长链非编码RNA MALAT1与非小细胞肺癌患者肿瘤复发和预后的相关性研究

彭 卓 牛泽群 万 林 王 妮 杨拴盈



长链非编码RNA MALAT1与非小细胞肺癌患者肿瘤复发和预后的相关性研究

彭 卓 牛泽群 万 林 王 妮 杨拴盈

目的 研究长链非编码RNA MALAT1与非小细胞肺癌患者肿瘤复发和预后的相关性。方法 选择原发性非小细胞肺癌患者60例，取其肿瘤组织及癌旁组织，应用RT-PCR技术测定原发性非小细胞肺癌肿瘤组织中MALAT1的表达情况，分析MALAT1表达与非小细胞肺癌患者术后复发及总体生存预后的关系。结果 与癌旁组织相比，肺癌组织中MALAT1表达量显著升高(P<0.05)。MALAT1 表达与患者年龄、肿瘤直径、肿瘤数量、肿瘤分期、肿瘤分化程度以及术前甲胎蛋白水平等无显著相关性；Cox 回归分析结果显示，肿瘤直径>5 cm、有血管侵犯、术前AFP含量≥400 ng/ml 以及高MALAT1表达量是影响患者术后复发和总生存的高危因素(P<0.05)。结果 MALAT1 在非小细胞肺癌中表达量高与非小细胞肺癌手术后肿瘤复发和预后有显著关系，可为非小细胞肺癌患者的复发和预后提供参考，为临床诊断和治疗提供依据。

长链非编码RNA；非小细胞肺癌；复发；预后

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:1056～1058)

肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，其病死率位列恶性肿瘤之首。其中约80%左右的患者患有非小细胞肺癌(NSCLC)。NSCLC是全球多发性的恶性肿瘤，病死率高[1]。因此，寻找1种分子标志物，有效提高早期诊断率、指导治疗及预后是目前亟待解决的问题。有研究发现，长链非编码RNA参与到基因调控的各个过程，与非小细胞肺癌的发生及其各个发展阶段有关[2]。本研究通过检测长链非编码RNA MALAT1在非小细胞肺癌患者的表达情况，拟探讨长链非编码RNA MALAT1与NSCLC的复发与预后的关系。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选择2012年1月至2014年12月来我院诊治的原发性非小细胞肺癌患者60例，收集其肺癌组织及其相应的癌旁组织。纳入标准：①通过手术病理检测确诊为非小细胞肺癌患者；②术前未接受过化疗或分子靶向治疗；③病例资料完整；④入组患者均签署知情同意书。排除标准：①严重器官功能障碍者；②患有自身免疫性疾病；③病毒性感染者；④精神疾病患者。其中男性38例，女性22例，年龄38～80岁，平均年龄(48.7±7.8)岁；其中单发肿瘤24例，多发肿瘤36例；血管侵染者23例，未发生血管侵染者37例；按美国癌症联合委员会的癌症分期标准：Ⅰ期12例，Ⅱ期20例，Ⅲ期28例；病理分化程度，高分化和中分化共48例，低分化12例；术前甲胎蛋白(AFP)<400 ng/ml 29例，AFP≤400 ng/ml 31例；复发患者37例，未复发者23例。所有研究内容均符合本院伦理委员会制定的标准。

1.2 研究方法

1.2.1 标本采集 所有患者均行根治术，术后切除的组织立即放入液氮中，随即转到-80 ℃冰箱中保存，整个过程应按照无酶的原则进行操作。术后对行根治术的患者进行随访，中位随访时间为36.8个月。

1.2.2 试剂与仪器 lncRNA MALAT1 引物、GAPDH引物及Triazol 购于美国Invitrogen 公司。RNA逆转录试剂盒、PCR试剂盒、RNA酶抑制剂、dNTPs SYBR Mastermix购自大连TaKaRa 公司。

1.2.3 实时定量PCR 取冻存的标本各50 mg 磨成粉末，加入购买好的RNA提取物抽提RNA，抽提时每1×107个细胞中加入1 ml提取液。严格按照说明书的要求进行操作。抽提后，用分光光度计对抽提出的RNA进行测定，确定RNA的质量。取1 ng～1 μg RNA，按照试剂说明书要求对RNA进行逆转录生成cDNA。实时定量PCR采用Power SEBR Green PCR Master试剂盒及德国Eppendorf公司生产的PCR仪，按照说明书制备反应体系并进行PCR扩增。收集每份检测样品的CT值结果，并设定内参GAPDH，依据标准计算方法对NSCLC中相关转录因子(MALAT1)的表达量进行相对定量分析。

