银翘蓝芩口服液对鸡的安全性试验

许春燕，刘希望，孔晓军，杨亚军，秦 哲，李世宏，李剑勇

(中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/农业部兽用药物创制重点实验室/甘肃省新兽药工程重点实验室，甘肃兰州 730050)



银翘蓝芩口服液对鸡的安全性试验

许春燕，刘希望，孔晓军，杨亚军，秦 哲，李世宏，李剑勇*

(中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/农业部兽用药物创制重点实验室/甘肃省新兽药工程重点实验室，甘肃兰州 730050)

依据兽药研究技术指导原则，开展银翘蓝芩口服液对靶动物鸡的安全性研究，为其临床应用的安全性提供数据资料。按银翘蓝芩口服液临床推荐剂量的1、3、5倍连续饮水给药7 d，给药前后，逐只称重。试验结束后采集血液和组织器官，进行血常规、血液生化指标、脏器指数及病理组织学观察。结果表明，与对照组相比，各给药组鸡只的体重、血常规、血液生化及脏器指数等指标差异均不显著(P>0.05)，各组织器官未见明显的病理组织学变化。说明银翘蓝芩口服液饮水给药对靶动物鸡是安全的。

银翘蓝芩口服液；安全性；鸡

银翘蓝芩口服液是中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所多年来对鸡传染性支气管炎发病机制、病程发展、诊断、治疗等方面潜心研究的基础上，在传统中兽医理论指导下，结合现代中药药理药性分析和科学提取手段，选择金银花、连翘、黄芩等多味中药经水煮醇沉制备的一种纯中药复方制剂。该复方具有清热解毒、凉血燥湿、消肿散结、止咳平喘等功效[1-3]，主要用于治疗鸡传染性支气管炎。

靶动物安全性试验是观察不同剂量受试药物作用于靶动物后从有效作用到毒性作用，甚至到致死作用的动态变化的过程。该试验旨在考察受试药物使用于靶动物的安全性及安全剂量范围，为进一步临床试验给药方案的制定提供依据。根据《兽药研究指导原则汇编(2006年—2011年)》和农业部1596号公告《兽用中药、天然药物临床试验技术指导原则》等5个技术指导原则进行靶动物鸡的安全性评价试验。本试验以银翘蓝芩口服液临床推荐剂量的1、3、5倍连续饮水给药7 d后，观察给药鸡只的死亡情况和精神状况，以及血常规、血液生化、脏器指数及病理组织学等方面的变化，以评价银翘蓝芩口服液对靶动物鸡临床应用的安全性和安全剂量[4]，为其临床安全用药提供基础数据[5]。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试药品 银翘蓝芩口服液，生产批号：20141201，规格100 mL/瓶，中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所委托河南牧翔动物药业有限公司生产的中试产品。

1.1.2 试验用动物 3周龄健康海兰褐蛋用型鸡64只。试验期间使用不含任何药物的全价颗粒饲料饲喂，自由饮水。

1.1.3 仪器与试剂 迈瑞BC2800 V型血细胞分析仪，深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司产品；XL-640型全自动生化分析仪，德国欧霸公司产品；LEICA RM2025型组织切片机、LEICA TP1020型组织脱水机，德国Leica公司产品；CK-2型倒置显微镜，日本Olympus公司产品；总胆红素(T-BIL)试剂盒、直接胆红素(DBIL)试剂盒、总蛋白(TP)试剂盒、白蛋白(ALB)试剂盒、谷丙转氨酶(ALT)试剂盒、谷草转氨酶(AST)试剂盒、碱性磷酸酶(ALP)试剂盒、谷氨酰胺转移酶(GGT)试剂盒、乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒、肌酸激酶(CK)试剂盒、尿素(BUN)试剂盒、肌酐(CR)试剂盒、葡萄糖(GLU)试剂盒、血清钙(Ca)试剂盒和血清磷(P)试剂盒、甘油三酯(TG)试剂盒及总胆固醇(TCH)等18种试剂盒，宁波美康生物科技股份有限公司产品。

1.2 方法

1.2.1 试验动物分组与给药 64只3周龄海兰褐蛋用型鸡，随机分为4组，每组16只，分别为空白对照组及1组、2组、3组，1组、2组、3组即受试药物推荐剂量1、3、5倍剂量组[6-7]，逐只称重并记录，给药剂量分别为0.5、1.5、2.5 mL。将不同剂量的银翘蓝芩口服液分别兑入600 mL水中，集中饮用，每天1次，连续给药7 d。试验期间，按常规饲养条件进行饲养。

1.2.2 临床观察 试验期间，每天观察受试鸡给药后的临床症状变化，包括采食、饮水、粪便、精神状态及死亡情况等。

1.2.3 血常规和血液生化指标检测 试验结束时，所有鸡均采集全血适量，肝素钠抗凝，进行血液常规检查[8]；同时采集全血适量，4 000 r/min离心10 min分离血清，进行血液生化指标检查。

1.2.4 脏器指数变化和病理组织学观察 试验前后对各组试验鸡逐只称重，统计体重。试验结束后，在空白对照组和各剂量组随机挑选5只剖检，精确称量心、肝、脾、肺及肾，计算其脏器指数，并进行病理组织学观察[9]。

