高效液相色谱法测定玄参百贝散中哈巴俄苷含量

封海霞

（重庆市食品药品检验检测研究院，重庆 401121）

高效液相色谱法测定玄参百贝散中哈巴俄苷含量

封海霞

（重庆市食品药品检验检测研究院，重庆 401121）

目的建立测定玄参百贝散中哈巴俄苷含量的高效液相色谱法。方法采用伊利特Hypersil ODS2－C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 m），流动相为乙腈（A）－0.05%磷酸水溶液（B），梯度洗脱，流速为1 mL／min，检测波长为280 nm，柱温为30℃，理论板数按哈巴俄苷峰计算应不低于5 000。结果哈巴俄苷质量浓度在 23.14～138.80 g／mL范围内与峰面积线性关系良好，回归方程为 Y＝32 470 X ＋120 163，r＝0.999 2(n＝5)，平均回收率为 97.92% ，RSD ＝2.01% （n＝6）。结论该方法简便、快速、重复性好、专属性强，可为制订玄参百贝散质量标准和有效控制其内在质量提供技术参考。

玄参百贝散；哈巴俄苷；高效液相色谱法；含量测定

玄参百贝散是在编辑《长江三峡天然药用植物志》时收集民间名医处方过程中获得的药方[1]，为下川东地区名老中医治疗慢性喉痹的经验方。中医学认为，慢性喉痹多因外邪侵犯，邪久滞不去，脏腑亏损，耗伤阴液，虚火上炎于咽喉所致，病因病机主要为阴虚，以致津液不能上布咽喉，咽喉失于濡养。该散剂由玄参、麦冬、百合、桔梗、浙贝母、甘草等10味中药组方，民间将这些中药制成散剂治疗慢性喉痹，疗效良好。为有效控制其内在质量，确保临床疗效稳定可靠，笔者采用高效液相色谱法对其中滋阴降火的成分玄参所含哈巴俄苷的含量进行了测定[2－6]，为进一步制成医院制剂提供依据。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC－20A型高效液相色谱仪（日本岛津公司）；CP224S型分析天平（Sartorius公司）、SD3200型超声波清洗器、CS203B型电热干燥箱（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药

哈巴俄苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号为 111730－200605）； 样 品 （ 批 号 为 20170610，20170612，20170614，自制）；乙腈为色谱纯；水为超纯水；磷酸、甲醇及其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Hypersil ODS2－C18柱（伊利特公司，250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相 A 为乙腈，流动相 B为 0.05%磷酸水溶液，按表 1进行梯度洗脱；流速：1 mL／min；检测波长：280 nm。在此条件下，理论板数按哈巴俄苷计算均应不低于5 000。色谱图见图1。

表1 流动相梯度洗脱表

2.2 溶液制备

对照品溶液：称取经五氧化二磷容器中干燥（室温放置24 h）至恒重的哈巴俄苷10.8 mg，精密称定，加入30%甲醇定容至 100 mL，制成每 1 mL含 0.108 mg的溶液，即得。

供试品溶液：将供试品研磨成粉末（过3号筛），称取7 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25 mL，密塞，称定质量，浸泡1h，超声处理（功率为500 W，频率为40 kHz）50 min，放冷，再称定质量，用50%甲醇补足减失的质量，摇匀，过微孔滤膜，取续滤液，即得。

阴性对照品溶液：取不含玄参的阴性样品研磨成粉末（过3号筛），称取6 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25 mL，密塞，称定质量，浸泡1 h，超声处理（功率为 500 W，频率为 40 kHz）50 min，放冷，再称定质量，用50%甲醇补足减失的质量，摇匀，过微孔滤膜，取续滤液，即得。

