子宫内膜异位症患者中LXA4、MMP-9和ALDH1的表达意义

韩红 孙小薇 周俊雪 雷辉 张杰

·论著·

子宫内膜异位症患者中LXA4、MMP-9和ALDH1的表达意义

韩红 孙小薇 周俊雪 雷辉 张杰

目的探究脂氧素 A4(LXA4)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和乙醛脱氢酶 1(ALDH1)在子宫内膜异位症患者中的表达意义。方法选取2011年1月至2015年10月子宫内膜异位症患者128例作为试验组，患者均经病理检测以及腹腔镜检测确诊，同时选取同期健康体检女性50例作为对照组，通过酶联免疫吸附法对2组受检者实施LXA4、MMP-9和ALDH1水平检测，对比其检测结果的差异性，同时对试验组LXA4、MMP-9和ALDH1水平与其痛经评分和疾病分期的相关性进行分析。结果试验组子宫内膜异位症患者的血清LXA4(298.07±21.13)ng/L、MMP-9(161.01±10.41)ug/L、ALDH1(3.23±0.12)ng/L水平与对照组健康体检者的血清LXA4(564.24±40.13)ng/L、MMP-9(42.01±9.30)ug/L、ALDH1(0.99±0.24)ng/L水平相比，差异有统计学意义(P<0.05)。随着子宫内膜异位症患者的r-AFS分期升高、痛经程度加重，其LXA4水平逐渐降低，MMP-9、ALDH1水平逐渐升高，差异有统计学意义(P<0.05)。结论LXA4、MMP-9和ALDH1异常表达与患者子宫内膜异位症的发生与发展有着密切的关系，联合对LXA4、MMP-9和ALDH1进行检测，利于子宫内膜异位症患者疾病的早期诊断。

脂氧素 A4；基质金属蛋白酶-9；乙醛脱氢酶 1；子宫内膜异位症

子宫内膜异位症是一种妇科常见疾病，属于良性疾病，在育龄女性中的发病率较高，是指患者的子宫宫体肌层、宫腔被覆内膜以外的部位，具有子宫内膜组织(具有生长功能的间质、腺体等)，出现侵袭、扩散、种植、转移的疾病[1]。子宫内膜异位症患者的主要临床症状为腹痛、痛经、慢性盆腔炎、腹腔粘连，其中约有50%的患者会出现不孕症的情况。脂氧素 A4(LXA4)又称为内在“刹车信号”(炎性反应)，可以对多种炎性细胞和炎性介质起到负调节的作用。有研究表明，基质金属蛋白酶(MMPs)在子宫内膜异位症的发生和发展中有着重要的作用，其几乎可以对细胞外基质中的所有蛋白成分进行降解，对肿瘤侵袭的组织学屏障进行破坏，与肿瘤的生长、转移以及炎症等病理状态有着密切的关系[2]。乙醛脱氢酶1(ALDH1)是干细胞(正常组织与肿瘤组织)生长以及分化的必要物质，但是其是否对子宫内膜异位症的发生和发展进行参与，仍然缺乏一定的证据。本文主要对LXA4、MMP-9和ALDH1在子宫内膜异位症患者中表达意义作分析，内容如下文。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2011年1月至2015年10月子宫内膜异位症患者128例作为试验组，患者均经病理检测以及腹腔镜检测确诊，同时选取同期健康体检女性50例作为对照组。试验组纳入标准：3个月内未接受糖皮质激素治疗患者，无高血压病、冠心病和糖尿病等慢性病史患者，无结核、肝炎等传染性疾病史患者，无自身免疫性疾病和妇科恶性肿瘤患者。试验组平均年龄(43.38±8.85)岁；平均孕次(2.12±0.67)次；依据r-AFS分期标准(美国生殖协会)进行分期，Ⅰ期38例、Ⅱ期40例，Ⅲ期35例，Ⅳ期15例；痛经评分，0分42例，1分25例，2分30例，3分31例。对照组平均年龄(42.92±7.68)岁；平均孕次(2.56±0.75)次。2组年龄及孕次比较差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 方法 在采集受检者的血液标本前，均禁止其饮食、烟酒12 h，在试验组子宫内膜异位症患者入院首日以及对照组健康体检时，采集其空腹静脉血3 ml，将血液样本在常温下放置1 h，对血液样本进行离心处理，时间为20 min(3 000 r/min)，取上清液，在-80℃下保存，采用酶联免疫吸附法、全自动酶标仪(Elx800)对血清LXA4、MMP-9、ALDH1水平进行检测，在检测的过程中，严格按照相关的试剂盒(R&D Systems公司)操作说明进行操作[3]。

