平肝止痛颗粒对偏头痛（肝阳上亢型）大鼠血浆中ET、PENK含量的影响*

秦 瑞 金 曦

（长春中医药大学，吉林 长春 130117）

·研究报告·

平肝止痛颗粒对偏头痛（肝阳上亢型）大鼠血浆中ET、PENK含量的影响*

秦 瑞 金 曦△

（长春中医药大学，吉林 长春 130117）

目的 观察平肝止痛颗粒对肝阳上亢型偏头痛大鼠的镇痛效果，探讨其治疗偏头痛的作用机制。方法使用附子法和硝酸甘油法制作肝阳上亢偏头痛大鼠模型，通过酶联免疫法检测大鼠血浆中内皮素（ET）、前脑啡肽原（PENK）含量。结果 平肝止痛颗粒高、中剂量组均能明显减少ET含量，与模型组比较差异显著。头痛宁和平肝止痛颗粒中剂量组可以减少PENK含量，与模型组比较有明显差异。结论 平肝止痛颗粒可以有效降低肝阳上亢型偏头痛，其作用机制可能与降低血浆中ET、PENK的含量有关。

平肝止痛颗粒 偏头痛 内皮素 脑啡肽 镇痛

偏头痛是一种临床常见的原发性的神经血管疾患，临床表现为发作时一侧或双侧的搏动性头痛。属于中医学“头痛”的范畴，其证治分类为外感、内伤。外感分为风寒头痛、风热头痛、风湿头痛；内伤分为肝阳头痛、血虚头痛、痰浊头痛、肾虚头痛、瘀血头痛。血浆内皮素（ET）是广泛存在于人体血管内皮及其他组织中的一种缩血管物质，而偏头痛的发病机制一般通常认为是血管舒缩功能障碍为主。前脑啡肽原（PENK）是脑啡肽的前体，通过作用于相应部位的阿片受体实现镇痛作用。本研究观察通过测量肝阳上亢型偏头痛大鼠血浆中ET、PENK的含量，通过统计学分析，探讨平肝止痛颗粒治疗偏头痛的作用机制。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 健康Wistar大鼠，体质量180～220 g，清洁级，延边大学实验动物中心提供。生产单位动物许可证编号：SCXK-（吉）2011-0007。实验动物饲养于吉林省中医药科学院实验动物室屏障系统内，动物室温度19～23℃，相对湿度45～65%，光照12 h明、12 h暗。

1.2 试药与仪器 1）试药：动物饲料及饮水饲料原料组成为玉米、豆粕、鱼粉、面粉、麸皮、食盐、磷酸氢钙、石粉、多种维生素、多种微量元素、氨基酸等组成。购自北京科澳协力饲料有限公司。饲料生产许可证号京饲证 （2014）06054，实验动物许可证号SCXK （京）2014-0010，执行标准GB 14924.3-2010。大鼠饮水使用凯弗隆科技有限公司生产的KFL-400纯水机制备的纯净水。实验受试药物及阳性药，平肝止痛颗粒为棕色颗粒，含4.5 g生药/g粉，由长春中医药大学附属医院提供。药物成份：水牛角、夏枯草、藳本、蔓荆子、栀子、川芎、当归、黄芩、生地黄、延胡索。头痛宁胶囊（每粒0.4 g。陕西步长制药有限公司，批号：150631）用0.5%羧甲基纤维素钠配制成浓度为0.7%g/kg的混合液。盐酸氟桂利嗪胶囊（每粒5 mg。天津创新药业有限公司，批号：20150306）用0.5%羧甲基纤维素钠配制成浓度为4 mg/kg的混合液。附子提取物的制备：称取制附子粗粉500 g，加10倍水浸泡30 min后加热回流提取2次，每次提取后过滤，合计提取时间2 h，合并滤液，减压浓缩至2500 mL，计算得到浓缩液含生药0.2 g/mL。2）仪器：DNM酶标仪（北京普朗新技术有限公司）、JA2003B千分之一天平 （上海越平科学仪器有限公司）、JJ200精密电子天平 （常熟双杰测试仪器厂）、Y-2000型电子天平（常熟双杰测试仪器厂）、低速离心机（安徽中科中佳科学有限公司）、DW-86L386海尔立式超低温保存箱（青岛海尔特殊电器）。

