HPLC法同时测定葡萄酒中五种添加剂含量的研究

赵春生 王爱军 马发杨（西北民族大学化工学院，甘肃 兰州 730030）

HPLC法同时测定葡萄酒中五种添加剂含量的研究

赵春生 王爱军 马发杨（西北民族大学化工学院，甘肃 兰州 730030）

葡萄酒是用新鲜的葡萄或葡萄汁经完全或部分发酵酿成的酒精饮料，《本草纲目》记载葡萄酒暖腰肾驻颜色。具有滋补、抗衰老、助消化、杀菌、利尿等多种功效[1]。一般酿造葡萄酒不允许使用防腐剂、甜味剂、合成着色剂等食品添加剂，而国标中测定食品添加剂的方法分门而立，不同种类的食品添加剂同时检测的标准方法尚未给出[2-3]。本文参照相关文献，结合前期研究，采用高效液相色谱法测定葡萄酒中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜、脱氢乙酸含量，方法简便、快速、准确，为提升其质量标准提供了科学依据。

1 材料与方法

1.1 主要仪器与试剂

Thermo U-3000高效液相色谱仪(配置真空在线脱气、自动进样器、光电二极管阵列检测器(DAD)、四元泵、色谱工作站)，Mettler Toledo电子分析天平、SK8210LHC数控超声波清洗仪(上海科导超声仪器有限公司)。

对照品苯甲酸、山梨酸、安赛蜜、糖精钠、脱氢乙酸均购自Dr.Ehrenstorfer,供含量测定用。甲醇(色谱级，霍尼韦尔国际公司)，乙酸铵(色谱级，西格玛)，水为超纯水，葡萄酒。

1.2 色谱条件

采用Venusil MP色谱柱(C18，5μm，4.6×250mm)，柱温为35℃[7]，流动相为甲醇(A)—0.02mol/L乙酸铵(B)梯度洗脱(0-5min，5%A；5-10min，5%-10%A；10-15min，10%-15%A；15-20min，15%-5%A)[4]，流速1.0mL/mL，检测波长分别为230nm(苯甲酸、山梨酸、糖精钠)，214nm(安赛蜜)，293nm(脱氢乙酸)。

1.3 标准溶液的制备

1.3.1 对照品混合溶液

精密称取苯甲酸、山梨酸、安赛蜜、糖精钠、脱氢乙酸的对照品适量，加入甲醇∶水（5∶95）的溶剂溶解，制成浓度为1.0μg/ mL的对照品混合溶液[5]。

1.3.2 供试品溶液

取样品适量于50mL离心管中，置80℃水浴锅中蒸去酒精，用水定容至25mL，混匀，用孔径为0.45μm滤膜过滤[6-7]。弃去初滤液，取续滤液于液相小瓶中，即得。

2 结果与讨论

2.1 精密度实验

取同一对照品混合溶液，按1.2项下色谱条件连续自动进样10μL共5次，记录色谱图，结果苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜、脱氢乙酸峰面积的RSD分别为0.51%、0.26%、0.86%、0.36%、1.01%。(见表1-表3)

2.2 线性关系考察

取对照品混合溶液，按1.2项下色谱条件，分别自定进样2、4、6、8、10、12、14μL，记录色谱图。分别以峰面积Y为纵坐标，进样量X为横坐标，进行线性回归分析，结果苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜、脱氢乙酸进样量分别在0.01-2、0.04-2.14、0.08-1.20、0.04-2.45、0.1-1.98μg范围内线性关系良好，回归方程分别为Y=2.66X-0.032，r=0.9996；Y=3.62X-0.028，r=0.9999； Y=4.15X-0.012，r=0.9992；Y=3.06X-0.048，r=0.9995；Y=4.12X-0.0061，r=0.9999。

2.3 加对照品回收试验

精密称取同一批号已测知含量的供试品9份，每份约10g，分别加入对照品苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜、脱氢乙酸，加入量分别为S1、S2、S3、S4、S5按1.3项下方法制备供试液，按1.2项下色谱条件，分别进样10μL，记录峰面积，计算测得供试品的量分别为X1、X2、X3、X4、X5，得到回收率分别为H1、H2、H3、H4、H5，结果见表1。

2.4 稳定性试验

取制备好的同一样品的供试品溶液，室温下放置，按1.2项下色谱条件，分别于制备后0、2、4、6、8、16、24h进样10μL进行分析，记录色谱图，结果苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜、脱氢乙酸峰面积的RSD分别为1.3%、0.96%、1.11%、0.45%、2.83%，表明供试品溶液各组分在24h内基本稳定。

