高效液相色谱法测定逍遥丸中柴胡皂苷a、b2的含量

2017-06-07 08:23宿健桃罗晋萍崔宇宏

山西卫生健康职业学院学报 2017年2期

关键词：岛津柴胡皂苷逍遥丸

宿健桃，罗晋萍，崔宇宏

(1.山西广誉远国药有限公司，山西太谷 030800；2.山西省食品药品检验所，山西太原 030001)

·基础医学·

高效液相色谱法测定逍遥丸中柴胡皂苷a、b2的含量

宿健桃1，罗晋萍2，崔宇宏2

(1.山西广誉远国药有限公司，山西太谷 030800；2.山西省食品药品检验所，山西太原 030001)

逍遥丸；HPLC；含量测定；柴胡皂苷a、b2

逍遥丸为中国药典2015年版收载品种。全国有190家生产企业,为常用中成药。柴胡为方中的君药，具有疏肝解郁之功效。中国药典2015年版该品种项下未对柴胡进行定量控制。通过建立高效液相色谱法测定柴胡皂苷a、b2含量，方法准确、可靠、简便，可实现更有效控制其质量。

1 仪器与试药

岛津2010高效液相色谱仪；采用资生堂及岛津C184.6 mm×250 mm,5 μm色谱柱，乙腈为色谱纯,水为纯化水,其他溶剂均为分析纯。逍遥丸(生产批号110601，药都制药集团股份有限公司)。柴胡皂苷a对照品(110777-201108)，购于中国药品生物制品检验所；柴胡皂苷b2对照品(MUST-12041002)，购于北京恒元启天化工技术研究院—北京世纪奥科生物技术有限公司。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

2.2 波长的选择

参考中国药典2010年版[1]柴胡项下，选择210nm为检测波长。柱温：室温；流速：1.0 mL/min。

2.3 提取时间的考察

取同一样品5g(3份), 按照同供试品方法，超声提取时间分别为20、40、60 min，制备成供试品溶液，进行测定，结果以提取40 min提取完全且节能省时。不同提取时间柴胡皂苷a、柴胡皂苷b2的含量见表1。

表1 不同提取时间的柴胡皂苷a、b2含量 mg/mL

2.4 对照品溶液的制备

精密称取柴胡皂苷a、柴胡皂苷b2、对照品适量，分别加甲醇分别制成每1 mL含45 μg的溶液，作为对照品溶液。

2.5 供试品溶液的制备与测定

取本品大蜜丸5 g,水丸和浓缩丸2.5 g，精密称定，精密量取70%甲醇50 mL，称定重量，超声处理(功率250 w，频率33 kHz)40 min，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液25 mL,蒸干。残渣加水20 mL，微热使溶解，转移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取4次，20 mL/次，合并正丁醇液，继用1%氢氧化钠溶液洗涤2次，20 mL/次，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，20 mL/次，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇使溶解并定溶至5 mL量瓶中，摇匀，滤过，即得。

测定法[2]分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，即得。(见图1～2)

图1 对照品Fig1 Reference Substance

图2 供试品Fig2 Sample Substance

2.6 阴性试验(空白试验)

取阴性样品，按照同供试品方法制成阴性对照溶液并进行测定。结果在柴胡皂苷a、柴胡皂苷b2峰相应保留时间处无吸收峰，阴性无干扰(见图3)。

图3 阴性样品Fig3 Negative

2.7 线性关系考察

取柴胡皂苷a对照品(0.045 5 mg/ mL)、柴胡皂苷b2对照品(0.046 7 mg/ mL),分别进样5、10、15、20、30、40 μL,分别测得其峰面积。以其进样量为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。计算回归方程：柴胡皂苷aY=3×10-6X+0.004 801,在0.227 5～1.820 0 μg呈良好的线性关系(r=0.999)(见表2)；柴胡皂苷b2Y=4×10-6X+0.010 024,在0.233 5～1.86 80 μg呈良好的线性关系(r=0.999)。见表3。