1.3 分组与造模 肝阳上亢大鼠模型根据Cristina［1］等报道的硝酸甘油型实验性动物模型制作，健康大鼠70只，雌雄分开，适应性喂养5 d，5 d后留取大鼠10只，为正常对照组，其余大鼠为造肝阳上亢模型鼠。参考文献报道方法［2］，余下各组每日按2 g/kg体质量给予上述制备得到的附子浓缩液，持续灌胃21 d，复制肝阳上亢证模型。当灌胃附子组出现频繁打斗、双眼结膜颜色变深、饮水量增加、提颈时尖叫甚至咬人为肝阳上亢模型复制成功标志。模型制备成功，大鼠随机分成模型组、盐酸氟桂利嗪胶囊组、头痛宁组、平肝止痛颗粒高剂量组、中剂量组、低剂量组。正常对照组：灌胃10 mL/kg的蒸馏水，每日1次，连续21 d。模型组大鼠：给药15 d后，上午继续灌胃附子浓缩液，下午灌胃10 mL/kg的蒸馏水。盐酸氟桂利嗪胶囊组：给药15 d后，上午继续灌胃附子浓缩液，下午灌胃4 mg/kg盐酸氟桂利嗪胶囊内容物。头痛宁组：给药15 d后，上午继续灌胃附子浓缩液，下午灌胃0.7 g/kg头痛宁胶囊内容物。平肝止痛颗粒高剂量组、中剂量组、低剂量组：给药15 d后，上午继续灌胃附子浓缩液，下午灌胃5.32 g/kg（24 g生药/kg）、2.66 g/kg（12 g生药/kg）、1.33 g/kg（6 g生药/kg）平肝止痛颗粒。持续给药至第21天。动物造模处理，于大鼠最后给药1 h后，除正常组外，各组均按照10 mg/kg（2 mL/kg）在右肩皮下注射硝酸甘油，正常对照组则按2 mL/kg剂量右肩皮下注射生理盐水，复制硝酸甘油偏头痛模型。当大鼠出现前肢挠头、频繁爬笼、烦躁不安等情况时，证实为偏头痛模型复制成功。

1.4 观察指标 观察各组动物疼痛行为学，并应用酶联免疫法检测大鼠血浆中ET、PENK含量。

1.5 统计学处理 应用SPSS18.0统计软件分析。计量资料以（±s）表示，采用单因素方差分析；如果方差齐性，采用LSD检验；如果方差不齐，则采用Dunnett T3检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组大鼠挠头次数比较 见表1。与正常对照组比较，模型组大鼠挠头次数显著增加，表示模型成立。平肝止痛颗粒高剂量组显著减少大鼠挠头次数，与模型组比较有显著差异（P＜0.01）。

表1 各组大鼠挠头潜伏期和不同时间段挠头次数比较（min，±s）

表1 各组大鼠挠头潜伏期和不同时间段挠头次数比较（min，±s）

与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01，△△△P＜0.001。下同。

组别 n正常对照组 10模型组 10盐酸氟桂利嗪胶囊组 10 60～90 90～120 1.40±1.73△△△1.30±2.84△△△20.00±14.87 23.80±29.26 30.60±27.54 34.00±26.86头痛宁组 10 10.10±5.81△36.10±26.40 27.00±22.05 27.20±40.80 17.00±14.23平肝止痛颗粒高剂量组 10 15.28±25.29 20.80±17.99 8.36±9.67△△6.27±10.09△△6.30±11.01△△平肝止痛颗粒中剂量组 10 7.42±4.65 26.00±16.44 25.80±26.68 14.20±11.91 19.60±28.08平肝止痛颗粒低剂量组 10 7.53±4.82 43.20±48.14 30.20±26.37 44.00±47.11 17.30±18.71搔头潜伏期 0～30 30～60 35.87±40.85△1.90±2.06△△△1.00±1.48△△△5.94±2.48 31.50±23.09 33.00±22.72 7.76±3.92 44.70±42.31 31.64±27.91

