传染性单核细胞增多症和慢性活动性EB病毒感染患儿免疫功能分析

王颖超，朱桂英，张秋堂，蒋兰君，李壮壮

·论著·

传染性单核细胞增多症和慢性活动性EB病毒感染患儿免疫功能分析

王颖超1*，朱桂英1，张秋堂2，蒋兰君1，李壮壮1

传染性单核细胞增多症；疱疹病毒4型,人；T淋巴细胞亚群；免疫球蛋白同型

王颖超，朱桂英，张秋堂，等.传染性单核细胞增多症和慢性活动性EB病毒感染患儿免疫功能分析[J].中国全科医学，2017，20(17)：2089-2094.[www.chinagp.net]

WANG Y C,ZHU G Y,ZHANG Q T.Immunologic function in children with infectious mononucleosis and infected with Epstein-Barr virus[J].Chinese General Practice，2017，20(17)：2089-2094.

Immunologic Function in Children with Infectious Mononucleosis and Infected with Epstein-Barr VirusWANGYing-chao1*,ZHUGui-ying1,ZHANGQiu-tang2,JIANGLan-jun1,LIZhuang-zhuang1

1.DepartmentofPediatrics,theFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052,China

2.InstituteofHematology,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052,China

*Correspondingauthor:WANGYing-chao,Associatechiefphysician,Mainresearchdirection:bloodandtumordiseasesinchildren;E-mail:yingchaowang152@163.com

Infectious mononucleosis；Herpesvirus 4,human；T-lymphocyte subsets；Immunoglobulin isotypes

同行评议：

EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)，又称人类疱疹病毒4型(human herpes virus 4,HHV-4)，属于疱疹病毒科嗜淋巴细胞病毒属成员。人群对EBV普遍易感，多数人初次感染发生在儿童或者青少年时期，并可终生携带。据统计，中国>8岁人群90%以上血清学阳性[1]。典型的EBV初次感染表现为传染性单核细胞增多症(IM)，多呈自限性，预后良好[2]；值得注意的是，在免疫抑制、遗传缺陷或潜伏感染反复激活的情况下，EBV感染可导致不良预后，如进展为慢性活动性EBV感染(CAEBV)、EBV相关噬血细胞综合征、淋巴瘤等。有研究认为，EBV能有效刺激细胞介导的免疫反应，影响机体免疫功能，且免疫功能低下者感染EBV后病情易恶化，病死率较高[3-4]。EBV可感染T、B淋巴细胞及自然杀伤细胞，引起免疫系统紊乱，因此宿主对EBV的免疫应答功能状态与感染后不同临床表现、疾病转归密切相关。本研究通过检测EBV感染引起的儿童IM和CAEBV外周血淋巴细胞亚群及免疫球蛋白的水平，并与健康儿童的相应指标作对比分析，旨在深化对该病发病机制的认识，为临床诊治提供参考。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取2010年5月—2016年5月在郑州大学第一附属医院儿科诊治，且进行过外周血淋巴细胞亚群及免疫球蛋白检测的EBV感染患儿共34例，其中IM组20例、CAEBV组14例。IM、CAEBV诊断均符合《儿童主要非肿瘤性EB病毒感染相关疾病的诊断和治疗原则建议》[5]。IM组纳入标准：包括IM的临床诊断和实验室诊断标准。临床诊断：满足下列临床指标中任意3项及实验室指标中第4项；实验室诊断：满足下列临床指标中任意3项及实验室指标中第1～3项中任意1项。临床指标：(1)发热；(2)咽扁桃体炎；(3)颈淋巴结肿大；(4)脾大；(5)肝大；(6)眼睑水肿。实验室指标：(1)抗EBV-病毒衣壳抗原(VCA)-IgM和抗EBV-VCA-IgG抗体阳性，且抗EBV-核抗原(NA)-IgG阴性；(2)抗EBV-VCA-IgM阴性，但EBV-VCA-IgG抗体阳性，且为低亲和力抗体；(3)双份血清抗EBV-VCA-IgG抗体滴度4倍以上升高；(4)外周血异型淋巴细胞分数≥0.10和/或淋巴细胞计数增多≥5.0×109/L。CAEBV组纳入标准：同时满足下列(1)、(2)和(3)者，(1)IM样症状持续或反复发作3个月以上；(2)EBV感染及引起组织病理损害的证据，即①血清EBV抗体滴度异常增高，包括抗VCA-IgG≥1∶640或抗EA-IgG≥1∶160，VCA-IgA和/或EA-IgA阳性；②外周血单核细胞(PBMC)中EBV-DNA水平高于1.0×102.5拷贝/μg，或血清、血浆EBV-DNA阳性；③受累组织中EBV-EBERs原位杂交或EBV-潜伏膜蛋白1(LMP-1)免疫组织化学染色阳性；(4)Southern杂交在组织或外周血细胞中检测出EBV-DNA；(3)排除目前已知自身免疫性疾病、肿瘤性疾病以及免疫缺陷性疾病所致的上述临床表现。选取体检健康的儿童20例为对照组，对照组儿童均无急慢性疾病史及家族遗传性疾病史。

