卵巢癌组织中DLL4及CD105的表达及临床意义

顾沛玲陈爱平* 孙金霞

（1 青岛大学医学院研究生部，山东 青岛 266003；2 临沂市中心医院，山东 临沂 276400）

卵巢癌组织中DLL4及CD105的表达及临床意义

顾沛玲1,2陈爱平1* 孙金霞2

（1 青岛大学医学院研究生部，山东 青岛 266003；2 临沂市中心医院，山东 临沂 276400）

目的 检测Notch-Delta样配体（DLL4）及CD105在卵巢癌中的表达及相关性，并分析其与临床病理参数的关系。方法 本实验应用免疫组化，采用S-P法，选取临沂市中心医院2015年1月至2016年8月来自手术中切除的卵巢癌标本65例，用卵巢正常组织18例作对比，测定DLL4的表达及CD105标记的微血管密度（CD105-MVD）。结果 DLL4及CD105在卵巢癌组织中的表达明显高于正常卵巢组织（P＜0.001）。在卵巢癌中，DLL4的阳性表达及CD105-MVD与卵巢癌的临床分期、病理分级、是否伴有淋巴结转移有相关性（P＜0.001），而与患者年龄、组织学类型无相关性（P＞0.05），且在卵巢癌中，DLL4的阳性表达与CD105-MVD呈正相关。结论 DLL4在肿瘤新生血管中起重要作用，并与卵巢癌的转移、浸润相关。DLL4和CD105联合检测可作为判断卵巢癌侵袭转移和预后的重要指标，并为抗血管治疗提供依据。

卵巢癌；DLL4；CD105；微血管密度

卵巢癌病死率位居妇科恶性肿瘤的首位，卵巢位于盆腔深部，一般体检不容易发现异常，加之卵巢癌的早期症状不典型，且没有有效的早期诊断方法，所以确诊卵巢癌时70%的患者为晚期[1]，故提高治疗效果是延长生存时间的关键。卵巢癌5年生存率徘徊在20.0%～36.1%，大部分晚期卵巢癌患者死于肿瘤复发。然而卵巢癌的发病机制至今不清楚，研究显示，恶性肿瘤的生长总是伴随其周围血管的发生与发展，用来供给所需营养成分，血管生长越活跃，肿瘤的侵袭性就越强[2]。Ueda等[3]提出，卵巢上皮癌预后差，新生血管密集是一个不可忽视的重要因素，因为其血管生成程度直接影响到临床进展。目前研究的抗新生血管治疗的主要目标是受体，临床证实有一定的疗效[4]。但近几年来发现，受体治疗出现了耐药现象[5]，所以，探索新的治疗方法已是卵巢癌患者延长生存时间的急切需求。多项研究发现：DLL4（与Notch受体相对应的配体蛋白：Notch-Delta样配体）参与了肿瘤血管的发展[6-7]。根据在肿瘤血管中DLL4所起的作用，将为抗血管治疗提供新的靶点。CD105参与了新生毛细血管的形成，是目前有效的毛细血管标志物[8]。CD105独立表达于肿瘤细胞本身，因此它可以成功标记卵巢癌新生血管。CD105标注的MVD能体现卵巢癌组织中血管的增殖程度，从而能反映出卵巢癌的生物效应。此实验应用DLL4单克隆抗体和CD105单克隆抗体监测卵巢癌组织中DLL4和CD105-MVD的表达，并分析这两个因子的关系及讨论它们在卵巢癌中的意义。

1 材料与方法

1.1 一般资料：选临沂市中心医院妇科2015年1月至2016年8月经手术切除的卵巢癌组织标本65例，术前均未经过任何治疗，患者年龄29～73岁，平均年龄51岁。选择同时间段手术切除的18例正常卵巢组织（因子宫肌瘤或子宫腺肌症等行全子宫+双附件切除，且卵巢无病变），该组患者的年龄43～65岁，平均年龄54岁。所有患者的病历资料完整，并且附有经2名病理医师诊断的病理结果。

