马来酸依那普利叶酸片与马来酸依那普利片和叶酸片联用的相对生物利用度评价※

王衍洪莫炫永肖俏霞孙凌瑜黎秀平曾丽萍何珊娜

马来酸依那普利叶酸片与马来酸依那普利片和叶酸片联用的相对生物利用度评价※

王衍洪1莫炫永2肖俏霞1孙凌瑜1黎秀平1曾丽萍1何珊娜1

目的探讨马来酸依那普利叶酸片与不同厂家马来酸依那普利片联用叶酸片的相对生物利用度。方法20名健康人群按照以下三个组别：对照组口服马来酸依那普利叶酸片（含依那普利10 mg/叶酸0.8 mg)、试验1组口服马来酸依那普利片（悦宁定）10 mg和叶酸片0.8 mg、试验2组口服马来酸依那普利片（依苏）10 mg和叶酸片0.8 mg，单剂量口服，经过清洗期后交换组别，保证每名受试者都能经历三组试验，对三种用药方案进行生物等效性评价。结果20名健康人群经三种用药方案治疗后，试验组与对照组的血药浓度及血药浓度-时间曲线相比差异无统计学意义（P＞0.05）。结论马来酸依那普利叶酸片和马来酸依那普利片加叶酸片具有相同的血药浓度及药时曲线，具有生物等效性。

马来酸依那普利叶酸片；马来酸依那普利片加叶酸片；药时曲线

马来酸依那普利叶酸片是第一个国家食品药品监督管理局批准用于治疗伴同型半胱氨酸（Homocysteine,Hcy）升高的原发性高血压的复合制剂，用于治疗伴有血浆Hcy水平升高的原发性高血压，依那普利为血管紧张素转换酶抑制剂，是前体药物，口服后其乙酯部分在肝内迅速水解，转化成其他的有效代谢物——依那普利拉，能强烈抑制血管紧张素转换酶，降低血管紧张素Ⅱ含量，造成全身血管舒张，引起降压；对Ⅱ肾型高血压、Ⅰ肾型高血压及自发性高血压大鼠模型均有明显的降压作用，在临床中应用非常广泛。口服依那普利约 68%被吸收，食物不影响其生物利用度，服药后1 h，血浆浓度依那普利可达峰值；服药后3.5～4.5 h，依那普利拉血浆浓度可达峰值，半衰期为11 h，肾功能正常者口服4 d后达血清稳态血药浓度，肝功能异常者依那普利代谢成依那普利拉的速度延缓。依那普利给药20 min后可广泛分布于全身各脏器，肝、肾、胃和小肠药物浓度最高，大脑中浓度最低，依那普利拉主要由肾脏排泄。叶酸为机体细胞生长和繁殖的必需物质，叶酸经二氢叶酸还原酶及维生素B12的作用，形成四氢叶酸（THFA），后者与多种一碳单位结合成四氢叶酸类辅酶，传递一碳单位，参与体内很多重要反应及核酸和氨基酸的合成。叶酸可作用于蛋氨酸循环，其一碳单位转化为甲基可使Hcy重甲基化，生成蛋氨酸用于细胞甲基化反应及蛋白质合成，叶酸还可以通过一碳单位供体的作用来促进核酸合成。因此，外源性补充叶酸能够促进Hcy甲基化过程，降低血浆Hcy。

国内对于依那普利生物利用度的研究分别有体外实验[1-5]或者是动物实验[6]以及健康人体试验[7-15]，相对比较全面和深入，但是对于马来酸依那普利叶酸片只有含量测定的报道[16]，对于其血药浓度检测、相对生物利用度的分析和人体生物等效性的评价，则未见有报道。而且，马来酸依那普利叶酸片的研究侧重于研究其疗效[18-20]，而对于马来酸依那普利叶酸片与马来酸依那普利片和叶酸片联用，只有降低血浆Hcy的对比分析[21]，未进行两者的人体生物等效性评价。另外，马来酸依那普利叶酸片作为近年来的国家一类新药，价格昂贵，远高于马来酸依那普利片和叶酸片联合用药的价格，因此，评价两种不同给药方案的人体生物等效性，对于减少药品费用具有现实意义。

