益阳地区结核分枝杆菌耐药状况分析

李瑜++曾威　徐群芳　阳泽华　王进++周琳+李默思+曾凡胜

[摘要] 目的 了解益阳地區结核分枝杆菌耐药状况，为该地区结核患者采取有效的防控措施提供参考。 方法 收集2013年6月～2016年12月益阳市中心医院、益阳医专附属医院、益阳市第四人民医院等单位确诊的肺结核患者854例的痰培养标本，对结核分枝杆菌进行分离培养和初步鉴定，分析感染菌株的总体耐药情况，分离菌株对不同抗结核药的耐药情况，不同性别及年龄分离菌株的耐药情况。 结果 854例（1054株）结核病患者中，共分离耐药菌436株，总耐药率为41.4%，其中初治患者106例（120株，占30.0%），复治患者297例（316株，占70.0%），两种类型患者耐药率比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。10种抗结核药的药敏谱中，异烟肼（INH）的耐药率最高（54.63%）；其次为利福平（RFP），占44.09%；第三位是利福喷丁（RFT），为42.86%；对氨基水杨酸（PAS）的最低，为23.94%。女性结核病患者耐药率较男性高，差异有统计学意义（P < 0.05）。在全耐药的年龄构成比中，66～86岁年龄段为主，16～35岁以下的比例较少（P < 0.05）。 结论 益阳地区结核分枝杆菌的耐药情况较为严重。该地区结核患者耐药率受患者年龄、性别等影响，对此临床及有关部门应加强对耐药杆菌的检测。

[关键词] 结核分枝杆菌；耐药状况；耐药谱；益阳地区

[中图分类号] R52 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）09（b）-0173-04

Drug resistance analysis of mycobacterium tuberculosis in Yiyang region

LI Yu1 ZENG Wei2 XU Qunfang1 YANG Zehua1 WANG Jin1 ZHOU Lin1 LI Mosi1 ZENG Fansheng1

1.Pathogen Biology and Immunology Teaching and Research Section， Yiyang Medical College， Hu′nan Province， Yiyang 413000， China； 2.Department of General Surgery， Yiyang Central Hospital， Hu′nan Province， Yiyang 413000， China

[Abstract] Objective To understand the drug resistance and drug resistance spectrum of mycobacterium tuberculosis in Yiyang region， to provide the reference for the region of tuberculosis patients to take effective prevention and control measures. Methods 854 cases of pulmonary tuberculosis patients with sputum culture specimens， and cultivation of mycobacterium tuberculosis in preliminary appraisal were collected in June 2013 to December 2016 in Yiyang Central Hospital， Affiliated Hospital of Yiyang Medical College， Yiyang Fourth People′s Hospital. Overall resistance of infected strains， resistance situation of isolated strains between different anti-tb drug， resistance situation of isolates isolated strains between different gender and age were analyzed. Results 1054 cases of tuberculosis patients， 436 cases were isolated drug-resistant bacteria， total resistance was 41.4%， including untreated patients of 106 cases （120， 30.0%）， recurrent patients of 297 cases （316， 70.0%）， the difference of resistance rate in patients with two types was statistically significant （P < 0.05）. 10 kinds of anti-tb drug susceptibility spectrum， among them INH resistance was the highest （54.63%）， RFP was second of 44.09%， the third was RFT （42.86%）， PAS was lowest of 23.94%. The patients resistant rate in women was higher than that in men， the difference was statistically significant （P < 0.05）.In the whole age composition for all resistant，66-86 age group was priority to the other， 16 and 35 was less proportion （P < 0.05）. Conclusion The drug resistance situation of mycobacterium tuberculosis in Yiyang region is more serious. Percentages of tuberculosis of the region is affected by patient age， gender， etc， the clinical and relevant departments should strengthen the detection of drug-resistant bacteria.

