口腔舌厚度与舌鳞状细胞癌淋巴结转移的关系

张琦雪 张晓芳 卢雪娇



口腔舌厚度与舌鳞状细胞癌淋巴结转移的关系

张琦雪 张晓芳 卢雪娇

目的 探讨口腔舌厚度与舌鳞状细胞癌淋巴结转移及预后的关系。方法 采用三步法，检测96例舌鳞状细胞癌患者口腔舌厚度。结果 口腔舌厚度测量值与患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤部位、侵袭深度，肿瘤分期及分化程度、是否转移等并不存在相关性(P>0.05)；而淋巴结受累者口腔舌厚度测量值明显上调(P<0.05)，而无淋巴结受累者其测量值与正常组相比差异无统计学意义(P>0.05)，口腔舌厚度测量值的增加与淋巴结受累有关。结论 口腔舌厚度测量值水平与舌鳞状细胞癌的淋巴结转移及预后有一定的相关性，但还需进一步系统研究。

舌鳞状细胞癌；预后；不同口腔舌厚度；淋巴结转移；相关性

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:1162～1164)

舌鳞状细胞癌占全身恶性肿瘤发病率的第六位，多数患者患病后初次就诊已经伴有广泛的淋巴结转移或者远端的转移，就已处于该病的晚期，失去根治手术的机会，耽误了治疗的最佳时机，早期诊断对疾病的及时发现及治疗具有重要的临床意义，从而尽可能避免对患者的过度治疗或延误治疗[1-2]。近年来研究发现，在不同口腔舌厚度在癌瘤区域淋巴结转移中具有重要的作用[3]，临床中我们发现在舌鳞状细胞癌的发病中存在不同口腔舌厚度增厚。本研究收集舌鳞状细胞癌患者不同口腔舌厚度的表达情况、淋巴结转移资料，通过分析舌鳞状细胞癌癌瘤区淋巴结转移及预后与不同口腔舌厚度的演变规律，进一步探讨舌鳞状细胞癌的淋巴结转移预后情况。

1 资料与方法

1.1 病例收集

纳入我院口腔外科2012年1月至2015年1月行舌鳞状细胞癌手术切除的96例患者病例样本，经病理检查均确诊为原发性舌鳞状细胞癌，纳入研究的所有患者均为初诊的患者，且在术前未进行任何放疗、化疗及分子靶向治疗等。96例中男性74例，女性22例，年龄42～78岁，平均年龄为(61.34±1.13)岁。在术中取材之后，肿瘤的位置以病理组织报告为标准，患者入组后进行口腔舌厚度的测量，同时进行病理学的监测，对舌鳞状细胞癌组织的病理学进行分型，肿瘤的浸润程度按照国际抗癌联盟标准分类[4]，淋巴分化以及转移采用的国际WHO的诊断标准[5]进行分析判断，对所有手术治疗的患者从出院到死亡进行随访观察，每月1次。同时纳入健康人群23例作为对照组，所有受试者签订知情同意书，收集标本前该临床试验研究通过了医院伦理委员会的批准。

