染色法、盐水法及五联检法在阴道分泌物检测中的对比分析

董林芳

（北京市羊坊店医院妇科，北京 100102）

临床采用阴道分泌物常规检测（俗称白带常规）判断女性生殖道健康，其中染色法和盐水法是白带常规检测常用的方法，然而这两种方法对检查人员的经验要求高，影响因素多，不易标准化且效率低[1]。近年来，五联检法在阴道分泌物检测中的作用受到越来越广泛的重视，该方法简单便捷，无需染色和显微观察，易于临床推广。为了探讨五联检法的准确性，本研究将其与染色法和盐水法进行了比较，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年6月～2016年12月于我院妇科门诊就诊，且因病情需要选择进行阴道分泌物检测的338例患者作为研究对象，平均年龄（37.71±12.42）岁。纳入标准：①有白带增多，阴部瘙痒，白带有异味，尿频尿急等症状的患者；②年龄15～60岁。排除标准：在经期、绝经期、阴道用药后及性生活后采集标本的患者。本研究已经伦理委员会批准，且所有患者家属均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 由我院妇科医生采集，采用无菌专用棉拭子取患者阴道、宫颈及后穹隆处提取分泌物，将采集后的棉拭子放入试剂盒配套的洁净无菌加样试管中。将同一份标本分成3分后立即送检，分别用染色法、盐水法及五联检法进行检测。

1.2.2 染色法 用灭菌后的接种环从培养液中取一环标本，均匀涂抹在载玻片上，用酒精灯微微加热使其迅速干燥，待冷却用结晶紫、碘液、沙黄及脱色液进行染色，染色成功后用显微镜进行观察。

1.2.3 盐水法 将标本直接涂抹在载玻片上，滴入2滴浓度为0.9%的生理盐水，混合均匀后用显微镜观察。

1.2.4 五联检法 严格按照试剂盒说明书进行操作，将稀释的阴道分泌物分别滴1滴至检测板反应孔中，再在唾液酸反应孔中滴加唾液酸酶显色液，将反应板置于37℃恒温箱15 min后取出，在乙酰胺基葡萄糖苷酶孔中滴加终止液，观察并记录结果。

1.3 判定标准

①染色法、盐水法：乳酸杆菌以每高倍镜下视野革兰阳性长杆菌≥6个为阳性；念珠菌以高倍镜下看到孢子和菌丝为阳性；白细胞以每高倍视野白细胞≥15个为阳性；滴虫以显微镜下看到滴虫为阳性；细菌性阴道病（BV）以显微镜发现线索细胞≥20%为阳性。②五联检法：乳酸杆菌以过氧化氢不显色或显淡黄色为异常；白细胞以白细胞酯酶显蓝色为异常；BV以生唾液酸苷酶显红色或紫红色，脯氨酸氨基肽酶显黄色为异常；念珠菌和滴虫以乙酰胺基酶为指标，显黄色为异常，若pH≥4.8，表明滴虫感染；若pH≤4.6，则为念珠菌感染。③清洁度：染色法、盐水法清洁度按照《全国临床检验操作规程》进行划分，五联检法按各指标提示进行综合划分，共I-IV度。

1.4 统计学方法

采用SPSS 19.0统计学软件进行分析。计量资料采用“±s”表示，计数资料采用x2检验，采用t 检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各种方法诊断清洁度检测结果比较

3种方法对阴道分泌物清洁度异常率的诊断，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 各种方法诊断清洁度检测结果比较

2.2 各种方法病原微生物检出率比较

染色法及五联检法对念珠菌的检出率显著高于盐水法，差异有统计学意义（P＜0.05），五联检法对BV的检出率显著高于染色法及盐水法，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 各种方法病原微生物检出率比较 [n（%）]

3 讨 论

阴道炎是妇女的一种常见疾病，主要由阴道黏膜及黏膜下结缔组织发生炎症引起，患者多伴外阴瘙痒、阴道分泌物增多等症状，对患者的生活和工作造成一定困扰[2]。传统的染色法和盐水法为手工操作，人为影响因素较大，标准不易统一，检测耗时较长，因此急需新的检测方法提高检测效率。五联检法是将过氧化氢浓度、白细胞酯酶、唾液酸苷酶、脯氨酸氨基肽酶、乙酰氨基葡萄糖苷酶连同pH值一起做成联检卡，检测白带中乳酸杆菌、白细胞、BV、念珠菌、滴虫及清洁度的方法，具有简单方便，结果易判断等优点，在临床推广中具有重要意义[3]。

本研究显示，将染色法和盐水法进行比较时，盐水法对念珠菌的检出率较低，原因为盐水法在实际操作过程中经常会出现阴道上皮细胞核及细胞膜卷曲、有形成分重叠等现象，从而使盐水对念珠菌的检出率偏低，而染色法检测将真菌的芽生孢子和假菌丝进行染色，使真菌的典型形态更加突出，提高了念珠菌的检出率[4]。

本研究中，五联检法对清洁度诊断与盐水法及染色法保持较好的一致性，对滴虫、乳酸杆菌、白细胞的检出率较高，与盐水法及染色法比较，差异无统计学意义（P＞0.05），对BV的检出率高于盐水法及染色法，对念珠菌的检出率高于盐水法。原因为过氧化氢主要由乳酸杆菌产生，因此通过检测过氧化氢含量指示乳酸杆菌的含量可保持较高的灵敏度和特异度；白细胞多为中性粒细胞，这类细胞中含白细胞酯酶，白细胞被细菌分解时，白细胞酯酶将被释放出来，因此检测白细胞酯酶含量可间接反应白细胞含量，还能避免白细胞破碎导致的漏检；BV中的各种细菌有的会产生唾液酸苷酶，有的会产生脯氨酸氨基肽酶，五联检法综合利用了这两种酶，克服了单一酶检测带来的灵敏度缺陷；念珠菌和滴虫均具有乙酰氨基葡萄糖苷酶，但感染念珠菌时pH≤4.6，感染滴虫时pH≥4.8，因此可以根据乙酰氨基葡萄糖苷酶和pH值联合判断[5]，而滴虫在传统显微镜下观察较为明显，因此检出率稍高于五联检法[6]。

综上所述，五联检法在阴道分泌物检测中具有直接、简单、快速的特点，便于临床妇科普查，值得临床推广应用。

参考文献

[1] 姜昌丽,李翠娟,李雪梅,等.阴道分泌物五联检法与显微镜检测法的对比分析[J].检验医学与临床,2017,14(6)：823-824.

[2] 施新颜,卢红梅,沈涌海,等.阴道感染疾病1463例实验室检测分析[J].全科医学临床与教育,2015,13(03)：312-313.

[3] 徐 健,谢元宏,周 广,等.5186例阴道分泌物五联检检测结果的回顾性分析[J].四川解剖学杂志,2014,22(1)：18-20.

[4] 潘秀芳,黎 滨,卓 芬.妇科阴道分泌物不同涂片检验方法比较分析[J].中国实验诊断学,2015,19(08)：1371-1373.

[5] 杨 杰,张连胜,郭瑞静.阴道分泌物显微镜镜检法与阴道炎五联检测法的方法学比较分析[J].中国医学创新,2013,10(02)：113-114.

[6] 阮 君,陆静芬.临床阴道分泌物检测方法的比较[J].中国伤残医学,2014,22(01)：14-16.