MIF基因多态性与幽门螺杆菌感染及非贲门胃癌关系的研究

曹梦姣， 刘 琳， 李慧艳， 党 彤， 贾彦彬，3

包头医学院第二附属医院 1.内蒙古消化病研究所； 2.病理科； 3.病原生物学教研室，包头医学院基础医学与法医学院，内蒙古 包头 014030



MIF基因多态性与幽门螺杆菌感染及非贲门胃癌关系的研究

曹梦姣1， 刘 琳1， 李慧艳2， 党 彤1， 贾彦彬1，3

包头医学院第二附属医院 1.内蒙古消化病研究所； 2.病理科； 3.病原生物学教研室，包头医学院基础医学与法医学院，内蒙古 包头 014030

目的 在包头地区汉族人群中，探讨巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor，MIF)基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)rs755622与幽门螺杆菌(H.pylori)感染及非贲门胃癌发病风险的关系。方法 采用TaqMan方法在288例非贲门胃癌患者和281名正常对照中进行基因分型，并用Logistic回归分析MIF rs755622与非贲门胃癌发病风险的关系。在281名正常对照中，使用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测H.pylori的感染情况，并用Logistic回归分析MIF rs755622的等位基因、基因型与H.pylori感染的关系。结果 SNP rs755622与非贲门胃癌的发病风险及H.pylori感染无相关性。结论 SNP rs755622可能在H.pylori感染及非贲门胃癌的发病中不起主要作用。

巨噬细胞移动抑制因子；单核苷酸多态性；非贲门胃癌；幽门螺杆菌；发病风险

2015年世界卫生组织指出：胃癌在全球由于肿瘤引起的死亡中排第3位[1]。2008年世界卫生组织虽然报告称全世界胃癌发病率在下降，但中国的胃癌发病率仍在上升。胃癌的发生是一个多因素、多步骤进行性发展的过程，值得指出的是：环境因素、幽门螺杆菌(H.pylori)感染及遗传因素在其中的作用不可忽视。尤其是H.pylori感染，与胃癌的关系不容小觑[2]。早期胃癌大多无明显症状，或仅有一些非特异性消化道症状，住院的胃癌患者中，多数已经进展到中晚期，5年生存率不到20%。近年来，许多研究报道宿主的遗传多态性与H.pylori感染及胃癌的发病风险相关，然而，这些报道结果并不完全一致[3]。

巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor，MIF)是由活化T淋巴细胞分泌，并可抑制单核巨噬细胞移动的细胞因子，MIF能抑制巨噬细胞移动和促进迟发型过敏反应发生中巨噬细胞的聚集，在免疫反应和炎症反应中起重要作用[4]。而近年来研究表明MIF在多种肿瘤，如肺癌、乳腺癌、前列腺癌等高表达，促进肿瘤生长和诱导肿瘤血管的形成，使肿瘤的侵袭及转移力增强，影响肿瘤分化程度及预后[5]。

基因多态性是指在基因组水平上由单个核苷酸的差异所引起的DNA序列的多样性，是人类可遗传的变异中最常见的一种。基因多态性在人类基因组中普遍存在，它是决定个体对疾病的易感性、疾病临床表现、疾病分期的多样性及不同个体对药物反应差异性的重要因素之一。MIF基因位于22q11.2，单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)rs755622位于5’非翻译区(5’UTG)，是一潜在的功能位点。研究[6-7]显示，rs755622可能与一些疾病，如前列腺癌、结肠癌、白血病等发病风险有关。然而，关于这一多态位点与胃癌的关系目前还未见报道。所以，我们在包头地区汉族人群检测了MIF rs755622与非贲门胃癌及H.pylori感染的关系，为临床及科研提供详确、可靠的实验数据和理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2008年9月-2010年6月包头市肿瘤医院经组织病理学诊断为非贲门胃癌的患者288例，男224例，女64例，年龄(59.48±11.23)岁(26～83岁)；正常对照来自包头医学院第一附属医院同期正常体检者，均无癌症病史和慢性胃病史，未接受过H.pylori根除治疗，共281名，男220名，女61名，年龄(59.10±11.57)岁(26～85岁)。所有样本均为汉族。病例和对照在性别和年龄分布方面比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1H.pylori感染检测：采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测样本血清抗H.pylori抗体(试剂盒购自芬兰BIOHIT公司，批号：09HE1001)，血清抗H.pylori的抗体滴度≥30 EIU为阳性，表示有H.pylori感染。

1.2.2 基因分型：采用酚/氯仿抽提核酸的方法提取外周血白细胞中的DNA。用TaqMan法进行基因分型，操作按照生产厂商的说明进行(Applied Biosystems，Foster City，CA，USA)。基因分型在北京诺赛基因组有限公司完成。