1.3 统计学方法

应用SPSS 17.0对数据进行处理，计量资料以均数±标准差表示，患者累计生存时间以Kaplan-Meier 法计算，生存分析采用Log-rank 计算法；风险分析采用Cox比例分析回归模型；计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，P<0.05具有统计学差异。

2 结果

根据MALAT1表达量，将NSCLC患者分为MALAT1高表达组(为MALAT1>0.40)及MALAT1低表达组(MALAT1≤0.40)。

2.1 MALAT1 表达量与NSCLC临床病理的关系

研究发现：MALAT1表达与患者年龄、肿瘤直径、血管是否受侵染、肿瘤分期、肿瘤病理分化程度、肿瘤数量以及甲胎蛋白含量无显著相关性，见表1。

表1 MALAT1表达与NSCLC临床病理特征的关系/例

2.2 非小细胞肺癌组织及癌旁组织中MALAT1的表达情况

MALAT1在非小细胞肺癌组织中的表达量为0.54±0.10，癌旁组织中其表达量为0.2±0.07，结果表明，与癌旁组织比较，肺癌组织中其表达水平显著增高(P<0.05)。

2.3 非小细胞肺癌组织中MALAT1表达与患者术后复发和预后的关系

结果表明：与MALAT1低表达患者相比，MALAT1高表达的患者预后更差。MALAT1表达量低，患者术后第1、3、5年的无复发生存率，显著高于MALAT1表达量高患者，见表2。

表2 MALAT1表达与NSCLL患者术后无复发生存率的关系/%

2.4 术后肿瘤复发与总生存的多因素分析

多因素Cox回归分析结果表明，肿瘤直径>5 cm、血管被侵犯、术前甲胎蛋白含量≥400 μg/L 以及MALAT1表达量高是非小细胞肺癌患者手术后复发和预后差的危险因素，见表3。

表3 非小细胞肺癌患者术后肿瘤复发多因素分析结果

3 讨论

非小细胞肺癌主要包括3种类型：肺鳞癌、肺腺癌以及大细胞肺癌。根治性手术、放射疗法以及与顺铂联合化疗是目前治疗非小细胞肺癌的主要方法。但这些方法通常不能根治非小细胞肺癌，很难达到预想的治疗效果，预后较差[3]。因此，提高非小细胞肺癌患者的总生存率，应从其发病机制进行深入探索，从而在恶性肿瘤发生增殖和侵袭转移前对其进行抑制[4-6]。ENCODE项目研究组对人类基因组调节和结构组成进行了长时间的研究，结果表明仅有1.5%的基因组中能够编码蛋白质的序列，以前的研究中表明其余的序列为无用的[7]。但最新研究表明这些序列绝大部分都可以被转录生成非编码RNA[8]。目前人们对其研究进展十分关注，因此不少学者对长链非编码RNA的生物学功能及其作用机制进行进一步研究。长链非编码RNA的长度大约为200nt，一般不编码蛋白或编码蛋白极少，其主要是通过表观遗传学、转录以及转录后调控等形式调控靶基因的表达，在肿瘤生成的过程中占重要的地位[9-10]。最初的研究发现，MALAT1的表达量在不同类型的肺癌中存在差异，研究者认为MALAT1在肿瘤的侵袭和转移等发展过程中起着重要作用。总而言之，长链非编码RNA 主要是表现为癌基因或抑癌基因的生物学作用，可促进或抑制肿瘤细胞的生长。

本研究探讨MALAT1 在非小细胞肺癌组织样本及癌旁组织中的表达情况，通过RT-PCR法对样本中的MALAT1的定量检测发现：与癌旁组织相比，MALAT1在肺癌组织中的表达量显著升高(P<0.05)。这一结果提示MALAT1的表达情况与非小细胞肺癌的产生、恶化以及复发有一定相关性，为肺癌患者临床诊断、预测肿瘤复发率提供依据。本研究对MALAT1的表达情况与患者临床病理特征进行相关性分析，结果表明，MALAT1表达情况与患者年龄、肿瘤直径、肿瘤数目、肿瘤分期、血管是否侵染、病理分化程度以及甲胎蛋白含量等无显著相关性，这一结果提示，MALAT1与临床病理特征因素无关，是NSCLC的一个独立指标。多因素Cox回归分析结果表明，可预测患者术后复发和预后的因素包括：肿瘤直径大、数量多、出现血管侵袭及MALAT1表达量高。MALAT1 是预测术后复发和预后的独立危险因素。