2.2 各组大鼠血浆中ET、PENK含量比较 见表2。模型组ET、PENK含量明显高于正常对照组 （P＜0.05或P＜0.01）。平肝止痛颗粒高、中剂量组均能明显减少ET含量，与模型组比较差异显著（均P＜0.05）。头痛宁和平肝止痛颗粒中剂量组可以减少PENK含量，与模型组比较有显著差异（P＜0.05或P＜0.01）。

表2 各组大鼠血浆中ET、PENK含量比较（μmol/L，±s）

表2 各组大鼠血浆中ET、PENK含量比较（μmol/L，±s）

组别 n正常对照组 12模型组 12盐酸氟桂利嗪胶囊组 11 ET PENK 82.83±28.18 186.91±56.04 132.32±105.91 200.59±65.90 155.39±130.06 202.78±48.82头痛宁组 11 84.44±90.50 151.11±37.96△平肝止痛颗粒高剂量组 11 41.06±6.36△146.97±69.32平肝止痛颗粒中剂量组 12 45.35±14.57△125.77±21.68△△平肝止痛颗粒低剂量组 12 65.89±63.19 165.21±53.25

3 结 论

偏头痛是临床常见疾病和多发病，中医治法分为虚证和实证的不同。外感头痛属实证，以风邪为主，治疗上主要以疏风，兼以散寒、清热、化湿。内伤头痛多属虚证或虚实夹杂，虚证以滋阴养血，益肾填精。实证以平肝、化痰、行瘀。《素问·风论》“风系循风府而上，则为脑风；风系循头，则为目风……新沐中风，则为首风”［3］。首次提出了“首风、脑风”病名。符合偏头痛发病似风，起病迅速、善行数变等特点。关于偏头痛的发病的病因病机，胡志强等［4］提出，偏头痛的发病其主要机制责之于肝胆失去正常疏泄作用、导致风阳上扰清窍。孙建宁［5］认为偏头痛是因为肝胆热结，热极生风，痰阻血瘀，从而导致清窍失和，络脉闭塞，发而为病。肝阳上亢型主要有情绪急躁易怒，毛细血管充盈、皮肤潮红、心率加快等客观表现，以及头晕、目眩、口苦咽干、失眠等主观症状［6］。本病的病机主要是肝风内动、肝阳上扰。最终确立“平肝潜阳”的方法来治疗偏头痛。平肝止痛颗粒主要由水牛角、夏枯草、藁本、蔓荆子、栀子、川芎、当归、黄芩、生地黄、延胡索组成。方中水牛角味咸而寒，入肝、心经，能清热凉血、解毒、定惊；夏枯草辛、苦而寒，能入肝、胆二经，具有清热泻火、散结消肿之功。两药相合，起到清泄肝火之功。藁本辛温，善行颠顶，止太阳头痛；蔓荆子味辛、苦，性微寒，能疏散头面之风邪。两者合用起到疏风止痛之功。栀子苦寒，能泻三焦之火；黄芩苦寒，清热燥湿、泻火解毒；生地黄清热生津。三者同用，泻热生津除烦。川芎能活血行气，通络止痛，为治疗偏头痛要药；当归活血行血；延胡索活血、行气、止痛。三者相互使用，能活血行血止痛。全方共用起到平肝止痛、行气活血、疏风清热之功。平肝止痛颗粒从肝出发，基于偏头痛“肝阳上亢”病机，治疗上以“平肝潜阳”之法，针对肝阳上亢证型用药，通过临床检验，取得了良好疗效。

