辽南地区鸡源性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

刘立英

（辽宁农业职业技术学院，辽宁营口 115009）

辽南地区鸡源性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

刘立英

（辽宁农业职业技术学院，辽宁营口 115009）

为了解辽南地区鸡源大肠杆菌的耐药情况，对辽南地区5个养殖场（户）送检的40例疑似大肠杆菌病、死鸡中分离出36株细菌，经生化试验鉴定出32株属于大肠杆菌。对已鉴定32株大肠杆菌对19种药物进行药敏试验，结果显示除头孢他啶、硫酸粘菌素外，大肠杆菌对其他17种药物均产生不同程度耐药。对阿莫西林的耐药率最高，达68.75%；其次是红霉素，达62.50%；再次是庆大霉素、恩诺沙星、诺氟沙星、盐酸环丙沙星、盐酸林可霉素，分别是53.13%、40.63%、40.63%、37.50%、31.25%。对头孢噻呋、硫酸阿米卡星、替米考星、左氧氟沙星、多西环素、硫酸新霉素相对较为敏感。

辽南地区；鸡大肠杆菌；分离鉴定；药敏试验

鸡大肠杆菌病是由大肠埃希氏杆菌（Escherichiacoli，E.coli）引起的，一年四季均可发病，发病率约为10%～69%，死亡率约为31.8%～72%。临床主要表现为败血症、气囊炎、腹膜炎、输卵管炎、滑膜炎和眼炎等。随着养禽业集约化，饲养规模不断扩大以及临床有些从业人员对抗菌药物的滥用，导致大肠杆菌病成为养鸡业比较难控制的细菌性疾病之一，大量耐药菌株的出现，不仅对养鸡业造成巨大的经济损失，同时也危及人类健康[1]。

本试验对辽南地区5个养殖场（户）送检的40例疑似病、死鸡中分离出36株细菌，经过生化试验鉴定出32株属于大肠杆菌，通过药敏试验，以期了解辽南地区鸡源大肠杆菌耐药情况，从而为该地区大肠杆菌病的防治提供科学依据，并且为今后研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料2016年大连瓦房店地区、普兰店地区及营口地区5个养殖场（户）送检到辽宁农业职业技术学院动物健康养殖与评价中心的病、死鸡。

1.1.2 主要试剂及培养基牛肉膏、蛋白胨、麦康凯琼脂购自北京奥博星生物技术有限责任公司；糖发酵管等均购于广东省环凯微生物科技公司；革兰氏染色液按有关资料自行配制。阿莫西林、庆大霉素、硫酸阿米卡星、多西环素、盐酸环丙沙星、左氧氟沙星、诺氟沙星、头孢曲松钠、头孢他啶、头孢噻呋、替米考星、硫酸新霉素、盐酸林可霉素、氟苯尼考、恩诺沙星、硫酸粘菌素、克林霉素、红霉素、克拉霉素等原粉均有沈阳华飞药业有限公司提供。

1.1.3 药敏纸片试验所用的19种药物药敏纸片为自制，参照陈玉萍的方法[3]。

1.2 方法

1.2.1 大肠杆菌的分离培养无菌采取典型病、死鸡的心血、肝脏、气囊、关节的渗出物、脐炎的卵黄物质、输卵管炎和腹膜炎的干酪样物等作为病料，划线接种于麦康凯培养基平板上，37℃培养24 h。然后挑取平板上粉红色单个典型菌落，经革兰氏染色、镜检，观察到革兰氏阴性短杆菌后，在麦康凯平板上再次划线分离培养，以获得大肠杆菌典型菌落，2～8℃保存备用，如长期保存时，可纯培养后，贮存于-60℃[3]。

1.2.2 生化试验取上述大肠杆菌典型菌落接种于普通肉汤中，于37℃培养24 h，对所分离株进行糖发酵、VP、MR、硫化氢、吲哚等试验，并观察结果[3]。

1.2.3 药敏试验（纸片法）参照K-B法，无菌操作将已经鉴定为鸡大肠杆菌的培养物，均匀涂布在普通琼脂培养基表面，将阿莫西林、庆大霉素、硫酸阿米卡星、多西环素、盐酸环丙沙星、左氧氟沙星、诺氟沙星、头孢曲松钠、头孢他啶、头孢噻呋、替米考星、硫酸新霉素、盐酸林可霉素、氟苯尼考、恩诺沙星、硫酸粘菌素、克林霉素、红霉素、克拉霉素药敏纸片贴到琼脂培养基表面，37℃培养24 h后，测量抑菌圈直径[4]。

2 结果与分析

2.1 细菌分离鉴定

此次对辽南地区5个养殖场（户）送检的40例疑似病、死鸡中分离出36株细菌，经过生化试验鉴定出32株属于大肠杆菌。在麦康凯培养基上长出边缘整齐隆起、表面光滑湿润的红色圆形菌落，革兰氏染色为阴性，镜检为红色、两端钝圆的短杆菌，多单个散在，无芽孢，符合大肠杆菌的形态特征。

2.2 生化试验结果

将分离的32株大肠杆菌进行生化试验鉴定，分解葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、产酸产气，部分菌株分解蔗糖。VP试验为阴性、MR试验为阳性、硫化氢试验阴性、吲哚试验阳性。结果见表1。

