cell carcinoma， to explore the relationship between the two and the clinicopathological features of cervical squamous cell carcinoma and the correlation between them. Methods The expression of Survivin and MMP-11 in 68 cases of cervical squamous cell carcinoma group， 27 cases of cervical intraepithelial neoplasia（CIN） group and 16 cases of normal cervical group were detected by immunohistochemistry. The relationship between the positive expression of Survivin and MMP-11 in cervical tissues and clinicopathological features was analyzed in each groups. Results The positive expression rate of Survivin and MMP-11 in cervical squamous cell carcinoma group（80.88%，69.12%）was higher than that in normal cervical group（6.25%，6.25%）and CIN group（37.04%，40.74%）. The differences were statistically significant among the three groups（P<0.01）. The positive expression of Survivin and MMP-11 was related to the clinical staging， histopathological staging and lymph node metastasis of cervical squamous cell carcinoma（P<0.05）. There was a positive correlation between the expression of Survivin and MMP-11 in cervical squamous cell carcinoma group（r=0.609， P<0.05）. Conclusion Survivin and MMP-11 are highly expressed in cervical squamous cell carcinoma， and the positive expression of both plays an important role in the development and progression of cervical squamous cell carcinoma. The combined detection of Survivin and MMP-11 expression may play an important role in the early diagnosis of cervical squamous cell carcinoma and the prognosis of cervical squamous cell carcinoma.endprint

[Key words] Cervical cancer；Cervical intraepithelial neoplasia（CIN）；Survivin；Matrix metalloproteinase-11（MMP-11）

宫颈癌是世界上女性恶性肿瘤中发病率第二位的肿瘤，发病人数日益增加，且发病年龄呈年轻化趋势。在我国，宫颈癌的发病通常在35岁以后，高峰年龄在45～50岁之间；每年大约有6万左右的新发病例，且發病率和死亡率仍在不断上升，已严重威胁到女性的健康和生命[1-3]。宫颈癌中75%～80%为宫颈鳞状细胞癌。宫颈癌的发生、发展是细胞增殖相关基因、凋亡相关基因以及转移相关基因等多基因作用及表达的结果，而转移则是导致恶性肿瘤难以治疗的重要原因之一，其发生是多阶段的。本研究通过免疫组织化学方法检测Survivin及MMP-11在宫颈鳞癌组织、宫颈上皮内瘤变组织和正常宫颈组织中的表达，探讨Survivin及MMP-11与宫颈鳞癌发生、发展的关系及临床意义，并探讨两者之间的关系，以期为宫颈鳞癌发病机制的研究及寻求新的治疗宫颈鳞癌靶点提供理论依据。现报道如下。

1资料与方法

1.1 一般资料

选取我院2014年1月～2016年10月存档的石蜡包埋宫颈鳞癌组织68例为研究对象，设为宫颈鳞癌组，并选择同期在门诊行宫颈活检或LEEP刀诊断为CIN的患者27例（其中CIN Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各9例）为CIN组及住院患者中因子宫肌瘤或子宫腺肌症等非宫颈疾病行全子宫切除术的正常宫颈组织16例为正常宫颈组；所有组织标本均经病理组织学确诊。患者年龄33～72岁，平均48岁。所有鳞癌患者术前均未行放、化疗等治疗。所有病理切片由两位经验丰富的病理科医师共同确认。

1.2 方法

全部标本使用10%甲醛固定，石蜡包埋，4 μm连续切片，行HE染色，采用免疫组织化学SP法检测所有标本，按免疫组化试剂盒说明进行操作（试剂盒为福建迈新生物开发有限公司产品）。试剂Survivin购自福建迈新生物开发有限公司；试剂MMP-11购自北京博奥森生物技术有限公司。

1.3 观察指标及判定标准

Survivin及MMP-11的阳性表达均以细胞浆为主，Survivin也可见于细胞核的表达，而MMP-11细胞核不表达。两者的表达结果均表现为黄色、棕黄色或棕褐色颗粒。判定标准：细胞核或细胞质内出现黄色颗粒视为阳性，随机观察5个高倍视野。①0分：阳性细胞数≤5%；②1分：阳性细胞数在6%～25%之间；③2分：阳性细胞数在26%～50%之间；④3分：阳性细胞数在51%～75%之间；⑤4分：阳性细胞数>75%。阳性强度：①1分：黄色；②2分：棕黄色；③3分：棕褐色。两项积分相乘，0分为阴性（-），1～4分为弱阳性（+）；5～8分为中等阳性（++）；9～12分为强阳性（+++）。

1.4统计学方法

运用SPSS 17.0统计学软件对所得数据进行处理，计量资料采用t检验；计数资料采用χ2 检验或Fisher精确概率法；Survivin和MMP-11两者之间相关性采用Spearman 等级相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Survivin及MMP-11在不同宫颈组织中的表达

