黔南州某种猪场猪瘟免疫净化探索

王兴辉蒙炳超龚才伟犹银俊吴朝福

（1，贵州省都匀市动物疫病预防控制中心558000；

2，贵州省黔南州动物疫病预防控制中心558000；

3，贵州省都匀市匀东镇农业技术服务中心558000）

黔南州某种猪场猪瘟免疫净化探索

王兴辉1蒙炳超2龚才伟2犹银俊2吴朝福3

（1，贵州省都匀市动物疫病预防控制中心558000；

2，贵州省黔南州动物疫病预防控制中心558000；

3，贵州省都匀市匀东镇农业技术服务中心558000）

动物疫病净化工作主要以长期监测与猪瘟免疫程序相结合的方式，即通过分群→检测→淘汰→免疫→检测→淘汰的形式进行循环式多阶段分层次净化，病种由点及面，累积经验，分步实施。通过开展猪瘟这一单病种的免疫净化探索，积累经验，为开展其他病种的净化工作奠定基础。

猪瘟；抗体；疫病净化

猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种高度接触性传染病，其特征为高热稽留、先便秘后腹泻、发病快、死亡率高，是威胁养猪业的主要传染病之一。近年来，国内猪瘟的流行特点和发病特征发生了明显的变化，病程由急性变为慢性。临床症状由典型变为非典型的温和型猪瘟，特别是低毒力猪瘟病毒的存在，常导致猪瘟病毒持续感染，母猪表现不孕、流产、早产、产死胎或木乃伊胎，初生弱仔猪表现为精神沉郁、间歇性腹泻、死亡或免疫耐受，易形成持续性感染带毒猪，造成猪瘟长期流行[1,2]。为在源头控制猪瘟病毒影响，2014年开始，我们在黔南州某种猪场开展猪瘟免疫净化试验。

1 免疫净化方案

1.1 免疫程序

种公猪、经产母猪一年免疫4次，后备猪配种前2次，商品猪35日龄进行首免、65日龄二免。

1.2 淘汰及补免

对猪瘟病原检测阳性的种猪淘汰并进行无害化处理。对猪瘟免疫抗体不合格的种猪进行补免，对多次免疫猪瘟抗体仍不合格的猪予以淘汰。

1.3 对新引进猪的监测和处理

对新引种猪检测猪瘟抗体和猪瘟病原，淘汰病原检测阳性猪；猪瘟抗体不合格的猪进行加强免疫，加强免疫后抗体仍不合格的猪予以淘汰。

1.4 采样检测

1.4.1 本地调查阶段

对免疫猪瘟疫苗3周后的种公猪后备母猪100%采集、10%经产母猪和后备母猪采集血清进行免疫抗体检测。对种100%公猪、10%种母猪和后备母猪采集猪扁桃体进行病原学检测。调查猪场猪群猪瘟基础情况。

1.4.2 免疫控制阶段

对免疫猪瘟疫苗3周后的100%种公猪、5%后备母猪和经产母猪采集血清进行免疫抗体检测。对100%种公猪、2%种母猪和后备母猪采集猪扁桃体进行病原学检测，一年两次。

1.4.3 净化评估阶段

对免疫猪瘟疫苗3周后的100%种公猪、5%后备母猪和经产母猪采集血清进行免疫抗体检测。对100%种公猪、2%种母猪和后备母猪采集猪扁桃体进行病原学检测，一年两次。

2 材料与方法

2.1 材料

2.1.1 疫苗

武汉中博生物股份有限公司猪瘟疫苗 （细胞源）。

2.1.2 试剂名称

猪瘟ELISA抗体检测试剂盒购自武汉科前生物科技有限公司，猪瘟病毒实时荧光RT-PCR试剂盒购自北京世纪元亨生物有限公司。

2.1.3 仪器设备

酶标仪 （Biotek 200XL）、荧光PCR 仪 （ABI 7500）。

2.2 方法

2.2.1 猪瘟抗体检测

用武汉科前生物有限公司猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒说明书方法对分离的猪血清样品进行ELISA抗体检测。