1.3 免疫球蛋白检测 采集清晨空腹静脉血2 ml于干燥试管中，待凝固后3 400 r/min离心8 min(离心半径15 cm)，立即分离血清，严格按照厂家说明书进行操作，采用免疫散射比浊法检测血清IgA、IgG、IgM水平，所用试剂由美国Beckman Coulter公司提供。

2 结果

2.1 3组性别、年龄比较 3组性别、年龄比较，差异均无统计学意义(P>0.05，见表1)。

2.3 3组免疫球蛋白水平比较 3组IgM比较，差异无统计学意义(P>0.05)；3组IgA、IgG比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。其中IM组和CAEBV组IgA、IgG较对照组升高，差异均有统计学意义(P<0.05，见表3)。

表1 3组性别、年龄比较

注：IM=传染性单核细胞增多症，CAEBV=慢性活动性EB病毒感染；a为H值

表3 3组免疫球蛋白水平比较

注：与对照组比较，aP<0.05

表2 3组外周血血常规及淋巴细胞亚群结果比较〔M(P25，P75),×109/L〕

注：与对照组比较，aP<0.05；与IM组比较，bP<0.05

注：IM=传染性单核细胞增多症，CAEBV=慢性活动性EB病毒感染，FITC=异硫氰酸荧光素，APC=藻青蛋白，PE=藻红蛋白

图1 3组外周血淋巴细胞亚群流式细胞术结果

Figure 1 Flow cytometry results of lymphocyte subsets in peripheral blood among three groups

3 讨论

本研究结果表明，IM和CAEBV组患儿外周血IgA、IgG水平均明显高于对照组，提示患儿体内存在强烈的免疫反应。EBV长期潜伏于人体是其致病的一个重要条件，作为抗原，EBV能通过刺激机体产生特异性抗体，形成免疫复合物；另外，促使补体激活免疫细胞，引发强大的免疫效应，进而导致自身免疫系统受损[15]。然而，这些免疫紊乱是否是由EBV感染引起的，还是患儿本身存在免疫缺陷并在EBV的诱导下而表现出来，或者还有其他目前不清楚的原因，尚待进一步研究。

作者贡献：王颖超进行文章的构思与设计，负责文章的质量控制及审校，对文章整体负责，监督管理；朱桂英、张秋堂进行研究的实施与可行性分析；李壮壮进行数据收集；蒋兰君进行数据整理；朱桂英、蒋兰君进行统计学处理；王颖超、朱桂英进行结果的分析与解释,论文的修订；朱桂英撰写论文。

本文无利益冲突。

[1]XIONG G,ZHANG B,HUANG M Y,et al.Epstein-Barr virus (EBV) infection in Chinese children:a retrospective study of age-specific prevalence[J].PLoS One,2014,9(6):e99857.DOI:10.1371/journal.pone.0099857.

[2]LENNON P,CROTTY M,FENTON J E.Infectious mononucleosis[J].BMJ,2015,350:h1825.DOI:10.1136/bmj.h1825.

[3]GAO L,AI J,XIE Z,et al.Dynamic expression of viral and cellular microRNAs in infectious mononucleosis caused by primary Epstein-Barr virus infection in children[J].Virol J,2015,12(1):208.DOI:10.1186/s12985-015-0441-y.