本研究显示Survivin及MMP-11均在宫颈鳞癌组中的阳性表达率最高，在CIN组中次之，在正常宫颈组中表达率最低，三组比较差异均有统计学意义（P<0.01）。

2.2 Survivin及MMP-11在宫颈鳞癌组织中表达与临床病理特征的关系

Survivin的阳性表达与宫颈鳞癌患者的临床分期、组织病理学分级及是否有淋巴结转移有关，差异有统计学意义（P<0.05），而与年龄、是否有脉管浸润无相关性（P>0.05）。MMP-11的阳性表达仅与临床分期和是否有淋巴结转移有相关性（P<0.05），而与年龄、组织病理学分级及是否有脉管浸润无相关性（P>0.05）。

2.3 宫颈鳞癌组中Survivin和MMP-11表达的相关分析

分析Survivin和MMP-11在宫颈鳞癌组中阳性表达情况，发现宫颈癌组中Survivin及MMP-11阳性表达呈正相关（r=0.609，P<0.05）。

3 讨论

3.1 Survivin与宫颈鳞癌

Survivin是到目前为止发现的分子量最小但作用最强的凋亡抑制因子，其基因定位于人类17号染色体，其生物学功能主要表现为对细胞凋亡的抑制、参与细胞周期的调控及参与血管的生成等[4-7]，其与肿瘤的发生、发展、转移及预后有着密切的关系。在胚胎时期、胎儿发育过程中及在未分化的成熟组织中有表达，在正常成人组织及成人终末分化的成熟组织（除胸腺、生殖腺）中不表达或极低表达，而在多种肿瘤组织中有着较高表达[8-10]。本实验检测了Survivin蛋白在正常宫颈组织、CIN组织及宫颈鳞癌组织中的表达情况，结果发现，Survivin蛋白在正常宫颈表达极少，仅1例，且为弱阳性表达，而在CIN Ⅰ～Ⅲ级和宫颈鳞癌中的阳性表达逐渐增高，三者比较差异有统计学意义，与有些研究[11-13]结果一致。说明Survivin在正常宫颈演变至CIN，以及最终发展为宫颈癌的过程中，表现出一种渐进的表达过程，可能与Survivin在宫颈鳞癌发生、发展过程中抑制肿瘤细胞凋亡作用减弱导致肿瘤细胞的失控性生长有关，表明Survivin对宫颈鳞癌的发生、发展有着重要作用。同时本研究结果还显示，伴随着宫颈鳞癌临床分期的进展、肿瘤细胞恶性程度的升高及肿瘤转移的发生，Survivin的表达率及阳性程度亦明显增高，该结果与丁玉梅等[14]的研究结果相似。说明Survivin的阳性表达与宫颈鳞癌的发生、发展及转移有着密切的关系，其高表达预示着宫颈鳞癌恶性程度的升高及转移的发生，使肿瘤的预后更加不良。上述结果表明Survivin有可能成为协助宫颈鳞癌早期诊断及判断患者预后的一项重要指标，检测Survivin的表达可帮助临床早期诊断宫颈鳞癌，从而改善患者的预后。endprint

3.2 MMP-11与宫颈鳞癌

基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMP）是一类锌离子依赖的参与细胞外基质降解的内切酶家族，其包含多个成员，有着不同的结构和功能[15]。MMP-11 是由Basset P等[16]于1999年首先发现，由于其和先前发现的基质分解素有着相似的结构，被命名为基质分解素-3。目前的研究表明，MMP-11表达的上调与胃癌、乳腺癌、喉癌等多种恶性肿瘤的发生、发展、转移有着密切的关系[17-19]。本研究通过检测MMP-11在正常宫颈组织、CIN组织及宫颈鳞癌组织中的表达，发现随着宫颈病变的进展，MMP-11的表达明显上升，宫颈鳞癌组织中MMP-11阳性率（69.12%）显著高于CIN（40.74%）及正常子宫颈组织（6.25%），其差异有统计学意义（P<0.05），与李本英等[20]的研究结果一致，同时对MMP-11 的表达与宫颈鳞癌临床特征相关性的分析可以看出，MMP-11 的表达与临床分期及是否有淋巴结转移有相关性（P<0.05），而与患者年龄、组织病理学分级及是否有脉管浸润无关（P>0.05）。这表明MMP-11的高表达与宫颈鳞癌的发生、发展及转移有一定的相关性，其可能促进了宫颈鳞癌的进展及转移，因此检测MMP-11为判断肿瘤的恶性程度、预测子宫颈癌的分期或转移提供了参考依据。