本实验选用硝酸甘油实验性偏头痛模型优势在于，动物经济，易于获得；造模技术相对简便，易于成功；造模因素具有唯一性，定量容易；可以在动物活动自如意识清楚的情况下完成行为学观察。

现代医学认为ET是一种具有强烈缩血管作用的血管活性多肽，具有强大的缩血管作用［7］。在偏头痛发作时，大量的ET合成、释放，导致血管舒缩功能失调，使脑血管痉挛而引发偏头痛［8］。偏头痛患者血浆中ET含量较正常高［9-10］，说明血浆ET水平的升高和持续异常共同构成了偏头痛的病理生理学基础［11］。ET又能刺激内皮细胞产生内皮源性血管舒张因子和前列环素，以对抗脑血管的收缩作用［12］。平肝止痛颗粒通过对脑血管内皮细胞的保护作用，降低血浆ET的含量，使血管收缩达到一种稳态。而内源性ENK通过μ受体、δ受体参与构成内源性痛觉调制系统，发挥镇痛功能［13］。中脑导水管周围灰质（PAG）内PENK在催产素增强电针镇痛中发挥重要作用［14］。最新研究发现［15］，大鼠延髓背角PENK可能通过抑制含钙结合蛋白的伤害性感受神经元来调节面部伤害性信息的传递。平肝止痛颗粒中的川芎能够促进血小板解聚，抑制血小板释放，改善血液循环而治疗偏头痛，另外，川芎还有镇静解痉作用［16］。总之，平肝止痛颗粒能够明显降低偏头痛患者血浆ET、PENK水平，治疗偏头痛疗效确切。

本研究通过测量平肝止痛颗粒对肝阳上亢型偏头痛血浆中ET、PENK的影响，以血管源学说为基础，从分子水平验证平肝止痛颗粒平肝潜阳、通络止痛的作用。实验结果显示，模型组中的ET、PENK含量明显高于正常对照组。平肝止痛颗粒高、中剂量组均能明显减少ET含量，与模型组比较差异显著。头痛宁和平肝止痛颗粒中剂量组可以减少PENK含量，与模型组比较有明显差异。因此，我们可以得肯定平肝止痛颗粒在治疗偏头痛方面有一定的干预作用，减少血浆中ET、PENK的含量是其防治偏头痛发作的作用机制之一。本实验为平肝止痛颗粒作为偏头痛的临床治疗药物提供了相关实验支持。

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Effect of Pinggan Zhitong Granule on ET and PENK Content in Blood Plasma of Migraine Rats with Hy-peractivity of Liver-yang

QIN Rui，JIN Xi. Changchun University of Traditional Chinese Medicine，Jilin，Changchun 130117，China.

Objective：To observe the analgesic effect of Pinggan Zhitong Granule on ET and PENK content in blood plasma of migraine rats with hyperactivity of liver-yang and discuss the mechanism of its effect on migraine. Methods：Migraine rats with hyperactivity of liver-yang models were set up with Radix Aconiti Lateralis Preparata and nitroglycerin method.ET and PENK content in rats'blood plasma was detected by ELISA.Results：Compared with blank group and model group，Pinggan Zhitong Granule high dose and medium dose group could reduce ET content obviously and there was significant difference with the model group.Toutongning and Pinggan Zhitong Granule medium dose group could reduce PENK content and the result showed significant difference compared with the model group.Conclusion：Pinggan Zhitong Granule can effectively alleviate liver-yang hyperactivity migraine.Its mechanism may be related to its down-regulating effect on the ET and PENK content in blood plasma.

Pinggan Zhitong Granule；Migraine；ET；PENK；Analgesia

R285.5

A

1004-745X（2017）05-0786-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2017.05.010

2017-02-08）

吉林省科学技术厅重点科技攻关项目（20150204046YY）

△通信作者（电子邮箱：1521957360@qq.com）