[4]HISLOP A D.Early vimlogical and immunological events in Epstein-Barr virus infection[J].Curr Opin Virul,2015,15:75-79.DOI:10.1016/j.coviro.2015.08.002.

[5]中华医学会儿科学分会感染学组,全国儿童EB病毒感染协作组.儿童主要非肿瘤性EB病毒感染相关疾病的诊断和治疗原则建议[J].中华儿科杂志,2016,54(8)：563-568.DOI:10.3760/cma.j.issn.0578-1310.2016.08.002. Infection Group,Pediatrics Society,Chinese Medical Association，the National Cooperative Group of Children with EB Virus Infection.Advice on the diagnosis and treatment of major non neoplastic EB virus infection-associated diseases in children[J].Chinese Journal of Pediatrics,2016,54(8):563-568.DOI:10.3760/cma.j.issn.0578-1310.2016.08.002.

[6]LIMA M,TEIXEIRA MDOS A,QUEIROS M L,et al.Immunophenotype and TCR-Vbeta repertoire of peripheral blood T-cells in acute infectious mononucleosis[J].Blood Cells Mol Dis,2003,30(1):1-12.DOI:10.1016/S1079-9796(03)00014-7.

[7]WILLIAMS H,CRAWFORD D H.Epsteion-Barr virus:the impact of scientific advances on clinical practice[J].Blood,2006,107(3):862-869.DOI:10.1182/blood-2005-07-2702.

[10]黎四平,陆小梅,刘绍基,等.传染性单核细胞增多症患儿免疫功能分析[J].实用儿科临床杂志,2012,27(16):1264-1266.DOI:10.3969/j.issn.1003-515X.2012.16.017. LI S P,LU X M,LIU S J,et al.Analysis of immune function of infectious mononucleosis in children [J].Journal of Applied Clinical Pediatrics,2012,27(16):1264-1266.DOI:10.3969/j.issn.1003-515X.2012.16.017.

[11]邢燕,宋红梅,李太生,等.慢性活动性EB病毒感染外周血淋巴细胞免疫亚群变化特征的研究[J].中华儿科杂志,2009,47(6):441-445.DOI:10.3760/cma.j.issn.0578-1310.2009.06.011. XING Y,SONG H M,LI T S,et al.Characteristics of peripheral blood lymphocyte immune subsets in patients with chronic active Epstein-Barr virus infection[J].Chinese Journal of Pediatrics,2009,47(6):441-445.DOI:10.3760/cma.j.issn.0578-1310.2009.06.011.

[13]OHSHIMA K,KIMURA H,YOSHINO T,et al.Proposed categorization of pathological states of EBV-associated T/natural killer-cell lymphoproliferative disorder (LPD) in children and young adults:overlap with chronic active EBV infection and infantile fulminant EBV T-LPD[J].Pathol Int,2008,58(4):209-217.DOI:10.1111/j.1440-1827.2008.02213.x.

[14]邢燕,宋红梅,吴晓燕,等.慢性活动性EB病毒感染患儿外周血单个核细胞EB病毒DNA及感染细胞类型检测的临床意义[J].中华儿科杂志,2011,49(7):495-500.DOI:10.3760/cma.j.issn.0578-1310.2011.07.004. XING Y,SONG H M,WU X Y,et al.Significance of detecting the EBV-DNA level in peripheral blood mononuclear cells and the EBV infected cell type in patients with chronic active EBV infection[J].Chinese Journal of Pediatrics,2011,49(7):495-500.DOI:10.3760/cma.j.issn.0578-1310.2011.07.004.

[15]COLEMAN C B，WOHLFORD E M，SMITH N A，et al.Epstein-Barr virus type 2 latently infects T cells，inducing an atypical activation characterized by expression of lymphotactic cytokines[J].J Virol，2015,89(4):2301-2312.DOI:10.1128/JVI.03001-14.

(本文编辑：陈素芳)

R 512.7

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2017.17.010

2016-09-26；

2017-03-30)

1.450052河南省郑州市，郑州大学第一附属医院儿科

2.450052河南省郑州市，郑州大学血液病研究所

*通信作者：王颖超，副主任医师，主要研究方向：儿科血液与肿瘤；E-mail：yingchaowang152@163.com