2.2.2 猪瘟病原检测

RNA提取：按照世纪元亨公司猪瘟病毒实时荧光RT-PCR试剂盒A盒说明书方法对采集的猪扁桃体猪头提取总RNA，总RNA立即使用或-20℃临时保存。

荧光RT-PCR：按世纪元亨公司猪瘟病毒实时荧光RT-PCR试剂盒B盒说明书配置25μl反应体系后在荧光PCR仪器上扩增。

荧光RT-PCR结果判定：根据试剂盒判定标准进行判定。

3 检测结果

3.1 猪瘟免疫抗体检测

对3个阶段猪群采集血清进行免疫抗体检测，具体检测数据见表1。

3.2 猪瘟病毒病原学检测

采集3个阶段猪扁桃体，用实时荧光RT-PCR检测猪瘟病原学，结果都是阴性，具体检测数据见表2。

4 分析与讨论

动物疫病净化工作主要以长期监测与猪瘟免疫程序相结合的方式，即通过分群→检测→淘汰→免疫→检测→淘汰的形式进行循环式多阶段分层次净化，病种由点及面，累积经验，分步实施[3,5]。在开展该项工作前，对该场近几年的监测和调查分析，没有发现猪瘟临床病例或检测阳性，为开展该项工作奠定了比较好的基础。在净化工作中，除猪瘟病原检测出现阳性必须淘汰并无害化处理外，免疫抗体分本底调查阶段、免疫控制阶段和评估阶段3个阶段制定相应标准进行评估，达到标准后，才能进入下以阶，并且抗体必须检测合格才能作为种猪。

表1 猪瘟抗体检测统计表

表2 猪瘟病原学检测统计表

在免疫控制阶段，少部分经产母猪经过第二次重新补免后，抗体才合格；有些后备种猪按照免疫程序开展免疫，经过两次免疫后，猪瘟抗体检测仍然不合格，最终作淘汰处理。免疫失败除可能与免疫接种技术有关外，可能猪圆环、高致病性蓝耳病和猪伪狂犬病病毒等猪的免疫抑制性疾病，降低了猪对疫苗的免疫应答能力，这个阶段的工作在免疫、检测、淘汰中重复，也是整个净化工作的难点。经过免疫控制阶段免疫技术的积累，后备猪群的群体免疫合格率提高了5.6%，达到97.3%，但仍有部分后备种猪因为其他免疫抑制性疾病影响，导致经过两次免疫，抗体检测仍然不合格。这也反映了猪病种类多，可能会相互影响，致使疫病净化是一个系统而又漫长的过程[4,5]。我们通过开展猪瘟这一单病种的免疫净化探索，积累经验，为开展其它病种的净化工作奠定基础。

[1]李达,马萍,汤德元,等.规模化猪场猪瘟和伪狂大病的净化方案 [J].畜牧与兽医,2015(7)：119-123.

[2] 王海洋,柴方红,李春花,等.吉林市不同规模猪场种猪猪瘟抗体检测与猪瘟净化措施初探[J].吉林畜牧兽医,2015(1)：20-21.

[3] 杨林,张淼洁,付雯,等.种猪场主要疫病净化程序[J].中国畜牧业,2016(1)：52-60.

[4]李娇,祖立闯,王金良,等.我国 4 省猪瘟、猪蓝耳病、猪伪狂犬病、猪圆环病毒病的血清流行病学调查[J].养猪,2014(4)：123-124.

[5] 王昌建,范仲鑫,唐小明,等.规模猪场垂直传播疫病的净化实践与思考[J].中国畜牧业,2016(4)：40-42.

项目来源：黔南州科技计划项目基金黔南科技合农字 （2015）10号。

王兴辉 （1979.5-），男，本科，兽医师，从事动物疫病诊断和检测工作。