比较两种酶联免疫吸附法检测乙肝表面抗原的结果

徐战锋

(濮阳市红十字中心血站，河南 濮阳 457000)

比较两种酶联免疫吸附法检测乙肝表面抗原的结果

徐战锋

(濮阳市红十字中心血站，河南 濮阳 457000)

乙肝表面性抗原；钩状效应；酶联免疫吸附实验

乙型肝炎是目前全球危害性严重的一种病毒性且具有传染性的肝炎，流行性较广。目前，我国是乙型肝炎的高流行区，约有10%～15%的正常人携带有乙型肝炎病毒[1]。乙肝表面抗原(HBsAg)是乙肝病毒在肝细胞内的表达产物，同时也是一种血清标志物，是现在临床上检查乙肝病毒的主要检测指标之一[2]。酶联免疫吸附法是医学检验中检测感染性疾病抗体/抗原的主要方法，具有操作简便、反应迅速、特异性强、重复性高、灵敏度高的优点。血液传播是乙型肝炎最主要的传播途径，因此为了防止血液传播，对于献血者要根据“献血者健康检查要求”进行乙肝表面抗原的筛查。在采用一步法检测的过程中，往往会由于钩状效应使抗原/抗体浓度较高的样本出现假阴性或者漏检的现象，从而增加了乙肝病毒经血液传播的风险[3]。本文通过采用两种酶联免疫吸附法对本血站收集的血液样本中的HBsAg的检测结果进行分析，探讨钩状效应对一步法检测HBsAg的影响，同时分析两种方法的应用价值，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本研究对象是濮阳市红十字中心血站2015年5月～2016年5月采集的1 100份无偿献血者的血液样本。将其作为本次研究的初检实验材料，采用酶联免疫吸附一步法与二步法的试剂盒进行，所有试剂盒均购于北京万泰生物药业；选用全自动加样系统(爱康AE280)进行加样，酶免分析采用全自动酶免系统(HAMILTON)。

1.2 方法

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 两组患者检测情况

在本次检测的过程中，采用酶联免疫吸附一步法进行检测时，结果中有26例样本呈现阳性，阳性率为2.36%；采用酶联免疫吸附二步法检测时有31例样本呈现阳性，阳性率为2.82%，两种方法测得的阳性率结果经统计，差异有统计学意义(P<0.05)，具体数据见表1。

表1 两组患者检测阳性率情况比较(%)

2.2 5份可能存在钩状效应的样本经稀释后一步反应检测结果

表2 5份可能存在钩状效应的样本经稀释后一步反应检测结果

注：OD值表示吸光度值，“+”表示检测结果为阳性，“-”表示检测结果为阴性。

2.3 5份可能存在钩状效应的样本采用两种方法检测结果

采用两种方法检测5份可能存在钩状效应的结果比较，具体数据见表3。

注：OD值表示吸光度值，“+”表示检测结果为阳性，“-”表示检测结果为阴性。

3 讨论

乙型肝炎病毒的主要病原标志物为乙肝病毒的表面抗原，酶联免疫吸附反应的一步法和二步法是检测该病原标志物最常用的方法[4]。目前我国用于乙型肝炎病毒的筛选和普查中的首选方法即为酶联免疫吸附法，尤其对用于血站献血员血液样本的筛查意义重大。酶联免疫吸附一步法检测的优势在于其使用应用方便，操作简单，耗时较短，且经济实惠。但是在检测过程中，由于待检样本和酶标抗体同时存在于检测系统中，当所检样品中抗原/抗体浓度较高时，常常会出现竞争性抑制效应的产生，进而导致目标结合物的浓度大大降低，出现显色降低或者不显色的现象。在一步反应法检测中由于这一限制性因素的存在，往往导致检测结果受到钩状效应的影响，发生假阴性的现象。酶联免疫吸附二步法检测与一步法相比，其主要的优势在于该方法提高了酶联免疫吸附反应的灵敏度，是该反应在检测过程中的检测最低限度达到不超过0.1IU/mL，这样可以减少酶联免疫吸附一步反应中钩状效应对结果的影响[5]。对血站筛查献血员的检测而言，这样可以减少因为假阴性而导致的乙型肝炎病毒经过血液传播的发生；同时对于临床上的诊断检测而言，可以降低因为漏检而出现错诊和误诊的发生。

本文结果证实，在血站对大量样本进行筛查时，采用酶联免疫吸附二步法进行检测乙肝表面抗原/抗体所得结果的准确性要显著高于采用酶联免疫吸附一步法的检测结果(P<0.05)。在采用酶联免疫吸附一步法检测乙肝表面抗原/抗体时需要考虑钩状效应对检测结果产生的影响。在对大量样本进行检测时，为了保证检测结果的准确性，建议选择酶联免疫吸附二步法检测或者对样本进行稀释以消除钩状效应，确保检测结果的准备度和灵敏度。另外，有研究资料显示，在采用酶联免疫吸附检测时，在样品孵育过程中进行适当的振荡也可避免钩状效应的发生，这一观点将在今后的实验中研究。

[1] 伍荣兵. 酶联免疫吸附法检测乙肝五项结果的常见影响因素探讨[J]. 按摩与康复医学，2015(13): 108.

[2] 严 莉，彭宇生，龙 琴，等. 酶联免疫技术在乙型肝炎表面抗原检测中的应用[J]. 国际病毒学杂志，2014, 21(4): 191-193.

[3] 靳四海. 酶联免疫法检测乙肝患者的血清标志物的临床价值分析[J]. 中国处方药，2015, 13(5): 115.

[4] 王 彬. 微粒子酶联免疫分析技术检测乙肝两对半的表现模式分析[J]. 现代医院，2014, 14(3): 60-62.

[5] 张 龙，银广悦，武彩虹，等. 全自动酶联免疫分析仪检测乙肝核心抗体的加样质量控制[J]. 检验医学与临床，2015,12(16): 2342-2343.

本文编辑：王 霞

徐战锋，男，主管技师，从事临床输血检验工作

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1671-0126(2017)02-0032-03