[Key words] Mycobacterium tuberculosis； Drug resistance； Drug-resistant spectrum； Yiyang region

结核分枝杆菌是引起结核病的病原菌，与艾滋病、疟疾并称为世界三大传染病[1-3]，是目前单一感染因素导致死亡率最多的疾病之一，也是制约经济和社会发展的重大疾病之一，患者往往因病致贫，因病返贫，其严重危害着人类健康和社会发展[4-5]。利福平（RFP）和异烟肼（INH）等作为抗结核治疗的一线药物，在临床上应用已达50余年，其耐药率正逐年增多，已成为临床上不容忽视的重要问题[6-7]。近年来，由于耐药结核分枝杆菌，尤其是耐多药（MDR）结核分枝杆菌和广泛耐药（XDR）结核分枝杆菌的出现更是给结核病控制带来了严峻的挑战，已成为结核病预防和控制方面亟待解决的重要问题。本研究为了获得益阳地区结核菌的耐药情况，收集益阳市中心医院、益阳医专附属医院、益阳市第四人民医院等单位肺结核患者痰培养阳性菌株，进行结核分枝杆菌单药菌株的分离培养鉴定及抗结核药物的药物敏感性检测，以更好地了解益阳市结核分枝杆菌的耐药现状及耐药特征，从而为本地区结核病（尤其是耐药结核病）的防控提供依据。现将内容报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2013年6月～2016年12月益阳市中心医院、益阳医专附属医院、益阳市第四人民医院等单位参与结核菌分离培养及药敏试验的肺结核患者854例病例痰培养标本（854份痰培养标本）对其进行回顾性分析。其中男553例，女301例，年龄为16～86岁。本研究经患者知情同意并签署知情同意书，获三院医学伦理委员会的通过批准。

1.2 實验材料

主要仪器和试剂：①生物安全柜（Baker公司）；②细菌培养箱（上海圣科仪器设备有限公司）；③改良L-J培养基（罗氏）；④药物敏感性试验培养基（自制）。

1.3 方法

标本的采集：研究对象的标本均由临床科室负责采集和送检。采用WHO推荐的国际通用螺旋盖痰瓶，收集患者24 h痰或气管镜灌洗液标本。标本统一送相应医院检验科，采用罗氏培养系统，按《我国结核病细菌学操作规程》的规范方法进行结核分枝杆菌分离培养和鉴定，确定诊断。所有检测和药敏试验均在负压试验室完成。

菌种的分离：用吸管吸取4%氢氧化钠消化液于痰瓶中，拧紧螺旋盖，旋涡振荡器上震荡1 min，使痰液充分匀化，室温放置。

菌种的培养：取上述处理后的标本0.1 mL，均匀接种在整个培养基斜面，接种后斜面向上在37℃环境中进行培养，定期给予观察，一经发现菌落生长，以抗酸染色进行确定，其中每份标本接种2个酸性罗氏培养基。

菌种的鉴定：用接种环挑取培养获得的菜花样菌落分别接种于空白改良L-J培养基、PNB改良罗氏培养基（500 μg /mL）和TCH培养基（5 μg/mL）进行牛型结核分枝杆菌、人型结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的菌种鉴定。

药敏试验方法：采用WHO推荐的改良L-J培养基，以绝对浓度法对一线抗结核药异烟肼（0.2 μg/mL）利福平（40 μg/mL）、链霉素（SM，4 μg/mL）、乙胺丁醇（EMB，2 μg/mL）、卷曲霉素（CPM，40 μg/mL）、左氧氟沙星（OF，2 μg/mL）、丙硫异烟胺（PTM，2 μg/mL）、对氨基水杨酸（PAS，1 μg/mL）、卡那霉素（KM，30 μg/mL）、利福喷丁（RFT，30 μg/mL）10种一线抗结核药进行药物敏感性测定，并与对照培养基比较，含药培养基上无菌落生长为敏感菌落数>20个为耐药。统计所有结核病患者分离耐药菌的总体耐药情况、不同抗结核药的耐药情况、不同性别和年龄间分离耐药菌株的分布情况。

1.4 统计学方法

采用SPSS 16.0统计学软件进行数据分析，计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 结核病患者耐药菌株的总体分布情况

854例结核病患者送检痰培养标本854份，其中阳性标本403份（标本阳性率为47.2%）。共分离得到菌株1054株，其中，耐药菌436株，耐药率为41.4%，其中初治患者106例（120株，占30.0%），复治患者297例（316株，占70.0%），两种类型患者菌株耐药率比较，差异有统计学意义（χ2=9.051，P < 0.05）。初治患者在16～35岁、36～65岁、66～86岁三个年龄段的菌株分布株数分别为18株（15.0%）、34株（28.3%）、68株（56.7%）；复治患者为44株（13.9%）、114株（36.1%）、158株（50.0%），初治、复治患者菌株在三组不同年龄段中的分布差异无统计学意义（χ2=0.645，P > 0.05）。