1.3 统计学分析 采用SPSS 17.0统计软件进行数据分析。用χ2检验检测基因型分布在健康对照中是否符合Hardy-Weinberg平衡；并用χ2检验检测rs755622的等位基因和基因型分布在病例组和对照组中的差异。在正常对照中，用χ2检验检测rs755622的等位基因和基因型在H.pylori感染阳性与阴性人群中的分布差异。用非条件性Logistic回归计算OR及95%CI评估等位基因、基因型与H.pylori感染、非贲门胃癌发病风险的关系，OR值调整了性别和年龄因素的影响。

2 结果

2.1 rs755622与H.pylori感染的关系 在正常对照中，H.pylori阳性组120名，阴性组153名，另外8名基因分型失败未参与研究。MIF rs755622基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡。其等位基因和基因型分布频率在H.pylori感染的阳性组和阴性组相比，差异无统计学意义(P>0.05)，MIF rs755622与H.pylori感染风险无相关性(P>0.05)(见表1)。

表1 rs755622与H.pylori感染的关系

Tab 1 Correlation of rs755622 withH.pyloriinfection

阳性组[n(%)]a阴性组[n(%)]aχ2值P值OR(95%CI)b基因型 CC82(68．33)90(58．82)4．74900．09311 CG28(23．33)54(35．29)0．57(0．33～0．99) GG10(8．33)9(5．88)1．22(0．47～3．15)等位基因 C192(80．00)234(76．47)0．97710．32291 G48(20．00)72(23．53)0．83(0．54～1．23)

注：a：正常对照中有8个样本基因分型失败；b：OR调整了年龄和性别因素。

2.2 MIF基因多态性rs755622与非贲门胃癌发病风险的关系 MIF rs755622等位基因和基因型分布在非贲门胃癌病例组和正常对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)，MIF rs755622与非贲门胃癌的发病风险无相关性(P>0.05)(见表2)。

3 讨论

人类MIF基因定位于染色体22ql1.2。研究[8]表明，MIF在多种癌症包括食管癌、结肠癌、胰腺癌、肝癌、乳腺癌等组织中高度表达，与肿瘤生成、治疗效果及预后高度相关。研究显示：通过免疫组化方法检测食管鳞状细胞癌中MIF表达情况，发现MIF在食管鳞状细胞癌中表达显著增加，并与肿瘤的临床分期、分化程度、淋巴结转移程度密切相关。还有学者发现MIF在大肠癌及胰腺癌中均高度表达[9-10]。有学者通过免疫组化的方法检测MIF在胃癌及癌旁组织中的表达情况，并对胃癌的发展、分化程度、淋巴结转移、临床分期及预后等关系做了分析，发现MIF在胃癌组织中阳性表达率高于癌旁正常组织的阳性表达率，侵及浆膜及浆膜外的表达高于侵及黏膜层及肌层的表达，低分化癌病例的表达高于中高分化型，淋巴转移阳性的病例高于淋巴转移阴性的病例[11]。还有学者对H.pylori阳性萎缩性胃炎组织及胃癌组织中MIF的表达进行了研究，发现MIF在以上两种组织中均高度表达[12]。提示MIF是研究个体对胃癌易感性的重要候选基因之一。然而，到目前为止，还未见有关MIF基因多态性与胃癌关系的研究报道。

表2 rs755622与非贲门胃癌发病风险的关系

Tab 2 Correlation of rs755622 with risk of cardia gastric cancer

病例组[n(%)]a对照组[n(%)]bχ2值P值OR(95%CI)c基因型 CC163(56．99)172(63．00)4．51620．10451 CG109(38．11)82(30．04)1．41(0．98～2．01) GG14(4．90)19(6．96)0．78(0．38～1．61)等位基因 C435(76．05)426(78．02)0．61430．43321 G137(23．95)120(21．98)1．12(0．85～1．48)

注：a：病例组中有2个样本基因分型失败；b：对照组中有8个样本基因分型失败；c：OR调整了性别和年龄因素。

由于贲门癌从病理特征、遗传易感性及病因方面都与食管癌相近，与非贲门胃癌在遗传易感性上有很大差别。因此，在本研究中，为了保证病例样本的均质性，避免出现结果偏倚，我们将所有病例限定在非贲门胃癌患者。我们的研究结果显示：在包头地区汉族人群中，SNP rs755622与H.pylori感染、非贲门胃癌发病风险无关。

