肝益复胶囊治疗肝损伤的实验研究※

黄文华 陈文 李秀英 马龙川

肝益复胶囊治疗肝损伤的实验研究※

黄文华 陈文 李秀英 马龙川

（江西中医药高等专科学校药学系，抚州344000）

目的研究肝益复胶囊对D-氨基半乳糖急性肝损伤小鼠和四氯化碳慢性肝损伤大鼠的保肝作用。方法以腹腔注射D-氨基半乳糖复制小鼠急性肝损伤模型、皮下注射CCl4复制大鼠慢性肝损伤模型。以血清谷丙转氨酶(ALT)，谷草转氨酶(AST)，肝组织超氧化物歧化酶（SOD），谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）含量、肝羟脯氨酸(Hyp)、肝组织病理学检查等为指标，观察肝益复胶囊的抗肝损伤作用。结果肝益复胶囊对D-氨基半乳糖造成的急性肝损伤小鼠ALT，AST活性升高有显著的降低作用。肝益复胶囊可显著降低CCl4慢性肝损伤大鼠ALT，AST活性，升高肝组织SOD、GSH水平，降低MDA、Hyp水平。结论肝益复胶囊对D-氨基半乳糖急性肝损伤小鼠和四氯化碳慢性肝损伤大鼠均有显著的保肝作用。

肝益复胶囊；肝损伤；实验研究

肝损伤是由病毒、酒精、理化等多因素导致的临床常见的危害人类健康的疾病。肝益复胶囊是本课题组筛选临床经验方并结合现代中药药理研究设计研制的保肝制剂。

1 材料与方法

1.1 动物昆明种小鼠，体重（20±2）g，雌雄兼用；SD大鼠，体重（210±30）g，雌雄兼用，以上实验动物均购自南昌大学医学院实验动物科学部，合格证号：02196-02。

1.2 受试药物肝益复胶囊，以下简称GYF胶囊，由本校制剂室制备，由叶下珠、白芍、黄芪、丹参、三七、虎刺、茯苓、甘草等药物成分组成，给药剂量(按生药计）大鼠低、中、高剂量组依次为1.5 g/kg、3.0 g/ kg、6.0 g/kg。小鼠低、中、高剂量组依次为2.5 g/kg、5.0 g/kg、10.0 g/kg。

对照药物：联苯双酯，北京协和药厂生产，规格1.5 gm×500粒/瓶，生产批号：14090103批准文号：国药准字H11020980给药剂量大鼠为50 mg/kg，小鼠为80 mg/kg。

1.3 试剂超氧化物歧化酶试剂盒、谷胱甘肽试剂盒、丙二醛试剂盒、羟脯氨酸试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所。四氯化碳：天津市化学试剂一厂，D-氨基半乳糖：Sigma公司。

1.4 研究方法

1.4.1 GYF胶囊对D-氨基半乳糖致小鼠急性肝损伤的影响昆明种小鼠60只，体重（20 g±2）g，雌雄兼用。小鼠购入后适应性饲养3天。随机分成正常对照组、模型组、GYF胶囊低、中、高剂量组、联苯双酯组，每组10只。GYF胶囊低、中、高剂量组分别按2.5 g/kg、5.0 g/kg、10.0 g/k剂量灌胃。联苯双酯组按80 mg/kg灌胃。正常对照组和模型组灌胃等体积生理盐水，1次／d．连续5 d。末次给药后2 h，给予8%的D-氨基半乳糖0.1 ml／10 g，ip，注射后禁食2 h。于注射后40 h，禁食12 h，全部小鼠眼眶取血，置离心机中4000 r/min离心10 min，分离血清，以赖氏法测定血清谷丙转氨酶(ALT)水平、以比色法测定谷草转氨酶(AST)水平。

1.4.2 GYF胶囊对四氯化碳致大鼠慢性肝损伤的影响取SD大鼠60只，雌雄各半，体重160～200 g。大鼠购入后适应性饲养3天。随机分为正常对照组、模型组、GYF胶囊低、中、高剂量组、联苯双酯组，每组10只。除正常对照组外，各组大鼠按体重皮下注射40%CCl4橄榄油溶液3 ml/kg（首次注射剂量为为5 ml/kg），2次/W，共8 W。自造模之日起，GYF胶囊低、中、高剂量组分别按1.5 g/kg、3.0 g/kg、6.0 g/kg剂量灌胃、联苯双酯组按50 mg/kg剂量灌胃，正常对照组和模型组均以等体积生理盐水灌胃，1次/d，连续用药8 W。第8周末，将大鼠颈静脉采血后处死，用全自动生化仪检测肝功能指标ALT、AST、ALB、GLO。，取肝右叶制成组织匀浆，按南京建成生物工程研究所试剂盒方法测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽（GSH）、羟脯氨酸（hyp）含量。取肝左叶固定，按冰冻切片法制作切片，HE染色，光镜下观察肝组织病理学变化。