2.2 耐药菌株对不同抗结核药耐药情况的统计

10种抗结核药的药敏谱中，INH的耐药率最高（54.63%），RFP的其次，为44.09%，第三位是RFT（42.86%），PAS最低，为23.94%（表1）。

2.3 不同性别对10种抗结核药物耐药的菌株分布

结果显示，女性结核病患者耐药率较男性高，差异有统计学意义（χ2=8.021，P < 0.05）。见表2。

2.4 不同年龄段对10种抗结核药物耐药的菌株分布

从年龄构成比中，66～86岁年龄段为主，16～35岁以下的比例较少 （χ2=8.005，P < 0.05）。见表3。

3 讨论

WTO最新统计数据显示，全球大约有结核病患者20亿，每年新增结核病患者可达800～1000万，每年有200～300万人因患有结核病而死亡[8-9]。近年来，耐药结核分枝杆菌在全世界各地逐步增多[10-11]。结核病是许多地方因病致贫，因病返贫的重要原因，是制约经济和社会发展的重大疾病之一[12-13]。了解益阳地区结核病临床分离株的耐药状况，可充分认识益阳市耐药结核病的流行发展趋势，为结核病的有效防治提供科学依据。由于耐药菌株在不同地区传播其耐药特征可能存在地理差异。因此对不同地区的耐药菌株开展耐药状况的检测及其相关耐药特征的研究可为当地耐药结核病的流行病学调查提供科学依据，同时也可指导当地结核病的早期诊断、治疗方案的制订及防控。

结核分枝杆菌是引发结核病的病原菌，属于分枝杆菌属，结核分枝杆菌能够侵犯机体多个器官诱发结核病[13-17]。我国结核病耐药率、耐多药率以及广泛耐药率均高，不规范甚至缺乏督导的抗结核治疗、患者抗结核治疗史尤其是多次治疗史以及治疗依从性差是耐药产生的主要危险因素[18-19]。

结核杆菌的耐药情况是反映该地区结核病控制水平的重要指标，益阳位于长江中下游平原的洞庭湖南岸，地处湖南省北部，对本地区的耐药菌株开展耐药状况的检测及其耐药特征的研究，了解益阳市结核病的流行发展趋势，就诊结核病患者的耐药情况可以从一个侧面反映益阳地区肺结核的总体耐药情况，可为耐药结核病的早期诊断、预防干预措施制定提供科学依据，从而更有效地控制耐药结核病的传播和流行。

随着耐药菌株的传播，原发性耐药会逐渐增加。本研究通过对益阳地区结核分枝杆菌耐药情况的分析发现，1054例结核病患者中，共分离耐药菌436株，总耐药率为41.4%，本研究结果中的耐药比率要高于汕头[20]等地的耐药率，提示当前益阳地区结核病患者耐药情况严重。其中初治患者120株（27.5%），复治患者316株（72.5%），两种类型患者耐药率差异显著。女性结核病患者耐药率较男性高。在全耐药的年龄构成比中，66～86岁年龄段为主，16～35岁以下的比例较少。这可能与中老年患者的机体抵抗力较差有关，若感染后不能持续规范地接受治疗，则可能会进一步导致传染的不断扩散。10种抗结核药的药敏谱中，INH的耐药率最高（54.63%），RFP的其次，为44.09%，第三位是RFT（42.86%），PAS最低，为23.94%。通过分离并对单药耐菌情况的分析，能更好地了解分枝杆菌菌株的耐药谱情况，结合本地区实际情况，在对高龄复治结核的男性患者治疗中应积极作好耐药性检测，以便有针对性地采取有效的治疗措施。

综上所述，益阳地区结核分枝杆菌的耐药情况较为严重。该地区结核患者耐药率受患者年龄、性别等的影响，对此临床及有关部门应加强对耐药结核分枝杆菌的检测，继续深入研究结核分枝杆菌耐药机制，为政府制订切实有效的结核病防治措施提供依据，具体针对性的对策是笔者接下来要研究的重点。

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（收稿日期：2017-05-25 本文编辑：李岳泽）