3.3 Survivin和MMP-11表达的相关性

本研究结果还显示了Survivin和MMP-11在宫颈鳞癌组织中的表达呈正相关（P<0.05），提示Survivin和MMP-11两者在引起宫颈鳞癌细胞的恶性增殖的同时抑制了肿瘤细胞的凋亡，二者对宫颈鳞癌细胞恶性增殖及抑制其凋亡方面有协同作用，因此联合检测Survivin和MMP-11的表达，对早期发现、早期处理宫颈鳞癌，改善宫颈鳞癌的预后有着重要的意义。

综上所述，Survivin和MMP-11在正常宫颈、CIN及宫颈鳞癌组织中的表达逐渐升高，两者可能参与了宫颈鳞癌的发生、发展及转移。二者的过度表达与宫颈鳞癌的恶性程度及浸润程度密切相关，可作为早期诊断宫颈鳞癌的标记物，对早期诊断及改善宫颈鳞癌的预后有着积极的意义。

[参考文献]

[1] Zaman MS，Chauhan N，Yallapu MM，et al. Curcumin Nanoformulation for Cervical Cancer Treatment[J]. Sci Rep，2016，6：20051.

[2] Du PL，Wu KS，Fang JY，et al.Cervical Cancer mortality trends in China，1991-2013，and predictions for the future[J].Asian Pac J Cancer Prev，2015，16（15）：6391-6396.

[3] 王春桃，刘洋，梁戈玉.宫颈癌发病行为危险因素研究进展[J].肿瘤基础与临床，2016，29（1）：90-92，封3.

[4] Siripong P，Hahnvajanawong C，Yahuafai J，et al. Induction of apoptosis by rhinacanthone isolated from rhinacanthus nasutus roots in human cervical carcinoma cells[J].Bio Pharm Bull，2009，32（7）：1251.

[5] 顾桂芳，张美云，庄迅.宫颈癌组织中Survivin 基因表达的临床意义[J].南京医科大学学报，2008，28（2）：232-234.

[6] Shinjyo T，Kurosawa H，Miyagi J，et al. Ras-mediated up-regulation of Survivin expression in cytokine-dependent murine pro-B lymphocytic cell[J].Tohoku Journal of Experimental Medicine，2008，216（1）：25.

[7] De Sanjose S，Quint WG，Alemany L，et a1.Human papillomavirus genotype attribution in invasive cervical cancer：A retrospective cross-seetional worldwide study[J].Lancet Oneol，2010，11（11）：1048-1056.

[8] 潘广晔，张作峰，王刚平.HIF-1α和Survivin 在乳腺癌中的表达及意义[J].中国临床实用医学，2016，7（1）：20-23.

[9] 杨庆林，郭晓东，张睿，等.胃癌组织中HER-2和Survivin蛋白的表达及临床意义[J].中国医科大学学报，2016，45（7）：616-619.

[10] 王建秋，杨蓓蓓，徐珏，等.Bmi-1、Bax和Survivin在喉鳞癌中的表达及意义[J].中国老年学杂志，2016，36（6）：1376-1378.

[11] 杨致飞.Survivin在宫颈癌和癌前病变中表达的临床意义[J].现代诊断与治疗，2014，25（10）：2305-2306.

[12] 王春燕.Survivin在宫颈癌组织中表达规律及临床意义[J].医学信息，2014，（11）：215-216.

[13] Kim Hs，Shiraki K，Rark SH，et a1.Expression of survivin in CIN and invasive squamous cell carcinoma of uterine cervix[J].Anticancer Res，2002，22（2A）：805-808.

[14] 丁玉梅，马丽丽，窦洪涛，等.人宫颈癌组织中survivin的表达与临床分析[J].中国医学创新，2014，（6）：36-39.

[15] Fernández-Guinea O，Alvarez-Cofi？觡o A，Eiró N，et al. Low microvascular density at the tumor center is related to the expression of metalloproteases and their inhibitors and with the occurrence of distant metastasis in breast carcinomas[J]. Int J Clin Oncol，2013，18（4）：629-640.

[16] Basset P，Bellocq JP，Wolf C，et al. A novel metalloproteinase gene specifically expressed in stromal cells of breast carcinomas[J]. Nature，1990，348（6303）：699-704.

[17] 徐进，王斌，陈琚，等.基质金属蛋白酶-11在胃癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系[J].胃肠病学和肝病学杂志，2016，25（6）：630-632.

[18] 王陽，王昕，王文彦，等.MMP-11在乳腺浸润性导管癌细胞中的表达及预后的相关性研究[J].癌症进展，2015，（4）：429-434..

[19] 陈平，钟琦，李祖飞，等.喉鳞状细胞癌组织中MMP-11、COL11A1 mRNA的表达变化及其意义[J].山东医药，2016，56（31）：72-74.

[20] 李本英，夏海，邵素芳. 基质金属蛋白酶11和12在子宫颈癌中的表达及相关性研究[J].中国医师杂志，2012， 14（5）：622-625.

（收稿日期：2017-07-16）endprint