1.3 观察指标 对2组受检者的血清LXA4、MMP-9、ALDH1水平变化情况进行观察分析，同时分析血清LXA4、MMP-9、ALDH1水平与患者痛经严重程度(0分：无需服药；1分：需要服药，但未对正常生活和工作造成影响；2分：服药后缓解，影响至日常工作；3分：服药后仍对生活和工作造成严重影响)[4]、疾病分期的相关性。

2 结果

2.1 组间血清LXA4、MMP-9、ALDH1水平比较 试验组子宫内膜异位症患者的血清LXA4(298.07±21.13)ng/L、MMP-9(161.01±10.41)μg/L、ALDH1(3.23±0.12)ng/L水平与对照组健康体检者的血清LXA4(564.24±40.13)ng/L、MMP-9(42.01±9.30)μg/L、ALDH1(0.99±0.24)ng/L水平相比，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

组别LXA4(ng/L)ALDH1(ng/L)MMP⁃9(μg/L)试验组(n=128)298．07±21．133．23±0．12161．01±10．41对照组(n=50)564．24±40．130．99±0．2442．01±9．30t值53．608782．623270．5566P值0．00010．00010．0001

2.2 试验组不同分期患者LXA4、MMP-9、ALDH1水平比较 随着子宫内膜异位症患者的r-AFS分期升高，其LXA4水平逐渐降低，MMP-9、ALDH1水平逐渐升高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

r⁃AFS分期LXA4(ng/L)ALDH1(ng/L)MMP⁃9(μg/L)Ⅰ期(n=38)468．96±29．371．62±0．2260．75±8．97Ⅱ期(n=40)351．23±30．562．70±0．35100．30±10．92Ⅲ期(n=35)223．15±20．033．87±0．91167．56±19．56Ⅳ期(n=15)143．26±19．234．92±1．03253．23±25．61F值998．562102．364625．361P值0．00010．00010．0001

2.3 试验组不同痛经程度患者LXA4、MMP-9、ALDH1水平比较 随着子宫内膜异位症患者的痛经程度加重，其LXA4水平逐渐降低，MMP-9、ALDH1水平逐渐升高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

痛经评分(分)LXA4(ng/L)ALDH1(ng/L)MMP⁃9(μg/L)0(n=42)453．26±33．401．62±0．8453．27±8．801(n=25)331．23±25．412．47±0．9188．21±12．402(n=30)219．56±20．313．77±0．25169．45±21．203(n=31)143．69±18．205．07±1．02243．15±23．56F值956．23198．003779．126P值0．00010．00010．0001

3 讨论

子宫内膜异位症是在1885年首次被提出并命名，其在育龄女性中的发病率在5%～15%左右，且近年来子宫内膜异位症的发生率随着环境污染的严重、腹腔镜的应用、剖宫产率的增加而呈逐渐上升的趋势。子宫内膜异位症中最为常见的为卵巢子宫内膜异位症[5]，其复发率较高，主要临床症状为继发性或进行性痛经，其中约有40%的子宫内膜异位症患者会出现不孕症的情况，对患者的日常生活造成了严重的影响[6]。目前，认为子宫内膜异位症是多基因遗传性疾病，致病因素较为复杂。有研究表明，子宫内膜异位症与环境因素、基因异常、损伤修复、免疫功能缺陷、超氧化机制等有关。导致患者发病的原因尚不明确，多数医学研究者认为与经血逆流种植有关，但是有研究报道仅存在10%～15%的经血逆流女性出现了子宫内膜异位症[7]。本文研究中，通过对子宫内膜异位症患者与健康女性进行LXA4、MMP-9、ALDH1水平对比，以及不同痛经程度、病理分期子宫内膜异位症患者的LXA4、MMP-9、ALDH1水平变化情况，来对上述指标在子宫内膜异位症患者疾病诊断中的应用价值进行评价。

