妇月康胶囊薄层色谱鉴别方法研究

邓银爱 杨泽锐 王慧玲 彭丽华 成金乐*

妇月康胶囊薄层色谱鉴别方法研究

邓银爱1，2，3杨泽锐1，2，3王慧玲2，3彭丽华2，3成金乐2，3*

（1广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心，岭南中药资源教育部重点实验室，广州510006；2国家中医药管理局中药破壁饮片技术与应用重点研究室，中山528437；3中山市中智药业集团有限公司，中山528437）

目的改进妇月康胶囊的薄层鉴别方法。方法使用石油醚代替原检测标准中提取及展开剂所使用的有毒试剂苯，对妇月康胶囊中的阿魏酸进行薄层色谱鉴别。结果所有妇月康胶囊样品均能检测出阿魏酸对照品特征性斑点，斑点清晰，易于检测。结论改进后的方法操作简便、安全、专属性强，可用于新的妇月康胶囊薄层鉴别标准的制定。

妇月康胶囊；阿魏酸；薄层鉴别；恶露不停

妇月康胶囊由当归、川芎、益母草、红花、桃仁、徐长卿等8味中药组成，具有活血、祛瘀、止痛等功效，用于产后恶露不停，少腹疼痛，也可用于上节育环后引起的阴道流血、月经过多，具有较好的临床疗效[1-3]。阿魏酸为妇月康胶囊中君药当归、川芎、益母草的主要有效成份之一[4-6]，现行妇月康胶囊质量标准中阿魏酸的薄层鉴别中供试品制备以及展开剂中均使用了剧毒化学物质苯或氯仿[7]，对检测人员的人身及环境危害很大，急需改进。为准确、有效地控制妇月康胶囊质量的同时减少对检测人员的伤害及环境的污染，本试验进行了妇月康胶囊中阿魏酸鉴别无苯供试品制备方法和展开剂系统的研究，现将结果报道如下。

1 仪器与试药

薄层成像系统（CAMAG）；电子天平（METTLER TOLEDO）；KQ-700DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；双槽展开缸（上海信宜仪器厂有限公司）。

阿魏酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号110773-201313，纯度大于98%）；硅胶G铝箔片基板200 mm×200 mm（浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂）；硅胶GF254铝箔片基板200mm×200 mm（Merck KGaA，Darmstadt，Germany）；硅胶G玻璃板100mm× 100 mm（青岛海洋化工厂分厂）；所用试剂均为分析纯。

妇月康胶囊（批号:20140201、20140501、20140601、20160201、20160202、20160203、20160204、20160205、20160206、20160207，妇月康胶囊阴性样品20160111（缺川芎、当归、益母草），均由中山市恒生药业有限公司提供。

2 方法与结果

2.1 原标准方法

2.1.1 供试品溶液的制备称取妇月康胶囊内容物3 g，研细，加50 ml乙醇，超声1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水50 ml，加热使溶解，放冷，乙醚萃取3次，每次20 ml，合并乙醚液，加2%Na2CO3溶液震荡提取3次，每次20 ml，得Na2CO3溶液，加乙酸乙酯洗3次，每次15 ml，得碱液，加HCL酸化至pH2-3，再用苯洗涤3次，每次15 ml，弃去苯液，继续用乙醚提取三次，每次20 ml，合并醚液，挥干，残渣加甲醇1 ml溶解。

2.1.2 对照品溶液的制备阿魏酸对照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.1.3 薄层层析照薄层色谱法（《中国药典》2010版一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液15 μl和对照品溶液5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯∶三氯甲烷∶甲醇∶冰醋酸（3∶2∶0.6∶0.1），为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光（365nm）下检视（见图1），由图可知，供试品色谱在与对照品色谱相对应的位置上，虽显相同颜色的荧光斑点，但是Rf值偏高（约0.86）。

图1 原标准薄层色谱图

2.2 改进后方法

2.2.1 供试品溶液的制备称取妇月康胶囊内容物3 g，研细，加50 ml乙醇，超声1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水50 ml，加热使溶解，放冷，乙醚萃取3次，每次20 ml，合并乙醚液，加2%Na2CO3溶液震荡提取3次，每次20 ml，得Na2CO3溶液，加乙酸乙酯洗3次，每次15 ml，得碱液，加HCL酸化至pH2-3，再用石油醚洗涤3次，每次15 ml，弃去石油醚液，继续用乙醚提取3次，每次20 ml，合并醚液，挥干，残渣加甲醇1 ml溶解。

2.2.2 对照品溶液的制备取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.3 薄层层析照薄层色谱法（《中国药典》2010版一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液15 μl和对照品溶液5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60~90℃）：二氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲酸（8∶3∶3∶0.4），为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光（365 nm）下检视（见图2），由图可知，供试品色谱中，在与对照品色谱相对应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，且Rf值适中（约0.48），斑点较清晰。

2.2.4 方法学考察

2.2.4.1 专属性考察由图3可知，供试品色谱中，在与对照品色谱相对应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；缺川芎、当归、益母草阴性对照品供试品色谱中，在与对照品色谱相对应的位置上，不显相同颜色的荧光斑点，因此该方法专属性好，阴性无干扰。见图3。