1.2 口腔舌厚度测量

口腔舌厚度参照国际测量标准，舌厚度为舌癌组织上皮到最深肌肉及基质的长度，对于舌癌组织形成溃疡的患者，测量的厚度应当为溃疡底到舌癌最深的部位。

1.3 RNA提取及qPCR检测

对96例舌鳞状细胞癌组织采用RNA提取试剂盒进行RNA提取，采用TaqMan RNA试剂盒检测不同口腔舌厚度的VEGF测量值。采用RNU6作为内参进行校正。对口腔舌厚度采用二步法进行检测，第一步是通过茎环引物来合成互补DNA，再通过RNA的逆转录系统对10 ng RNA进行逆转了反应体系进行反应，在PCR管加入10 μl的逆转录缓冲液，总的RNA浓度调整到2 ng/μl，最后加入5 μl的逆转录引物，在冰上混匀之后反应5 min，行梯度变形反应，反应条件为94 ℃、30 s，60 ℃、30 s，72 ℃、60 s，72 ℃、7 min，一次递减；第二步采用Platinum SYBR Green qPCR的反应体系，该体系具体形式：Taqman RNA的特异性引物与2×Taqman Universal混合液相互混合之后通过逆转录PCR反应，再加入5 μl cDNA到RNA的酶溶液中，将体积扩增至20 μl，通过循环反应94 ℃、30 s，60 ℃、30 s，72 ℃、60 s，72 ℃、7 min，递减的扩张40个循环之后，对实验结果进行分析，采用荧光实时定量反应，按照PCR操作说明，Ct的检测值应当在20～32之外的需要进行第2次检测。应用△Ct=Ct不同口腔舌厚度-CtRNU6的计算公式计算不同口腔舌厚度的VEGF测量值。

1.4 统计学检测

所有纳入分析研究的数据应用SPSS 21.0的统计软件建立数据库，将不同口腔舌厚度分为2组，小于平均值为低表达组，大于平均值作为高表达组。通过分析不同口腔舌厚度与发病相关因素分析以逐步回归法筛选有统计学意义的变量，对临床病理因素之间的风险情况采用logistic回归分析，组间比较用方差分析，组间均数比较采用t检验，组间率的比较用卡方检验，两两比较采用LSD检验。应用Kruskal-wallis H检验进行多组间数据的比较，具有统计学差异的以P<0.05表示。

2 结果

2.1 口腔舌厚度测量值与舌鳞状细胞癌临床病理特征的相关性

96例舌鳞状细胞癌组织口腔舌平均厚度为5.436 mm，95%CI为0.323～0.534。测量值低于平均值的有42例，高于平均值的有54例，口腔舌厚度测量值与患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤部位、侵袭深度、肿瘤分期、分化程度及远处转移等无相关性(P>0.05)；而淋巴结受累者口腔舌厚度测量值明显上调(P<0.05)，而无淋巴结受累者其测量值与正常组相比差异无统计学意义，P>0.05，见表1。

表1 口腔舌厚度测量值与舌鳞状细胞癌临床病理特征的相关性

2.2 口腔舌厚度测量值与淋巴结转移风险的关系

采用logistic回归分析口腔舌厚度测量值与淋巴结转移的相关性，口腔舌厚度测量值上升会增加舌鳞状细胞癌淋巴结转移的风险性，通过调整风险,其OR=5.16，95%CI为1.27～20.83，P=0.03，见表2。

表2 口腔舌厚度测量值与淋巴结转移风险的关系

2.3 口腔舌厚度与VEGF表达相关性

口腔舌厚度与VEGF表达具有相关性，见表3。

表3 舌鳞状细胞癌患者口腔舌厚度与VEGF表达的关系

3 讨论

近年来舌鳞状细胞癌的发病率呈逐年上升的趋势，虽然治疗水平不断提高，但是患者的生存率并未得到明显提高，其转移与复发仍是其死亡的主要原因[4]。国内外目前对舌鳞状细胞癌的诊断研究主要集中在病因学、遗传基因、早期诊断手段的研究，治疗方面研究主要集中在放射、化学以及手术方法改进等方面，虽然取得了一定进展，但该病的发病率及死亡率并未得到明显降低，说明研究的深度尚不足，研究还处于基础阶段尚未应用于临床。由于舌鳞状细胞癌作为恶性肿瘤，对人类生命具有重大的威胁[5-6]。因此，进一步寻找有关舌鳞状细胞癌复发、转移生物标记物及敏感特异是该病有效治疗、提高生存率的关键点。其次做好舌鳞状细胞癌发病的预防及早期发现，减少其发病率和转移率，是今后研究的重要方向[7]。