LXA4是炎症消退介质(内源性)，具有促进炎症消退、抗炎、抗纤维化、抑制组织增生的作用，同时可以降低炎症引发的水肿以及痛觉[8]。有学者在对子宫内膜异位症的发病机制研究中认为，其与血管生长、炎症反应等有着密切的关系，同时LXA4在子宫内膜异位症的发生和发展中起着十分重要的作用。Singh等[9]研究中表明，采用实时荧光定量PCR、酶联免疫吸附试验、免疫组织化学法对正常女性与子宫内膜异位症患者的PR、ER以及LXA4的表达进行测定，同时测定其雌激素受体情况，结果显示，在正常女性子宫内膜组织中，其雌激素受体α与雌激素受体β的mRNA呈周期性变化规律，而在子宫内膜异位症患者的病灶中，其雌激素受体α与雌激素受体β的mRNA表达，并不随着月经周期的变化而呈周期性变化；LXA4、PR、雌激素受体α在子宫内膜异位症患者的病灶组织中为低表达状态，雌激素受体β为高表达状态；外源性LXA4可以将雌激素受体β的表达状态进行上调，而雌激素受体β的DPN(特异性激动剂)则可以对P38 MAPK磷酸化进行抑制；LXA4可以对雌二醇诱导P38 MAPK磷酸化以及IL-6、TNF-α炎性因子的表达进行抑制，并抑制雌二醇对子宫内膜异位间质细胞增殖的诱导，从而对患者病灶的生长进行抑制[10]。本文研究结果显示，子宫内膜异位症患者的LXA4水平明显低于对照组健康女性，LXA4水平随着子宫内膜异位症患者痛经程度加重和病理分期增加，呈逐渐下降的趋势。结果显示，随着子宫内膜异位症患者痛经程度的加重与疾病分期的增加，其炎症反应在不断的加重，使得患者出现相关的功能障碍，降低血清LXA4水平，继而出现子宫内膜异位症，其进一步作用的相关机制还需要深入研究。炎症介质与炎症反应在子宫内膜异位症患者疾病发生和发展中有着重要的作用，因此，LXA4水平可能作为疾病早期诊断的指标[11]。

常规认为，子宫内膜异位症的转移特性与侵袭特性与细胞外基质的讲解作用有关，而MMPs是胞外基质分解酶，其属于依赖性内肽酶(Zn2+)家族，其可以通过降解细胞外基质来对肿瘤细胞的转移和侵袭进行促进[12]。已知的MMPs在24种以上，其中MMP-9是MMPs(明胶酶类)的一种，又可以被称为明胶酶B，其分子量为92 kD，可以对Ⅴ型、Ⅳ型胶原及弹性蛋白等细胞外基质主要成分进行降解。有研究表明，异位内膜基质细胞与正常子宫内膜组织相比，其细胞外基质降解作用较强，表明在异位子宫内膜中存在较强的MMPs活动[13]。相关研究认为，在正常情况下，MMPs的表达较少，且不能以活性酶的形式存在，但是在激素、炎性细胞因子以及生长因子的刺激下，其会出现活性增强以及表达量上升的情况。新近研究证明，MMP-9可以与整合素相互活化，从而对细胞间的黏附作用进行强化，同时可以对新生血管的形成起到促进的作用，从而在子宫内膜细胞发生异位黏附、种植以及生长过程发挥作用[14-16]。杨眉等[14]在研究中显示，通过免疫组化法染色检查，结果显示，正常的子宫内膜在DAB染色之后，其腺上皮细胞出现淡黄色，MMP-9、OPN主要在内膜腺上皮细胞中表达；子宫内膜异位症患者的在位子宫内膜在DAB染色之后，其腺上皮细胞在染色后，颜色加深，为棕黄色；子宫内膜异位症患者异位子宫内膜经DAB染色则为棕黑色，MMP-9与OPN主要在子宫内膜异位症患者的腺上皮细胞中表达[17]；子宫内膜异位症异位内膜患者的MMP-9表达与OPN表达明显高于子宫内膜异位症异位内膜患者与健康女性(P<0.05)；子宫内膜异位症在位内膜患者的MMP-9与OPN表达明显强于健康女性(P<0.05)；子宫内膜异位症患者的MMP-9与OPN表达与其病变程度呈正相关的关系(P<0.05)；对子宫内膜异位症患者的腺上皮细胞进行0、1、10、100、1 000 nmol/L孕激素的干预，其MMP-9与OPN表达情况相比，并不存在统计学意义(P>0.05)；MMP-9与OPN在子宫内膜异位症患者中会出现表达增强的情况，为患者实施孕激素干预，结果表明对MMP-9与OPN表达的影响较小。本文研究结果显示，子宫内膜异位症患者的MMP-9水平会随着其痛经程度与疾病分期的增加而逐渐升高。

