小剂量辛伐他汀对心肾综合征患者补体水平及补体受体表达的影响

王治++黄进　李益民++严雪娇

[摘要] 目的 观察心肾综合征（CRS）患者服用小剂量辛伐他汀后血清补体C3、C4水平及外周血单核细胞Ⅰ型（CR1）、Ⅱ型（CR2）补体受体mRNA表达的变化。 方法 随机入选2012年1～12月在南京市胸科医院门诊和病房住院的CRS患者56例，根据NYHA心功能分级进行心功能分级，根据简化的MDRD公式计算估计的肾小球滤过率。入选对象每晚睡前服用辛伐他汀10 mg，连续服用8周。入选后次日清晨及治疗第8周清晨抽取空腹静脉血，全自动生化分析仪测定血清C3、C4水平；采集外周静脉血提取外周血单个核细胞，提取总RNA并行RT-PCR检测CR1及CR2 mRNA的表达。 结果 CRS患者血清C3水平治疗后较治疗前降低[（1.14±0.35）和（1.22±0.31）g/L，P < 0.05]，外周血單核细胞CR1 mRNA治疗后较治疗前表达增强（0.76±0.10和0.70±0.11，P < 0.05）。 结论 CRS患者服用小剂量辛伐他汀后，血清C3水平降低及外周血单核细胞CR1核酸表达上调可能共同参与患者心肾功能的改善。

[关键词] 辛伐他汀；心肾综合征；心功能；肾功能；C3；Ⅰ型补体受体

[中图分类号] R541 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）09（b）-0094-04

Department of Cardiology， Nanjing Chest Hospital， Jiangsu Province， Nanjing 210029， China

[Abstract] Objective To investigate the effects of low-dose Simvastatin on serum levels of C3， C4 and mRNA levels of type Ⅰ （CR1） and Ⅱ （CR2） complement receptor in patients with cardiorenal syndrome （CRS）. Methods Totally 56 patients with CRS were enrolled from January to December in 2012 and treated with Simvastatin （10 mg once per night） for 8 weeks. The serum levels of C3 and C4 were measured. Peripheral blood mononuclear cells were extracted from patients before and after treatment with Simvastatin. RT-PCR was performed to detect the mRNA expression of CR1 and CR2. The left ventricular ejection fraction was determined by Doppler spectrum analysis. Results After therapy， the mean levels of serum C3 was significantly decreased in patients with CRS [（1.14±0.35） vs （1.22±0.31） g/L， P < 0.05]. Contrarily， the mean mRNA level of CR1 increased after therapy （0.76±0.10 vs 0.70±0.11， P < 0.05）. Conclusion The down-regulation of serum level of C3 as well as up-regulation of CR1 after treatment with low-dose Simvastatin is probably associated with improvement of heart and renal function in patients with CRS.

[Key words] Simvastatin； Cardiorenal syndrome； Heart function； Renal function； Complement 3； Type Ⅰ complement receptor

心力衰竭是各种致病因素作用于心脏严重影响心脏功能的结果，是各种器质性心脏病的终末阶段。随着社会老年化，部分心力衰竭患者中出现肾功能不全的现象引起研究人员的注意，2004年美国国家心肺和血液研究所将之称为心肾综合征（CRS），临床分为五型。Ⅰ型，急性CRS，指由于心功能急剧恶化导致的急性肾损伤；Ⅱ型，慢性CRS，指由于慢性心力衰竭而导致的进行性和/或持久性肾功能不全，通常认为是心力衰竭发展到终末期的一种表现，也称为狭义的CRS；Ⅲ型，急性肾心综合征，指肾功能急剧恶化导致急性心脏功能失调；Ⅳ型，慢性肾心综合征，指慢性肾脏疾病导致的心功能降低，心室肥大；Ⅴ型，继发性CRS，指由系统性疾病（系统性红斑狼疮、淀粉样变性等疾病）导致的心肾功能异常。其中Ⅱ型CRS临床多见，也称为狭义CRS[1-2]。一旦合并心肾功能不全，患者的病死、病残率增加[3-4]。探讨CRS发生机制及防治措施是研究的热点和难点。近来有研究显示，他汀能够减轻慢性心力衰竭患者左室重构、改善心脏收缩功能。笔者前期研究发现小剂量辛伐他汀能够改善狭义CRS患者的心、肾功能[5-8]。本研究进一步探讨小剂量辛伐他汀对CRS患者补体C3、C4水平及Ⅰ型（CR1）、Ⅱ型（CR2）补体受体的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料endprint

随机入选2012年1～12月在南京市胸科医院（以下简称“我院”）门诊和病房住院的心力衰竭合并肾功能不全患者56例，男35例，女21例，平均年龄（68±11）岁，均符合狭义CRS诊断标准[9]。根据纽约心功能分级（NYHA）标准进行心功能分级[10]。根据慢性肾脏病临床实践指南[11]及eGFR公式，eGFR=175×[肌酐（mg/dL）]-1.234×[年龄（岁）]-0.179×性别（男性=1，女性=0.79），计算患者的eGFR[mL/（min·1.73m2）]。根据NYHA标准，其中Ⅱ级24例，Ⅲ级26例，Ⅳ级6例。根据eGFR测定值，其中合并轻度肾功能不全[60 mL/（min·1.73m2）