表1 32株分离大肠杆菌生化试验结果

表1 32株分离大肠杆菌生化试验结果（续表）

2.3 药敏试验结果

参照NCCLS标准判定，抑菌圈直径15.1～20mm者为高度敏感，直径10.1～15 mm者为中度敏感，直径在10 mm以下者为低度敏感，直径为0者判定为耐药[6]。32株已鉴定大肠杆菌对19种抗菌药物进行敏感性检测，结果显示除头孢他啶、硫酸粘菌素所分离大肠杆菌对所检测的抗菌药均产生不同程度耐药性。对阿莫西林、庆大霉素、恩诺沙星、诺氟沙星、红霉素的耐药率较高，对硫酸阿米卡星、头孢噻呋、替米考星、多西环素的耐药率较低（见表2、表3）。

3 讨论

本试验共计分离出36株细菌，经过生化试验鉴定出32株属于大肠杆菌，32株已鉴定大肠杆菌对19种抗菌药物的药敏试验，结果显示除头孢他啶、硫酸粘菌素外，大肠杆菌对其他17种药物均产生不同程度耐药。本地区大肠肠菌对阿莫西林的耐药率最高，达68.75%；其次是红霉素，达62.50%；再次是庆大霉素、恩诺沙星、诺氟沙星、盐酸环丙沙星、盐酸林可霉素，分别是53.13%、40.63%、40.63%、37.50%、31.25%。该地区大肠杆菌对头孢他啶、硫酸粘菌素尚无耐药性产生，对头孢噻呋、硫酸阿米卡星、替米考星、左氧氟沙星、多西环素、硫酸新霉素相对较为敏感，在治疗禽大肠杆菌病时可以选择上述敏感药物。

本试验中还发现有部分菌株对多种药物均具有耐药性，与前几年相比较，耐药谱不断扩大，呈多重耐药趋势。根据笔者调查了解分析，导致耐药现象日趋严重及多重耐药趋势加重主要原因如下：临床不合理用药，用药种类繁多，用药情况复杂，从业人员专业素质参差不齐等[5-6]。控制大肠杆菌耐药性的产生首先要注重改善饲养管理环境，减少大肠杆菌发病率。养殖过程中一旦发病，正确诊断，合理选择抗菌药物，制定科学合理的给药方案，有针对性的选择高度敏感药物，明确给药剂量、给药途径及合理的给药疗程，才能达到理想治疗效果，从而减少抗药性的产生。此外，加强兽用抗菌药物监督管理、加强完善抗菌药物应用和细菌耐药监测体系、加强养殖业与兽医从业人员教育也是控制细菌耐药性产生的主要措施，同时也是2016年中央14部门联合发布《遏制细菌耐药国家行动计划》的主要举措。

表2 32株分离大肠杆菌对19种药物药敏试验

表2 32株分离大肠杆菌对19种药物药敏试验（续表）

表3 分离鸡源大肠杆菌的药敏试验分析

[1]王海涛，李全宏.鸡大肠杆菌病的防治[J].山东畜牧兽医，2013，195（4）:35-36.

[2]陈玉萍.抗菌药物的药敏试验方法[J].畜牧兽医科技信息，2007（4）:88-89.

[3]陆承平.兽医微生物学[M].北京中国农业出版社，2006：111-113.

[4]徐叔云等.药理实验方法学[M].北京：人民卫生出版社，2002.

[5]刘玉涛.福建省鸡源大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验[J].中国农学通报，2014，30（2）:65-68.

[6]王影，李欣南.大肠杆菌耐药性产生与传播机制研究现状[J].现代畜牧兽医，2016，（1）:32-36.

Isolation,Identification and Antimicrobial Susceptibility Test of Chicken Colibacillosis in Southern Liaoning Province

LIU LiYing
（LiaoningAgricultural Technical College,Yingkou 115009,China）

In order to understand the resistance of Escherichia coli isolated from Laying hens in southern Liaoning,40 cases of suspected E.coli disease were collected from five farms in southern Liaoning,and 36 strains of bacteria were isolated from dead Laying hens.32 Escherichia coli were isolated and identified by biochemical test.By the means of antimicrobial susceptibility test on 32 Escherichia coli those were identified,the results showed that Escherichia coli produced resistance to 17 drugs in varying degrees apart from Ceftazidime and Colistin sulfate.Resistance to amoxicillin was the highest,reaching to 68.75%;followed by erythromycin,up to 62.50%;resistance to Again Gentam icin,Enrofloxacin,Norfloxacin,Ciprofloxacin Hy drochloride,lincomycin hydrochloride,were respectively 53.13%,40.63%,40.63%,37.50%and31.25%.Escherichia coli was relatively sensitive to Cefotaxime,Amikacin sulfate, Tilmicosin,Levofloxacin,Doxycycline and Neomycin sulfate.

Escherichia coli;separation and identification;antimicrobial susceptibilitytest

S855.3

A

1671－0517（2017）02－0001－04

2017－01－10

刘立英（1982-），女，讲师，硕士。吉林省九台人，从事动物药理与毒理学教学与研究。