人类MIF基因定位于染色体22ql1.2。MIF rs755622单核苷酸位点位于启动子区的5′非翻译区(5′UTG)，是MIF基因主要的功能性多态位点。有学者对MIF整个5′侧翼区的基因进行探究，发现MIF基因rs755622位点位于启动子区，其单核苷酸多态性与MIF启动子功能相关。MIF rs755622基因多态性以一种细胞类型依赖的方式影响启动子活性[13]。并且，已有研究报道了此基因位点多态性与不同类型肿瘤、疾病的关系，有学者对我国台湾地区结肠癌与MIF基因多态性进行了研究，发现rs755622基因多态性在病例组和对照组之间的频率分布有显著差异，与结肠癌的分期、分化也显著相关[6]。还有学者对MIF基因多态性rs755622与急性髓性白血病(AML)之间的关系进行研究，结果提示：AML患者GC基因型明显高于健康对照人群，GC和CC基因型可能是AML的诱发因素[7]。然而我们的研究显示MIF rs755622基因多态性与非贲门胃癌的发病风险无关。关于他们之间的确切关系还需进一步研究确定。

有学者对颈动脉内-中膜厚度(IMT)彩超的患者进行分析，发现IMT增厚患者中H.pylori感染与血清MIF水平呈正相关。他们认为MIF是来源于各种炎症反应后，同时也可以诱导多种炎症因子的产生，而H.pylori感染是一种炎性感染，刺激机体不断生成各种炎症因子，他们之间相互作用并恶性循环下去[14]。还有对感染H.pylori-L型患者胃黏膜细胞进行研究，由于H.pylori-L型菌壁蛋白CagA的刺激，MIF的分泌增加。H.pylori感染阳性患者MIF在巨噬细胞、上皮细胞和T细胞中的表达明显高于H.pylori感染阴性患者，提示H.pylori感染可能与MIF共同促进了胃癌的发生、发展，其机制可能为胃癌组织被H.pylori入侵后，大批单核巨噬细胞集结释放MIF，同一时间H.pylori入侵可直接激发胃上皮肿瘤细胞分泌MIF，而MIF的释放引起炎症反应激活T细胞和巨噬细胞又释放大量的MIF，如此循环则导致肿瘤进一步恶化[15]。关于MIF基因多态性(rs755622)与H.pylori感染的关系目前未见报道，因此我们的研究结果还需进一步研究证实。

我们的研究有一些不足之处，首先：对照组来自医院的体检人群，这有可能导致样本的选择偏倚。其次：研究样本量偏小，不足以检测到rs755622在H.pylori感染、非贲门胃癌发病风险中的微小效应。

总之，我们的结果表明MIF rs755622与非贲门胃癌的发病风险及H.pylori感染风险无关，但仍需加大样本量，选择不同地区和人群进行深入研究，以此阐述MIF rs755622与非贲门胃癌及H.pylori感染的确切关系。

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(责任编辑：李 健)

《胃肠病学和肝病学杂志》编辑部成员

段芳龄 李建生 王全楚 马 军 陈香宇
李 健 王豪勋 张艳丽 范凯丽 杨 林
冉孟娟

The relationship of single nucleotide polymorphism in MIF gene with non-cardia gastric cancer and Helicobacter pylori infection

CAO Mengjiao1, LIU Lin1, LI Huiyan2, DANG Tong1, JIA Yanbin1,3

1.Inner Mongolia Institute of Digestive Diseases; 2.Department of Pathology, the Second Affiliated Hospital of Baotou Medical College; 3.Department of Pathogenic Biology, School of Basic Medicine and Forensic Medicine, Baotou Medical College, Baotou 014030, China

Objective To investigate the roles of single nucleotide polymorphism (SNP) rs755622 in the macrophage migration inhibitory factor (MIF) gene in Helicobacter pylori (H.pylori) infection and non-cardia gastric cancer in Baotou Han population. Methods MIF rs755622 was genotyped by TaqMan method among 288 patients with non-cardia gastric cancer and 281 normal controls. The relationship between rs755622 and the risk of non-cardia gastric cancer was analyzed by Logistic regression. Among 281 normal controls,H.pyloriinfection was detected by ELISA method, and Logistic regression was used to estimate the associations ofH.pyloriinfection with rs755622 alleles or genotypes. Results SNP rs755622 was not associated with the risk of non-cardia gastric cancer andH.pyloriinfection. Conclusion SNP rs755622 may not play an important role in the risk of non-cardia gastric cancer andH.pyloriinfection.

Macrophage migration inhibitory factor; Single nucleotide polymorphism; Non-cardia gastric cancer; Helicobacter pylori; Risk

10.3969/j.issn.1006-5709.2017.06.018

党彤，E-mail：dtong999@sina.com；贾彦彬，E-mail：jyb690318@hotmail.com

R735.2

A

1006-5709(2017)06-0693-04

2017-02-11