1.2 方法

1.2.1 所有患者入院后次日睡前开始服用辛伐他汀（杭州默沙东制药有限公司），10 mg/次，一次顿服，连续服用8周。入院时及随访期间记录患者一般临床资料。

1.2.2 生化检测：入院后次日及服用他汀第8周时清晨抽取空腹静脉血4 mL，离心后取血清应用OLMPUS全自动生化分析仪检测肝功能、肾功能及血脂水平。

1.2.3 血清补体C3、C4水平的测定：入院后次日及服用他汀第8周时清晨抽取空腹静脉血4 mL，采血前24 h禁高脂饮食及饮酒，禁食12 h以上；离心后取血清应用免疫散射比浊法测定。仪器为美国Beckman Coulter公司全自动特种蛋白分析仪，试剂、定标液均购自该公司。

1.2.4 人外周血单个核细胞（PBMC）的分离及RT-PCR检测：入院后次日及服用他汀第8周时清晨抽取外周空腹静脉血4 mL，采用密度梯度离心法提取PBMC。总RNA提取及反转录体系参照文献[12]。美国国立生物技术信息中心（NCBI）数据库检索人Ⅰ型补体受体（CR1）、Ⅱ型补体受体（CR2）及β-actin mRNA序列。应用Primer 5.1软件设计引物。各种引物序列、扩增产物长度及退火温度见表1。PCR反应体系、反应条件及各样品mRNA的相对表达量的测定参照文献[12]。

1.2.5 心脏彩超检查：所有患者在入选时及治疗8周后应用惠普5500型彩色多普勒超声进行检查。患者取左侧卧位，在左室长轴切面用M型取样，分别测量左室收缩末期内径、左室舒张末期内径，应用Teich法测定左心室射血分数（LVEF）。

1.3 统计学方法

采用SAS 6.12统计软件对数据进行分析和处理，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用配对t检验或秩和配对检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

辛伐他汀治疗前后患者血清C3、CR1 mRNA相对表达量比较，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。辛伐他汀治疗前后患者血清C4、CR2 mRNA相对表达量比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。见表2。

3 讨论

心血管疾病和肾脏疾病之间炎症标志物所发挥的重要作用引起国内外研究人员的广泛重视。慢性心力衰竭与机体免疫系统激活之间的相互联系和作用成为研究的热点[13-15]。众多研究显示，慢性心力衰竭患者中免疫系统的激活有多种炎症介质及其他成分的参与[16]。目前尚无指导CRS治疗的有效循证医学证据。近来，他汀类具有独立于调脂作用之外的潜在益处引起研究人员的关注。有研究提示，他汀类具有抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统、抑制肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）等炎症因子以及恢复心脏自主神经功能等作用，从而在慢性心力衰竭防治中发挥重要的作用[17]。笔者前期研究显示，慢性心力衰竭患者服用小剂量辛伐他汀8周后心、肾功能均得到改善，而患者血脂水平没有显著变化，提示他汀发挥了独立于调脂作用之外的效应[5]。

补体系统是免疫系统的重要组成部分，补体系统激活级联反应过程中产生的一系列补体活化成分具有细胞毒性、免疫调节、调理、清除免疫复合物、炎症介质等各种效应。既往研究表明，补体系统的激活参与动脉粥样硬化斑块的发生和发展，是伴随动脉硬化的慢性炎性反应的重要组成部分[18]。近来有临床研究显示，肾动脉粥样硬化是心力衰竭患者发生肾功能不全的一项独立危险因素[19]。

在补体各成分中，C3的血清含量最高，也是经典、替代途径激活的交汇点，是补体系统的核心。人类C3分子主要由肝细胞和巨噬细胞产生。经典途径及旁路途径共同形成C3转化酶。C3转化酶将C3裂解为活性片段C3b，从而与靶细胞相结合，进一步形成C5转化酶，并在其表面形成膜攻击复合体，引起靶细胞溶解[20]。國内外众多研究显示，C3、C4、C5b～9等各种补体成分与临床冠心病、收缩功能减退及临床预后相关[21-22]。动物研究显示，在缺血/再灌注损害模型中肾小管的损伤依赖于局部C3的合成，局部C3合成的缺乏能够减少缺血后急性肾功能衰竭的发生[23]。近来也有研究显示，C3介导糖尿病肾病的肾脏损伤[24]。

CR1广泛表达于中性粒细胞、单核细胞、B细胞、红细胞及肾小球足突细胞等细胞，CR1的配体主要为C3b/C4b，其主要功能主要为I因子的辅助因子之一，协同I因子裂解C3b和C4b，抑制C3转化酶与C5转化酶的活性并促进其降解；CR1还作为调理素受体，增强吞噬细胞对C3b/C4b包被颗粒及微生物的吞噬作用。CR2主要表达于人成熟B细胞、单核细胞、某些T细胞及滤泡树突状细胞上，可特异性结合C3d。CR2主要功能是对B细胞的分化、增殖、记忆和免疫球蛋白产生起重要的调节作用[21]。Java等[25]研究发现，上皮细胞CR1不仅参与内源性补体调控，还是一种免疫黏附受体，结果提示肾小球足突细胞CR1表达减少介导补体参与肾脏损害。本研究显示，CRS患者服用小剂量辛伐他汀后心、肾功能改善，推测可能与C3水平降低，改善左室收缩功能及肾小管损伤，从而延缓肾功能恶化。而外周血单核细胞CR1核酸表达较服用前有所上调，可能通过抑制并降解C3转化酶，从而减少免疫复合物的形成，减轻全身及肾脏局部免疫炎性反应，从而改善肾脏功能。

综上所述，CRS患者服用小剂量辛伐他汀后，血清C3水平降低及外周血单核细胞CR1核酸表达上调可能共同参与患者心肾功能的改善。

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（收稿日期：2017-05-16 本文編辑：李亚聪）endprint