1 材料与方法

1.1 药品与仪器

1.1.1 试验药物试验药物 1：马来酸依那普利片（悦宁定），规格：每片5 mg，生产厂家：MERCK SHARP ＆DOHME（Australia）Pty.Ltd，批号：M025472；叶酸片，规格：每片0.4 mg，生产厂家：江苏联环药业股份有限公司，批号：20140507。试验药物 2：马来酸依那普利片（依苏），规格：每片10 mg，生产厂家：扬子江药业集团江苏制药股份有限公司，批号：16072411；叶酸片，规格：每片0.4 mg，生产厂家：江苏联环药业股份有限公司，批号：20140507。对照药物：马来酸依那普利叶酸片（含依那普利10 mg/叶酸0.8 mg)，生产厂家：深圳奥萨制药有限公司，批号：20160708。

1.1.2 试验仪器Agilent 1200RRLC型高效液相色谱仪及 OPANLAB EZChrom工作站（美国 Agilent公司）；CPA225D十万分之一电子天平（德国赛多利斯公司）。

1.2 受试者选择在2016年7月至2017年3月期间，招募试验对象男性健康受试者 20名，年龄（40.2±2.6）岁，体重（66±9）kg，血常规、尿常规、肝功能、肾功能、血压、心电图及胸透等检查未发现异常。受试前两周及试验期间不服用任何其他药物。项目试验经医院伦理委员会批准，试验前本课题负责人向受试者说明试验目的、药物特性、临床应用及主要不良反应等，由本人签署了知情同意书。

1.3 分组给药与血样本采集本试验采用双周期自身随机交叉试验设计，20名受试者试验前后24 h内不得饮酒，按照以下三个组别：对照组口服马来酸依那普利叶酸片（含依那普利10 mg/叶酸0.8 mg)、试验1组口服马来酸依那普利片（悦宁定）10 mg和叶酸片0.8 mg、试验2组口服马来酸依那普利片（依苏）10 mg和叶酸片0.8 mg，单剂量口服给药，三次用药间清洗期为7 d，保证每名受试者都能经历三组试验，对三种用药方案进行生物等效性评价。受试者给药前禁食不禁水10 h，次日清晨8:00以200 ml温开水服药，服药2 h后可自由饮水，4 h后进统一标准餐。受试者须严格按试验方案参加本试验，并分别于给药前及给药后0.5、0.75、l、2、3、4、6、8、l2、18、24 h采静脉血5 ml，经过离心处理，再经甲醇沉淀蛋白质，再离心，取上清液。进行高效液相色谱-紫外检测法（HPLC-UV）测定依那普利和叶酸的血药浓度，确定三组受试者的血药浓度及绘制血药浓度曲线，测定数据以±s表示。

1.4 血药浓度测定

1.4.1 色谱条件色谱柱：C18色谱柱（Xbridge 3.0 mm×100 mm，3.5 μm，美国Waters公司）；以乙腈-0.5%甲酸（25:75）为流动相，流速为0.4 ml/min；检测波长为215 nm；柱温为50℃。

1.4.2 血样本处理静脉血5 ml离心（4000 rpn，10 min），取血清1 ml，加入3 ml甲醇，混匀，离心（10 000 rpn，5 min），取上清液2 ml，氮吹至干，加流动相1 ml溶解，用微孔滤膜（0.22 μm）滤过，取续滤液5 μl同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。根据方法测定人体血浆中依那普利、依那普利拉和叶酸联用的浓度。见图1。