2 结果

2.1 一般临床观察

连续给药7 d后，各受试药物组与空白对照组相比，鸡只精神状态良好，粪便无异常，各组均无死亡现象。

2.2 体重及脏器指数

比较试验前后各受试药物组鸡和空白对照组鸡体重差异性，结果见表1。与对照组相比，各给药组的体重差异均不显著(P>0.05)。脏器指数结果见表2，各给药组鸡的脏器指数与对照组差异不显著(P>0.05)，表明银翘蓝芩口服液对鸡脏器指数没有影响。

表1 银翘蓝芩口服液对鸡体重的影响

2.3 血液常规检测结果

银翘蓝芩口服液对靶动物鸡连续饮水给药7 d后，对试验鸡进行血常规检测，结果见表3。与空白对照组比较，银翘蓝芩口服液各剂量组对鸡的血液学指标无显著差异(P>0.05)，表明银翘蓝芩口服液对靶动物鸡的血液常规指标无不良影响。

表2 银翘蓝芩口服液对鸡脏器系数的影响

表3 银翘蓝芩口服液对鸡血液学指标的影响

2.4 血液生化指标检测结果

银翘蓝芩口服液对靶动物鸡连续饮水给药7 d后，对试验鸡血液生化指标进行检测，结果见表4。

与空白对照组比较，银翘蓝芩口服液各剂量组鸡只的ALT、AST、BUN、CR、GLU、ALB、TP、T-CH、TG等血液生化指标均无显著差异(P>0.05)。

表4 银翘蓝芩口服液对鸡血液生化指标的影响

2.5 病理组织学观察

试验结束后，随机挑选受试药物剂量组和空白对照组各5只鸡进行了病理组织学观察。剖检受试动物的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胸腺、法氏囊、肌胃及腺胃等器官，经肉眼观察未发现明显病变。取心、肝、肾进行病理组织学观察，结果见图1。5倍剂量组与空白对照组相比，心、肝、肾3种器官的结构清晰，层次分明，发育状况均正常，没有发现与药物作用有关的细胞变性、坏死及炎性细胞浸润等病理组织学变化，说明连续7 d饮用5倍推荐剂量的银翘蓝芩口服液对鸡的主要脏器不会产生毒性作用及病理性损伤。

A、C、E. 心、肝、肾空白对照组；B、D、F. 5倍剂量组心、肝、肾

A，C，E. Control of heart,liver and kidney;B,D,F. 5 times doses of heart,liver and kidney

图1 心脏、肝脏、肾脏组织切片(HE)

Fig.1 Histological section for heart,liver and kidney(HE)

3 讨论

药物对靶动物安全性的试验目的是了解受试药物在靶动物中的剂量-反应曲线[13]，即从有效作用到毒性作用，或至致死作用的持续动态变化过程，观测指标包括靶动物对药物中毒剂量的临床反应特征，受试药物有效剂量、推荐剂量和中毒量对靶动物的病理组织学和生理生化指标的影响，从而发现受试药物的不良反应、防治措施及临床应用时的注意事项。

本试验从鸡的采食、精神、体重增加情况、脏器指数、血液学指标及血液生化指标等[14-16]方面，对以银翘蓝芩口服液推荐剂量的1、3、5倍剂量投服的受试鸡进行了安全性研究和评估。从试验结果可以看出，使用推荐剂量的1倍～5倍剂量银翘蓝芩口服液的受试鸡均未出现明显的临床症状，脏器指数、血液常规指标、血液生化指标等参数与空白对照组相比也无显著差异(P>0.05)。病理组织学观察结果显示，心、肝、肾等实质脏器均未出现明显的病理组织学变化。由此可以说明，以银翘蓝芩口服液1、3、5倍推荐剂量应用于靶动物鸡是安全的。

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Safety Test on Yinqiaolanqin Oral Liquid in Chickens

XU Chun-yan,LIU Xi-wang,KONG Xiao-jun,YANG Ya-jun,QIN Zhe,LI Shi-hong,LI Jian-yong

(LanzhouInstituteofAnimalHusbandryandPharmaceuticalSciencesofCAAS,KeyLaboratoryofVeterinaryPharmaceuticalDevelopment,MinistryofAgriculture,KeyLaboratoryofNewAnimalDrugProjectofGansuProvince,Lanzhou,Gansu,730050,China)

According to the requirement of veterinary research guidance,the safety studies on Yinqiaolanqin oral liquid in target animal (chickens) were carried out in the experiment.These studies could provide relevant materials for its safety in clinical application.In the experiment,1,3 and 5 times of clinical recommended doses were administrated to chickens in water for seven days.After administration, the data of body weight,clinical hematology,blood biochemistry,organ indices and histopathology were obtained.Compared with control group, the results showed that there were no significant difference of these indices among these groups (P>0.05).Meanwhile,no histopathological lesion was observed in all organs in treated groups.In conclusion,the administration of Yinqiaolanqin oral liquid by drinking water to chickens was safe.

Yinqiaolanqin oral liquid;safety;chicken

2016-09-12

公益性行业(农业)科研专项(201303040-12)

许春燕(1988-)，女，河南驻马店人，硕士研究生，主要从事中兽药研究。*通讯作者

S853.74

A

1007-5038(2017)07-0062-04