图3 专属性考察

2.2.4.2 耐用性考察（1）不同薄层板考察。选取台州硅胶G预制铝箔板、默克硅胶GF254预制铝箔板、青岛硅胶G预制玻璃板分别按拟定的试验方法试验，结果表明，上述不同硅胶板均能达到鉴别的要求，而由于玻璃板展开时间较长，默克板价格较昂贵，综合考虑选择台州硅胶G预制铝箔板进行后续考察。见图4。

图4 不同薄层板考察

（2）不同湿度考察。取点样后的薄层板，分别置于32%和72%的湿度中展开，结果表明此方法在不同湿度下均有较好的展开效果。见图5。

图5 不同湿度考察

（3）不同温度考察。取点样后的薄层板，分别置于冰箱（2~8℃）和室温（10~30℃）的温度中展开，结果显示在不同温度下均有较好的展开效果，说明本方法对一定温度的变动具有耐用性。见图6。

图6 不同温度考察

（4）不同点样量。分别取供试品溶液5 μl、10 μl、15 μl，对照品溶液及阴性对照溶液按原标准规定内容取5 μl进行点样，进行考察。结果显示供试品在与对照品色谱相同位置上均有相同颜色的斑点，说明本方法对点样量的小变动具有耐用性。见图7。

图7 不同点样量考察

（5）不同点样方式。取供试品溶液分别按圆点状、条带状两种点样方式进行点样，结果显示，两种点样方法均有较好的展开效果，表明此方法使用不同点样方式均有较好的展开效果，但带状点样效果更佳。见图8。

图8 不同点样方式考察

2.2.4.3 重复性考察取10个不同批次妇月康胶囊，按照

2.2.1 项下供试品制备方法同时制备10份供试品，在室温下按2.2.3项下色谱条件展开，结果显示供试品色谱中，均显阿魏酸对照品的特征斑点，且阴性无干扰。表明此方法重现性好，见图9。

图9 重复性考察

3 讨论

3.1 供试品溶液制备方法考察原标准供试品溶液的制备方法较为复杂，本研究比较8个简化方法的处理效果，发现简化的供试品溶液处理会使阿魏酸成分鉴别存在干扰，分离度不好。因此，选择了只替换萃取溶剂而操作相同的制备方法作为最终供试品溶液的制备方法。

3.2 展开剂展开效果考察考察了11种展开剂展开效果的差异。展开剂分别为：正庚烷-乙酸乙酯-冰醋酸（6∶3∶1）、正庚烷-乙酸乙酯-冰醋酸（2∶1∶0.5）、正庚烷-异丙醇-甲酸（1∶1∶0.1）、环己烷-乙酸乙酯-甲酸（1∶1∶0.1）、环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（2∶1∶1∶0.1）正庚烷-乙酸乙酯-甲酸（2∶1∶0.5）；石油醚（60～90℃）:二氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲酸（8∶3∶3∶0.4）等展开剂条件，结果显示正庚烷-乙酸乙酯-甲酸（6∶4∶0.4）、环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（2∶1∶1∶0.1）、石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-甲酸（6∶4∶0.4）、石油醚（60～90℃）∶二氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲酸（8∶3∶3∶0.4）。结果表明：均能获得较好的展开效果，各指标成分的斑点分离清晰，而以石油醚（60～90℃）∶二氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲酸（8∶3∶3∶0.4）分离效果最佳。

4 小结

原标准中，展开剂系统含有苯和氯仿，供试品制备方法含有苯，对检测人员的危害大。改进的方法采用了毒性较低的石油醚（60~90℃）∶二氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲酸展开系统替代标准中剧毒展开系统苯∶三氯甲烷∶甲醇∶冰醋酸，用石油醚洗涤代替供试品制备方法中的苯洗涤。本研究建立的新方法在保证检测结果准确、可靠的同时可减少对检测人员的伤害及环境的污染。建议对妇月康胶囊中阿魏酸的薄层色谱鉴别按本研究所建立的方法进行修订。

Study on TLC Identification for Fuyuekang Capsule

DENG Yinai1,2,3,YANG Zerui1,2,3,WANG Huiling2,3,PENG Lihua2,3,CHENG Jinle2,3*
(1.Research Center of Chinese Medicinal Resource Science and Engineering,Guangzhou University of Chinese Medicine,Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Resources of Ministry of Education of South of the Five Ridges,Guangzhou 510006,China; 2.Key Laboratory of Cell-Broken Decoction Pieces Technology and Application of State Administration of Traditional Chinese Medicine, Guangdong Province,Zhongshan 528437,China; 3.Zhongzhi Pharmaceutical Limited Company,Zhongshan,Guangdong Province,Zhongshan 528437,China)

Objective To improve identification method of Fuyuekang capsule by thin layer chromatography(TLC).Methods Petroleum ether was taken to replace benzene used in the original test standard extraction and development agent.Results The distinct Ferulic acid characteristic spots were easily to be detected in all Fuyuekang capsule samples by using the new method.Conclusion This improved method was simple and safe,has strong specificity,and it could be used as the new identification method of Fuyuekang capsule.

Fuyuekang capsule;Ferulic acid;thin layer chromatography;prolonged lochiorrhea

10.3969/j.issn.1672-2779.2017.12.063

1672-2779（2017）-12-0139-04

*通讯作者：gdcjl9@126.com