全自动接种仪与手工接种在临床微生物检验中的应用效果对比分析

杜海平 温江区中医医院检验科 （四川 成都 611130）

论著

全自动接种仪与手工接种在临床微生物检验中的应用效果对比分析

杜海平 温江区中医医院检验科 （四川 成都 611130）

目的：对比分析全自动接种仪与手工接种在临床微生物检验中的应用效果。方法：采用DL96-Ⅱ鉴定系统对500份临床标本进行接种，同时采用传统手工接种法对同样的标本进行接种，培养24～48h后观察菌落的生长情况，对比分析两种接种方式的应用效果。结果：所有样本在经全自动接种仪分别接种培养24h和48h后，阳性率均高于传统手工接种阳性率，且总的阳性率高于传统手工接种（P＜0.05）。在所有标本中，有7例标本中存在交叉感染，交叉感染率为1.40%。在所有接种样本中，共有18份样本需要分纯处理，分纯率为3.60%。结论：全自动化微生物接种仪的使用可以有效避免人为因素的影响，提高接种的效率，降低漏诊率，实现分离接种的标准化，节省检验报告时间，同时非介入性操作的减少更保证了操作人员的健康安全。

全自动接种仪 手工接种 临床微生物检验 应用效果

Abstract:Objective: To compare and analyze the effect of automatic inoculation and manual inoculation in clinical microbiological trial. Method: 500 clinical specimens were inoculated with DL96-II identi fi cation system automatic inoculation instrument, at the same time, the same specimens were inoculated with the traditional manual inoculation, observed the growth of colony after culture of 24h-48h, to compared and analyzed the application effects of two inoculation methods.Result: All samples were taken by an automatic inoculation instrument with 24h and 48h respectively, the positive rate was higher than that of traditional manual inoculation, and the total positive rate was higher than that of traditional manual inoculation (P＜0.05). in all inoculated samples, cross infection was found in 7 specimens, and the rate of cross infection was 1.40%. In all inoculated samples, in all inoculated samples, 18 samples were puri fi ed, and the puri fi cation rate was 3.60%. conclusion: The use of full automatic microbial inoculation instrument can effectively avoid the in fl uence of human factors,improve the ef fi ciency of inoculation, lower the rate of missed diagnosis, standardize the separation of vaccinations, Save time for inspection report, and the decrease of non interventional operation ensures the health and safety of the operators.

Key words:automatic inoculation instrument, hand inoculation, clinical microbiology, application effect

随着现代医学技术水平的发展和进步，新的科技成果正不断地被迅速应用于医学科学研究和临床实践中。近年来，临床微生物检验技术得到了快速发展，达到既能准确的分离出病原菌，又能快速向临床报道结果是目前临床微生物检验技术的发展方向[1]。以往临床微生物检验均是依靠检验人员手工操作进行细菌接种，由于受多种人为因素的影响，使检验结果无法实现标准化，同时严重影响检验的效率和结果的准确性[2]。因此，为了实现分离接种的标准化，近年来出现了全自动微生物标本接种仪，使标本接种的速率加快，明显减少了系统误差和偶然误差，平板有效利用率高，分离的单个菌落多，减少了再次分纯，提高了检出率[3]。本次研究采用DL96-II鉴定系统对500份临床标本进行接种研究，旨在对比分析其与传统手工接种的应用效果，具体报告如下。

1. 材料与方法

1.1 研究材料

选取2015年1月～2017年3月本院住院和门诊送检的尿、痰、大便、无菌体液及拭子标本共500份，其中包括尿液110份，痰液110份，拭子（包括咽拭子、伤口分泌物、阴道分泌物、皮肤拭子等）75份，支气管吸出物100份，无菌体液55份，粪便50份。

表1. 不同样本两种接种方法阳性检出率的比较情况(n,%)

1.2 仪器与试剂

检测仪器为：上海科华齐效检验信息系统，DL-96细菌测定系统；鉴定过程采用美国Dade公司MicroSean W/A-96SI及BD公司Phoenix100全自动细菌鉴定药敏分析仪并结合传统手工方法。血琼脂平板、巧克力平板（含万古霉素）购自南京便诊生物科技有限公司，中国兰琼脂平板购自上海一基实业有限公司，伊红美兰琼脂干粉及增菌肉汤等培养基由本实验室自配。

1.3 质控菌株

质控菌株包括大肠埃希氏菌（ATCC25922）、金黄色葡萄球菌（ATCC29213），均来源于中国药品生物制品鉴定所。

1.4 方法

1.4.1 接种方法（1）粪便标本：将20μL粪便调入2.5mL VITEK盐溶液中乳化成悬浮液，让其沉淀3～5min后，再开始处理标本。如果粪便标本无法沉淀，那就不能在全自动微生物标本接种仪上处理，标本须进行传统手工接种处理；（2）痰液及支气管吸出物标本：标本应用消化液（如胰酶）消化（1:1），均匀摇晃后，将其静置30min后上机接种。对于含大量黏液的标本，首先加入生理盐水至仪器要求液量，搅拌混匀，然后将生理盐水吸去，加入等量的消化液（如pH值7.6 PBS新鲜配制的10g/L胰酶溶液），放置37˚C水浴，待标本充分液化后再行接种；（3）拭子标本：干燥拭子和浸于凝胶介质的拭子插入装有2mL VITEK盐溶液的VITEK 2管中，将标本进行旋转洗脱，最后将洗脱液上机接种。对于浸于液态介质的拭子直接在液体中旋转洗脱，移去拭子棒后直接上机。

1.4.2 细菌鉴定。所有标本培养后，如果可疑菌单个菌落较多且分辨率高，可直接上机鉴定；如果可疑单个菌落不易区分，可在分离纯化后采用传统手工方法结合VITEK 2-compact全自动微生物分析系统进行菌株鉴定。