临床实践研究发现，多数早期舌鳞状细胞癌在发病的初期并无明显的临床症状，在首次就诊时大部分舌鳞状细胞癌患者已经进入中晚期，因此舌鳞状细胞癌患者预后极差，生存率较低[8]。通过大量的临床研究发现，舌癌淋巴转移是重要的转移方式，然而对其诊断方面并无有效的早期诊断指标，因此寻找早期诊断舌癌转移的有效方法是当今口腔肿瘤亟待解决的问题[9]。近年来的研究直接对癌组织淋巴浸润深度及病理分级作为评估淋巴转移的有效方法，但是该方法存在较大的主观性，对评估结果造成一定的误差，因此对临床疾病的诊断并不为良好的方法[10]。部分研究通过采用术前的MRI检测，但该项操作价格昂贵，操作复杂，因此不适于普通人群的检测[11]。我们通过长期的临床观察发现，口腔舌厚度对疾病的发展具有一定的预测作用，而有关口腔舌厚度与预后的关系鲜见报道。因此我们通过本研究以探讨两者之间的相关性。

肿瘤转移是1个复杂的过程，有赖于新生血管的生成，不同口腔舌厚度具有增强微血管通透性，为肿瘤的浸润转移提供条件，刺激内皮细胞促进肿瘤血管生成。肿瘤细胞中不同VEGF的水平上调，具有促进肿瘤的生长的作用[12-13]。本研究通过分析不同口腔舌厚度在舌鳞状细胞癌中的表达与VEGF和淋巴结转移及舌鳞状细胞癌发生发展及预后的关系，为舌鳞状细胞癌的抗血管生成治疗研究提供理论依据。结果显示，不同口腔舌厚度测量值与患者的一般资料如年龄、性别、以及肿瘤的特征如大小、发病的部位、侵袭深度，肿瘤的分期及分化程度、是否转移等并不存在相关性；而淋巴受累方面，淋巴受累组的不同口腔舌厚度测量值明显上调，不同口腔舌厚度测量值明显上调与淋巴结受累转移的风险有关，同时发现不同口腔舌厚度与VEGF差异表达具有相关性，对早期舌鳞状细胞癌的诊断具有一定的作用。

综上所述，我们发现口腔舌厚度在舌鳞状细胞癌具有相关性，与淋巴结转移有着密切的相关性，提示口腔舌厚度可能与舌鳞状细胞癌的转移侵袭等影响预后的因素有关，该VEGF差异性表达推测可能是舌鳞状细胞癌早期的潜在靶点，但是本研究不足的是病例数还较少，不同口腔舌厚度在舌鳞状细胞癌中的作用机制和靶基因生物学预测和阐明有待于进一步研究。

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(编辑：吴小红)

Relationship between Oral Tongue Thickness and Lymph Node Metastasis of Tongue Squamous Cell

ZHANGQixue,XIAOFangzhang,LUXuejiao.OralCavityHospitalAffiliatedtoChinaMedicalUniversity,Shenyang,110000

Objective To study the thickness of the tongue and oral tongue squamous cell carcinoma lymph node metastasis and prognosis.Methods The tongue thickness of 96 patients with squamous cell carcinoma was detected by 3 steps.Results

There was no correlation between the measured values of oral tongue thickness and the age,sex,tumor size,tumor location,depth of invasion,tumor stage and degree of differentiation,whether metastasis or not (P>0.05),and the thickness of oral tongue was significant (P<0.05).There was no significant difference between the measured values and the normal group (P>0.05).The increase of oral tongue thickness was related to lymph node involvement.Conclusion Oral tongue thickness measurement and level tongue squamous cell carcinoma with lymph node metastasis and prognosis of relevant,but need to be further studied.

Squamous cell carcinoma;Prognosis;Different oral tongue thickness;Lymph node metastasis;Correlation

110000 辽宁省沈阳市中国医科大学附属口腔医院

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.07.036

R739.86

A

1001-5930(2017)07-1162-03

2016-08-08

2017-04-10)