1.5 统计学方法实验数据用SPSS统计软件分析，数据结果均以平均值±标准差（±s）表示，样本均数总体差异比较用方差分析，组间比较用t检验。

2 结果

2.1 GYF胶囊对D-氨基半乳糖致小鼠急性肝损伤的影响实验结果见表1。与模型组比较*P＜0.05**P＜0.01；与GYF低剂量组比较#P＜0.05，##P＜0.01

表1 GYF胶囊对四氯化碳致急性肝损伤小鼠血清ALT、AST含量的影响（x±s，n=10）

2.2 GYF胶囊对四氯化碳致大鼠慢性肝损伤的影响实验结果见表2、表3。

表2 GYF胶囊对CCl4致慢性肝损伤大鼠血清ALT、AST、ALB、GLO的影响（xs，n=10）

表2 GYF胶囊对CCl4致慢性肝损伤大鼠血清ALT、AST、ALB、GLO的影响（xs，n=10）

组别剂量(g/kg)ALT(U/L)AST(U/L)ALB(g/L)GLO(g/L)正常组34.62±5.4337.46±5.4636.52±3.1723.82±2.43模型组118.65±14.26121.38±15.2424.52±2.2337.26±3.56 GYF胶囊6.052.53±11.58**#63.67±10.92**#31.46±2.98**#25.16±2.93**#3.053.75±8.62**#61.75±9.76**#32.59±3.56**#24.28±2.16**#1.560.64±7.56**71.65±7.48**28.82±2.89*29.17±2.24*联苯双酯0.0564.39±8.32**63.25±8.35**29.86±2.15*28.21±2.93*

与模型组比较*P＜0.05**P＜0.01；与GYF低剂量组比较#P＜0.05##P＜0.01

表3 GYF胶囊对CCl4致慢性肝损伤大鼠肝组织SOD、MDA、GSH、hyp的影响（x±s，n=10）

与模型组比较*P＜0.05**P＜0.01；与GYF低剂量组比较#P＜0.05；与联苯双酯组比较★P＜0.05

2.3 对四氯化碳慢性肝损伤大鼠肝组织病理变化的影响光镜下观察可见模型组大鼠肝细胞呈脂肪变性及点状坏死，肝组织结构紊乱，有炎细胞浸润，汇管区可见纤维细胞增生；GYF胶囊高、低剂量组和联苯双酯组可见炎细胞浸润和纤维细胞增生，但病理程度较模型组明显减轻；GYF胶囊中剂量组汇管区未见纤维细胞增生。

3 讨论

肝益复胶囊由叶下珠、白芍、黄芪、丹参、三七、虎刺、茯苓、甘草等药物成分组成，叶下珠有平肝清热、利水解毒之功效，我国民间用治黄疸、肝炎等症有良好效果[1]。白芍是肝炎及肝硬化中医治疗的重要组方之一，其有效成分白芍总苷可显著降低肝损伤小鼠的血清丙氨酸转氨酶，并能对肝细胞变性和坏死有明显保护作用[2]。黄芪具有清除自由基和稳定肝细胞膜作用．能减少肝细胞坏死，促进肝细胞再生[3]。丹参中主要的水溶性成分—丹参酸乙对原代培养大鼠肝细胞采用体外四氯化碳熏蒸直接造成的肝细胞损伤具有明显的保护作用[4]，三七具有止血、散瘀、消肿、止痛、生肌、增强免疫、强壮、抑制肿瘤等多种功效[5]，甘草为中医调百药之品，甘草通过物理、化学方式的沉淀、吸附与结合来加强肝脏的解毒功能，故具有保肝、抗病毒、抗炎、抗菌等多种活性。本实验表明肝益复胶囊对实验性肝损伤具有明显的保肝作用。

[1]全国中草药汇编编写组编.全国中草药汇编：上册[M].北京：人民卫生出版社，1987.

[2]戴俐明，陈学广，徐叔云.白芍总甙对实验性肝炎的保护作用[J].中国药理学通报，1993，9(6)：449-453.

[3]吴炎，田怡，陈建文.黄芪注射液对肝硬化患者肝功能的影响.中国中西医结合杂志，1999，19(6)：363.

[4]陈岳祥，李石，范列英，等.丹参单体IH764-3抗肝纤维化作用的实验研究[J].中华医学杂志，1998，76（8）：636.

[5]中药药理学[M].沈映君，北京：人民卫生出版社，2011.

Experimental Study on Ganyifu Capsule in the Treatment of Hepatic Injury

HUANG Wenhua,CHEN Wen,LI Xiuying,MA Longchuan
(Pharmacy Department,Jiangxi College of Traditional Chinese Medicine,Jiangxi Province,Fuzhou 344000,China)

Objective To investigate the effec ts of Ganyifu capsule on D-galactosamine acute liver injury mice and carbon tetrachloride chronic liver injury rats.Methods By taking lumbar injection D-galactosamine to build the acute mouse liver injury mode1,injecting hypodermic CCl4 to set up the acute rat liver injury model and chronic rat hepatic injury mode1,Ganyifu capsule was given intragastrically in the treated groups.At the end of test,the concentrations of ALT and AST in serum of mouse,the SOD, GSH,MDA and Hyp in liver homogenate were detected.Liver was for histopathologleal examination.Results For the acute hepatic injury mouse induced by CCl4,Ganyifu capsule can significantly inhibit the elevation of ALT and AST in seram.In the chronic hepatic injury mode1 rats,Ganyifu capsule can significantly bring down the ALT and AST,increase significantly the SOD,GSH,and decrease MDA and Hyp in liver homogenate.Conclusion Ganyifu capsule showed a remarkable protective effect in the treatment of experimental hepatic injury in rats and mice.

Ganyifu capsule;hepatic injury;experimental study

10.3969/j.issn.1672-2779.2017.12.062

1672-2779（2017）-12-0137-02

：李海燕本文校对：王英

2017-04-07）

江西省抚州市科技计划项目【（2014）13号】