由此得出，长链非编码RNA MALAT1表达量过高时可以提示NSCLC的复发和预后，其与患者预后有显著相关关系，是影响患者术后复发及总生存率的独立危险因素。

[1] 陈 璇,周光华.3D-CRT低剂量区V5体积的大小对非小细胞肺癌患者肺功能的影响〔J〕.湖南师范大学学报(医学版),2016,13(2):46-48.

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[3] 徐丽娟,刘 华,李 进,等.埃克替尼和吉非替尼一线治疗晚期非小细胞肺癌患者的疗效观察〔J〕.湖南师范大学学报(医学版),2015,12(6):94-97.

[4] Osarogiagbon RU,Lin CC,Smeltzer MP,et al.Prevalence,prognostic implications,and survival modulators of incompletely resected non-small cell lung cancer in the US National Cancer Data Base〔J〕.J Thorac Oncol,2016,11(1):e5-e16.

[5] Pilyugin M,lrminger Finger I.Long non-coding RNA and micro-RNAs might act in Regulating the expression of BARDl mRNAs〔J〕.Int J Biochem Cell Biol,2014,54(12):356-367.

[6] Hi XS,Li J,Yang RH,et al.Correlation of increased MALATlexpressionwithpathologicalfeatures andprognosisin cancer patients：a meta analysis〔J〕.Genet Mol Res,2015,14(4):18808-18819.

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[8] Verdecchia A,Francisci S,Brenner H,et al.EUROCARE 4Working Group.Recent cancer survival in Europe:a 2000-02 period analysis of EUROCARE 4 data〔J〕.Lancet Oncol,2007,8(9):784-796.

[9] 周 鹏,张晗婕,刘向华.长链非编码RNA:非小细胞肺癌研究的一个新领域?〔J〕.临床肿瘤学杂志,2015,20(3):266-270.

[10] 张泽雨,易升明,张 岩.长链非编码RNA HOTAIR在非小细胞肺癌中的表达及意义〔J〕.临床肺科杂志,2015,20(1):102-105.

(编辑：吴小红)

The Predicting Effect of Long Chain Non-coding RNA MALAT1 on Tumor Recurrence and Patient’s Prognosis for Non-small Cell Lung Cancer

PENGZhuo,NIUZequn,WANLin,etal.SecondAffiliatedHospitalofXi'anJiaoTongUniversity,Xi'an,710004

Objective To investigate the relationship of long chain non-encoding RNA in the patients with non-small cell lung cancer.Methods 60 cases of primary NSCLC patients accepted were selected,and tumor tissues and the corresponding paracarcinoma tissues were collected.The expression of MALAT1 in tissues from these patients was determined by quantitative real-time poly merase chain reaction.The correlation between MALAT1 expression and the recurrence of NSCLC and overall survival prognosis after surgery were analyzed.Results MALAT1 expression in NSCLC was up-regulated,and it was also up-regulated in patients with NSCLC recurrence.Compared with the MALAT1 expression in corresponding paracarcinoma tissues,the MALAT1 expression was obviously higher in NSCLC tissues.The expression of MALAT1 was not significantly correlated with age,tumor diameter,tumor number,tumor TNM stage,vascular invasion,pathological differentiation and preoperative AFP content.Cox regression analysis showed that tumor diameter greater than 5 cm,multiple tumor vascular invasion,AFP content which was more than or equal to 400 μg/L,and higher expression of MAIAT1 were the main risk factors affecting recurrence and overall survival of NSCIC patients after surgery(P<0.05).Conclusion The up-expression of MALAT1 in NSCLC could be a promising biomarker to predict the tumor recurrence and prognosis of patients with NSCIC,and it could be used for providing a evidence of the recurrence and prognosis of patients with NSCIC,and a basis for clinical diagnosis and treatment.

Long chain non-coding RNA;Non-small cell lung cancer;Recurrence;Prognosis

710004 西安交通大学第二附属医院

杨拴盈

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.07.004

R734.2

A

1001-5930(2017)07-1056-03

2017-02-22

2017-04-20)