2.5 讨论

图1 波长214nm安赛蜜色谱图

图2 波长230nm苯甲酸、山梨酸、糖精钠色谱图

2.5.1 检测波长的选择

为保证各指标成分的测定有较高灵敏度，根据光电二极管阵列检测器上得到的紫外吸收光谱图辅助成分定性和选择各被测组分的检测波长，安赛蜜在214 nm处有最大吸收，苯甲酸、山梨酸、糖精钠在230nm处均有较大吸收，脱氧乙酸在293nm处有最大吸收，故选择检测波长分别为214nm(安赛蜜)，275 nm (苯甲酸、山梨酸、糖精钠)，293nm(脱氧乙酸)。

图3 波长293nm脱氧乙酸色谱图

表1 回收率测定结果

2.5.2 流动相的选择

试验中以甲醇－水、甲醇-0.02mol/L乙酸铵水溶液、乙腈-0.3%三乙胺水溶液和乙腈－0.2%磷酸水溶液等为流动相，采用等度洗脱，各组分均不能完全分离。采用梯度洗脱，以甲醇-水或乙腈-0.3%三乙胺水溶液为流动相时，色谱图基线飘移较大，选择甲醇-0.02mol/L乙酸铵水溶液为流动相，各组分分离好，基线较稳定。

3 结语

本文建立的双波长HPLC同时测定葡萄酒中山梨酸、苯甲酸、安赛蜜、糖精钠、脱氢乙酸5个指标含量测定的方法，分离度高，操作简便，结果准确，重复性好，且在各组分适宜波长处分别测定其含量，大大提高了检测灵敏度，但针对不同基质的适用性仍需进一步研究，为其在食品检测及质量控制提供有力依据。

[1]赵任军.葡萄酒的功能与营销[J].中外葡萄与葡萄酒，2006，30(5):20.

[2]黄海涛,李雪梅,徐济仓等.同时检测食品添加剂中五种禁限用成分含量的方法[P].中国专利，CN105510470A,2016-04-20.

[3]曾文革,罗燕.欧盟食品添加剂使用的法律规制及其启示[J]山东科技大学学报(社会科学版).2015，25(2)，6～8.

[4]高晓宇.食品添加剂应用问题及其对策研究[D].太原:太原科技大学.2014.

[5]易智勇,黄忆明,朱明元.食品添加剂的不合理使用现状及对策[J].中国卫生监督杂志.2008，17(5)，10～12.

[6]霍光.食品添加剂的作用与安全性控制[J].食品安全导刊.2016，2(2)，4～6.

[7]H W Sun,F CWang,L F Ai.Simultaneous determination of seven nitroimidazole residues in meat by using HPLC-UV detec⁃tionwith solid-phase extraction.JournalofChromatography.2007.

Simultaneous Determination of Five Kinds of Additives in Wine by HPLC

Zhao Chunsheng W ang Aijun Ma fayang（College of Chem ical Engineering,Northw est University for Nationalities,Lanzhou 730030,China）

使用HPLC法建立了一种专属、灵敏的同时测定葡萄酒中苯甲酸、山梨酸、安赛蜜、糖精钠、脱氢乙酸含量。采用Venusil MP—C18色谱柱，流动相为甲醇(A)，0.02mol/L乙酸铵(B)，流速为1.0m L/m in，柱温为室温。实验结果表明：苯甲酸、山梨酸、安赛蜜、糖精钠、脱氢乙酸进样量在0.08-2.0μg（r=0.9996）、0.075-2.5μg（r=0.9999）、0.02-3.0μg（r=0.9992）、0.12-2.3μg（r=0.9995）、0.32-1.8μg（r=0.9999）范围内线性关系良好；平均加样回收率分别为97.0%、91.4%、95.0%、98.9%、96.9%，RSD分别为0.51%、0.26%、0.86%、0.36%、1.01%。

葡萄酒；苯甲酸；山梨酸；糖精钠；安赛蜜；脱氢乙酸；高效液相色谱

To develop an HPLCmethod ofexclusive、sensitive for simultaneousdetermination ofbenzoic acid、sobic acid、acesulfame、sodium saccharin and dehydroacetic acid in w ine.Themobile phase consisted ofmethanol(A),0.02mol/L ammonium acetate(B)and the flow ratewas1.0m L/m in.The column temperaturewas room temperature.Results:the injection volume ofbenzoic acid,sorbic acid,ace⁃sulfame,saccharin sodium and dehydroacetic acid were0.08-2.0μg（r=0.9996）、0.075-2.5μg（r=0.9999）、0.02-3.0μg（r=0.9992）、0.12-2.3μg（r=0.9995）、0.32-1.8μg（r=0.9999）good linear relationship,The average recoverieswere 97.0%,91.4%,95.0%,98.9%and 96.9%, respectively,RSD were 0.51%,0.26%,0.86%,0.36%and 1.01%.

w ine;benzoic acid;sorbic acid;saccharin sodium;acesulfame;dehydroa-cetic acid;HPLC.

西北民族大学本科生科研创新资助项目（URIP16048）

赵春生（1996-），男，本科，研究方向：精细化工