ALDH1是一种乙醛氧化的解毒酶，是干细胞(正常组织与肿瘤组织)生长和分化的主要物质，可以参与至肝脏对体内烷化剂和酒精的解毒中，属于正常干细胞的主要标志物。ALDH1可以将细胞内的乙醛氧化为细胞溶质酶(乙酸的)，通过将氧化视黄醇转化为视黄酸来对基因的表达和组织分化进行参与[18]。刘颂平等[17,19]在研究中表明，试验组子宫内膜异位症患者的术前ALDH 1水平与血清CA125水平明显高于对照组健康体检女性(P<0.05)，其中Ⅰ 、Ⅱ 期子宫内膜异位症患者血清中的ALDH 1水平明显高于对照组健康女性(P<0.05)，但是试验组子宫内膜异位症患者的血清CA125水平与对照组相比，不存在明显的差异(P<0.05)；将血清CA125大于等于35 U/ml、ALDH 1大于等于2.0 pg/ml作为阳性临界值，2种标志物联合在子宫内膜异位症患者诊断中应用，其诊断的特异度为87.10%、灵敏度为91.60%、阳性预测值为84.60%、阴性预测值为89.30%；试验组子宫内膜异位症患者在手术之后，随访其1个月，显示其ALDH 1水平与CA125水平均较手术治疗前明显下降(P<0.05)，但是下降后的ALDH 1与CA125水平仍明显高于对照组健康女性(P<0.05)；试验组子宫内膜异位症患者术后1年存在1例患者疾病复发，术后2年存在6例患者出现疾病复发，疾病复发患者的ALDH 1水平明显高于对照组健康女性(P<0.05)，但是仅存在2例患者的血清CA125水平明显高于对照组(P<0.05)。将本文研究结果显示，试验组子宫内膜异位症患者的ALDH1水平与对照组健康女性相比，明显较高。有学者进行相关的研究，研究结果表明，在转移、侵袭以及血管形成方面，子宫内膜异位症患者的子宫内膜与正常内膜相比，差异较为明显。同时，本文研究结果还表明，随着患者痛经程度与疾病分期的增加，其ALDH1水平会出现升高的趋势。结果表明，ALDH1可能作为子宫内膜异位症患者疾病诊断的标志物，从而对子宫内膜异位症患者的疾病发生、发展以及疾病严重程度进行监测[20]。

综上所述，LXA4、MMP-9、ALDH1异常表达与子宫内膜异位症患者疾病的发生、发展等有着密切的关系，临床加强LXA4、MMP-9、ALDH1的联合检测，可以对子宫内膜异位症患者的早期诊断提供依据，以此促进其可以接受及时的治疗，改善其预后。

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10.3969/j.issn.1002-7386.2017.20.014

R 711.71

A

1002-7386(2017)20-3095-04

2017-05-20)

项目来源：保定市科学技术研究与发展计划项目(编号：16ZF134)

071000 河北省保定市第三中心医院(韩红、雷辉)；河北省蠡县妇幼保健计划生育服务中心(孙小薇)；河北省定州市人民医院(周俊雪)；河北省保定市竞秀区医院(张杰)