1.4.3 交叉污染试验。分别将含有大量大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌的标本各1份，放置在样品架1号位置接种培养，其余9个位置均放置无菌盐水代替样品接种并培养，观察所有样品架有无交叉污染及携带污染。

1.5 统计学分析

计数资料采用率和构成比进行表示，组间对比采用χ2检验。以P＜0.05表示为有统计学意义。所有研究数据选用SPSS21.0软件进行统计学分析。

2. 结果

2.1 不同样本两种接种方法阳性检出率的比较情况

所有样本在经全自动接种仪分别接种培养24h和48h后，阳性率均高于传统手工接种阳性率，且总的阳性率高于传统手工接种（P＜0.05）；同种接种方法接种24h和48h后，阳性率对比无明显差异（P＞0.05），见表1。

2.2 交叉污染试验结果

经全自动微生物标本接种仪的接种结果发现，在所有标本中，有7例标本中存在交叉感染，交叉感染率为1.40%。

2.3 单个菌落分离率及阳性报告微生物检验结果回报时间（TAT）延误率

在使用仪器培养24h后，仪器的自动接种所分离的单个菌落比手工接种所分离的多，由于需要分离单个菌落，因此手工样本就存在分离单个菌落而耽误接种时间的问题。在所有接种样本中，共有18份样本需要分纯处理，分纯率为3.60%，见表2。

3. 讨论

作为循环医学的直接证据，病原菌接种培养依旧是诊断感染性疾病的“金标准”，同时也是进行后期体外药物敏感性试验、合理选择抗菌药物进行个体化抗感染治疗的基础，因此，接种的好坏直接影响培养的阳性率、鉴定的准确性和临床报告的发放时间[4]。利用接种环分区划线以获取单个菌落是经典的细菌接种方法，目前仍被广泛应用临床实验检查，但这种手工接种法对操作人员的要求较高，不仅需要做到严格的无菌操作，同时操作人员需要经过严格培训和长期操作实践，而且在进行接种环灭菌时都需要使用酒精灯、电炉等，存在安全隐患，且受操作者个人因素的影响，重复性差，接种效率低，同时在操作过程中，标本长期暴露于空气中，操作者与标本近距离接触时间较长，健康风险较高[5]。

DL-96微生物检测系统根据各类细菌的不同理化性质设计相应的检测板，每块板含约28种生化反应孔和不同抗菌药物MIC测定孔，在各鉴定孔中加入菌悬液，药敏孔中加入含菌培养基，经35～37˚C孵育过夜[6]。该系统虽为半自动产品，但配有比浊仪和自动加样仪，操作简单易于标准化，可同时在一块板条上完成鉴定和药敏试验，试验数据一次性读取。与传统手工法比较，全自动化微生物接种仪接种的菌落均匀分布，分离的单个菌落更多，这样对于有多个菌种且数量多时，仪器接种可通过初次培养后即可获得单个菌落，相比手工法就节省了这一步骤的时间，从而更快速有效的发送临床报告，有效利用率高。

本次研究的所有标本经DL96-II鉴定系统接种后阳性率均明显高于传统手工法。分析其中原因可能是由于仪器接种是采用吸样器定量吸样，经处理后的液体标本，菌落分布均匀，可以更有效地接种标本；如痰标本，本是一种较为粘稠的物质，如果不进行有效的液化，可能会得不到有意义的菌落。因此，采用全自动化微生物接种仪接种可以有效降低漏诊率，实现分离接种的标准化。

DL-96细菌测定系统可以有效避免人为因素的影响，提高接种的效率，降低漏诊率，实现分离接种的标准化，节省检验报告时间，同时在真菌的鉴定和药敏实验方面也具有较高的临床应用价值。此外，该系统具有强大的统计功能，可与WHONET软件兼容，解决了手工统计的繁琐。系统可根据不同的需要提供不同时间、不同季节、不同标本、不同病区各类细菌的检出率和耐药率，还有院感监测系统，便于数据的整理统计，因此，DL-96细菌测定系统在临床微生物实验室标本接种中有着更广泛的应用前景。

[1] 张有江,刘丽芝,王磊利,等.ISOLA全自动平板接种仪对三种痰消化液液化和接种效果的评估[J].中华医院感染学杂志,2016,26(20):4614-4616.

[2] 王敬华,葛平,陈蓉,等.临床微生物实验室细菌分离接种技术的研究进展[J].检验医学,2015,30(7):757-760.

[3] 刘文静,谢秀丽,宋红梅,等.PREVI Isola 自动化微生物接种仪性能评估[J].现代检验医学杂志,2016,34(1):108-111.

[4] 杜强,屠博文,徐晓怡.自动化平板接种仪检测海产品中副溶血性弧菌方法效果研究[J].中国卫生检验杂志,2015,24(24):4238-4239.

[5] 毕宇涵,李鑫,董锐,等.46株福氏志贺氏菌耐药及PFGE分子分型分析[J].中国公共卫生管理,2016,19(1):85-87.

[6] 谢艳红.泌尿道感染细菌培养及药敏试验结果的分析[J].中国医药指南,2015,24(28):98-99.

Comparison and Analysis of the Application of Automatic Inoculation Instrument and Manual Inoculation in Clinical Microbiological Trial

DU Hai-ping Department of Clinical Laboratory, Wenjiang TCM Hospital (Sichuan Chengdu 611130)

标准检测

表2. 单个菌落分离率及阳性报告TAT延误率

1006-6586(2017)18-0001-02

R446.5

A

2017-07-20

杜海平，主管检验师，研究方向：临床微生物。