图1 哈巴俄苷含量测定高效液相色谱图

2.3 方法学考察

线性关系考察：取经五氧化二磷容器中干燥（室温放置 24 h）至恒重的对照品哈巴俄苷 2.7 mg，精密称定，用50%甲醇定容至25 mL容量瓶中，配成质量浓度为 138.80 μg／mL 的对照品贮备液，吸取该贮备液，用50% 甲 醇 稀 释 成 质 量 浓 度 为 69.40，46.27，27.76，23.14 μg／mL 的系列标准溶液，分别测定峰面积，以峰面积(Y)为纵坐标、对照品溶液的质量浓度（X，μg／mL）为横坐标进行线性回归，得回归方程 Y＝32 470 X＋120 163，r＝0.999 2(n＝5)。结果表明，哈巴俄苷质量浓度在 23.14 ～138.80 μg／mL 范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密量取哈巴俄苷对照品溶液（每1 mL含哈巴俄苷 138.8 μg），按 2.1 项下色谱条件，分次进样20 μL，共5次，记录峰面积值。结果峰面积平均值为1 681 348，RSD ＝2.67%(n＝5)，表明仪器精密度良好。

重复性试验：精密称取本品（批号为 20170610）5份，每份1 g，依法制备供试品溶液，按色谱条件进样，依法测定哈巴俄苷的含量。结果的 RSD＝0.12%(n＝5)，表明方法重复性良好。

加样回收试验：分别精密称取已知含量的样品0.5 g，置锥形瓶中，各精密加入哈巴俄苷对照品0.15 mg，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样，计算回收率。结果见表2。

表2 加样回收试验结果(n＝6)

稳定性试验：精密称取同一批（批号为20170610）供试品，共6份，每份1 g，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件，每隔2 h进样20 μL，测定哈巴俄苷含量。结果的RSD为0.29%(n＝6)，表明供试品溶液在8 h内稳定。

2.4 样品含量测定

精密称取不同批次的样品1.0 g，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样，测定哈巴俄苷含量。结果见表 3。制剂中哈巴俄苷平均含量为 0.366 4 mg／g，根据通用含量限度确定方法（±15%），确定本品的含量限度不得低于 0.311 4 mg ／g。

表3 样品含量测定结果（mg／g）

3 讨论

根据处方所含成分的特性和成分之间的相互影响，选择处方中滋阴降火的君药玄参中的有效成分哈巴俄苷作为控制产品质量的指标。方法学考察结果表明，阴性对照无干扰，目标色谱峰与相邻峰达到基线分离。通过试验确定了线性回归方程，考察了精密度、稳定性、重复性、加样回收率等，结果表明，所建立的含量测定方法符合定量分析的要求。

本研究中对处方中作为臣药、佐药和使药的麦冬[7]、百合[8－9]、桔梗[10－11]、何首乌[12－13]、浙贝母[14－15]、甘草[16－17]等所含的主要化学成分亦进行了初步的含量测定研究，但重复性欠佳。应进一步对处方中非君药所含成分进行分析，为制订玄参百贝散质量标准，更好地控制产品质量，开发为具有重庆地方特色的医院自制制剂提供技术支撑。

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Content Determination of Harpagoside in Xuanshen Baibei Powder by HPLC

Feng Haixia
（ Chongqing Institute of Food and Drug Control， Chongqing， China 401121）

Objective To establish an HPLC method for content determination of habazoside in Xuanshen Baibei Powder.Methods Hypersil ODS2－ C18column （250 mm× 4.6 mm，5 μm），the flow phase was acetonitrile （A） － 0.05% phosphate （B） for the flow phase gradient elution，the flow rate was 1 mL／min，the detection wavelength was 280 nm，the column temperature was 30 ℃.The number of theoretical plates should be no less than 5 000 according to the calculation of habbucoside.Results The quality concentration of habbucoside was good in the linear range of 23.14 －138.80 μg／mL，the regression equation wasY＝32 470 X＋ 120 163， r＝ 0.999 2（n ＝5），the average recovery rate was 97.92% ，RSD＝2.01% （n ＝6）.Conclusion The method is simple，rapid，reproducible and specific，which can provide technical reference for formulating the quality standard and effective quality control of Xuanshen Baibei Powder.

Xuanshen Baibei Powder；habazoside；HPLC；content determination

R284.2；R289.5

A

1006－4931(2017)20－0041－03

10.3969 ／j.issn.1006 － 4931.2017.20.011

封海霞(1978－)，女，大学本科，主管中药师，研究方向为中药质量标准，(电子信箱)searayf＠163.com。

2017－07－16)