1.5 统计学分析计算不同组别依那普利和叶酸血药浓度曲线的血药浓度-时间曲线下面积（AUC）、达峰时间（tmax）、血药峰浓度（Cmax）和相对生物利用度，所得Cmax和AUC进行自然对数转换后先用双交叉试验设计的方差分析，再用双单侧t检验进行人体生物等效性评价，tmax经Wilcoxon法非参数检验，进行统计学分析。

2 结果

2.1 血药浓度-时间曲线20名健康受试者按照不同组别单剂量口服试验药物和对照药物的平均血药浓度-时间曲线，见图 2。研究显示，经三种用药方案治疗后，试验组与对照组的血药浓度-时间曲线相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.2 药代动力学参数20名健康受试者口服试验药物和对照药物，其主要药代动力学参数，见表 1。

表1 20名健康受试者主要药代动力学参数

图1 高效液相色谱（HPLC）图（1叶酸，2依那普利拉，3依那普利）

图2 三种用药方案治疗后20名健康受试者的平均血药浓度-时间曲线图

2.3 生物等效性评价双单侧 t检验结果表明，AUC0-t90%置信区间为97.9%～118.3%，AUC0-∞90%置信区间为 99.5%～123.1%，Cmax90%置信区间为88.7%～131.2%，均落在规定范围内。tmax经非参数检验，表明差异无统计学意义（P＞0.05）。试验药马来酸依那普利片联用叶酸片相对于对照药的平均相对生物利用度F为（105.33±15.23～109.54±32.25）%，试验药物和对照药物具有生物等效性。

3 讨论

HPLC方法从检测波长的选择、柱温的选择、流动相中试剂的选择、色谱柱的选择、血液中目标物的检测来建立了 HPLC法同时检测马来酸依那普利和叶酸的血药浓度。

鉴于试验结果显示，马来酸依那普利叶酸片与上述两个厂家的马来酸依那普利片联用叶酸片具有生物等效性，由于在相同剂量下马来酸依那普利叶酸片价格远高于联合用药的马来酸依那普利片和叶酸片，提示临床医师可以根据患者的经济情况选择用药方案。但是，由于需要同时服用马来酸依那普利片和叶酸片，患者的用药依从性相对于马来酸依那普利叶酸片较差，应引起临床注意。

本次实验有不足之处只是验证了健康人群中三种不同厂家药品的单次药时曲线，未有在患者中及长期使用中验证，需要在以后相关研究做更进一步的确认。

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Relative bioavailability of enalapril folic acid tablets in combination with enalapril tablets and folic acid tablets

Wang Yanhong Mo Xuanyong Xiao Qiaoxia Sun Lingyu Li Xiùpíng Ceng Liping He Shanna

ObjectiveTo investigate the plasma concentration of enalapril maleate tablets and different manufacturers of enalapril maleate plus folic acid tablets for H-type hypertension.MethodsThirty healthy people according to the following three groups.The control group was treated with enalapril follicles (YiYe) (containing enalapril 10 mg / folic acid 0.8 mg),the test group 1 oral administration of enalapril tablets (Yue Ning Ding) 10 mg and folic acid tablets 0.8mg,For the test group 2 oral administration of enalapril tablets (YiSu) 10 mg and folic acid tablets 0.8 mg,a single dose of oral,after cleaning the exchange group,to ensure that everyone has experienced three groups of experiments.Result There was no significant difference between the experimental group and the control group in the plasma concentration and the time curve of the three groups(P＞0.05).Conclusion The enalapril maleate and maleic acid Enalapril tablets plus folic acid tablets have the same drug profile,and bioequivalent.

Enalapril maleate tablets;Enalapril maleate plus folic acid tablets;Drug time curve

10.12010/j.issn.1673-5846.2017.08.013

1中山大学附属东华医院，广东东莞 523110

2东莞市国药质量检测中心，广东东莞 523010

2014年广东省东莞市医疗卫生科技计划一般项目（编号：2014105101009）

王衍洪（1973.2-），硕士学位，药学部副主任，主任药师。研究方向：药事管理。E-mail：1594653364@qq.com