1.2 实验材料：实验所需要的材料：在上海基因科技有限公司购买的CD105和DLL4兔抗。标本处理：对选取的每张蜡片重新切4张，每张切片厚4 μm。。

1.3 方法

1.3.1 染色方法：应用免疫组织化学中S-P法，染色所有选取的标本，并进行血管标记。

1.3.2 结果判断：DLL4阳性表达定位于细胞核，以在细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性信号，计算每张切片的阳性细胞与总细胞的百分比，计算其平均值，若阳性细胞数＜10%，则为阴性，阳性细胞数≥10%，记为阳性；计算MVD的方法参照Weidner等[9]报道，开始先用低倍镜（×40）观察整个切片，找出肿瘤内最高血管密度区，也就是常说的热点处，然后应用×200高倍镜观察看热点处的切片，每一个棕色染色的、并且和周围的肿瘤细胞和结缔组织成分差别很大的内皮细胞（或内皮细胞簇）就可记为一个血管计数；只要是不相连的结构，它们的分支也算为一个血管计数；只要肌层较厚、或管腔直径＞8个红细胞大小都不应计数。该患者的MVD值就是计算3个视野内的MVD。

1.4 统计学处理：应用SPSS19.0软件对本实验数据结果进行分析。用χ2检验分析计数资料的组间比较，t检验分析定量资料的均数的两组间比较，单因素方差分析多组间比较。两个变量的相关分析使用Pearson相关分析。检验水平以P＜0.05为有明显的差异性。

2 结 果

2.1 卵巢癌与正常卵巢组织中DLL4的表达：通过本实验得知：DLL4在卵巢中表达阳性，并广泛定位于细胞核，染色呈棕黄色细颗粒（图1）。DLL4在正常卵巢组织中基本无表达或低表达。65例卵巢癌患者中DLL4表达阳性的有51例，表达阴性的有14例，DLL4的阳性表达率在卵巢癌患者中为78.5%，18例正常卵巢组织中DLL4表达阳性者仅2例，表达阴性的有16例，DLL4在正常卵巢组织中的阳性表达率为11.1%，二者相比有统计学意义（χ2＝27.704，P＜0.001），见表1和图1。

表1 卵巢癌及正常卵巢组织中DLL4的表达

图1 卵巢癌中DLL4的表达

2.2 卵巢癌中，DLL4的表达情况与患者临床、病理之间的关系：卵巢癌中，DLL4的表达情况与临床的分期、卵巢癌的分化程度、淋巴结有无转移有相关（P＜0.01），但和患者组织学类型、年龄无相关（P＞0.05），见表2。

2.3 卵巢癌、正常卵巢组织中CD105-MVD的表达：试验得知：CD105在卵巢癌组织的表达为阳性（图2），在正常卵巢组织中基本无表达或低表达。CD105-MVD在卵巢癌患者为（22.58±7.34）、在正常卵巢中是（0.87±0.19），二者比较有统计学意义（P＜0.001），见表3，所以得出CD105在卵巢癌组织中明显高于正常卵巢组织。

2.4 卵巢癌中，CD105-MVD与患者的临床、病理之间的关系分析：CD105的阳性表达与卵巢癌的分化程度、有无淋巴结转移、临床分期有相关性（P＜0.05），和织学类型、年龄无相关性（P＞0.05），见表4。

表2 DLL4的表达水平与患者临床、病理之间的关系

图2 CD105在卵巢癌组织的表达

表3 CD105-MVD在卵巢癌及正常卵巢组织中的表达

表4 卵巢癌中CD105-MVD的表达水平与患者临床、病理指标之间的关系

2.5 卵巢癌组织中DLL4和CD105表达的关系：结果显示：二因子在卵巢癌的表达是呈正相关的（r2＝0.813，P＜0.001），见表5。

表5 卵巢癌组织中DLL4和CD105表达的关系

3 讨 论

肿瘤的成长和生存必须依赖肿瘤血管发生的过程来持续长出新血管提供氧气和营养以支持正在成长的肿瘤块[10]。20世纪70年代以后，相关科研人员努力研究肿瘤进展过程中血管产生的作用与机制，近年来的研究表明，Notch-Delta样配体（DLL4）参与对血管生长及调控，与恶性肿瘤的发生、发展、侵袭和转移有关。有研究人员分别在膀胱癌[11]、肾癌[12]等肿瘤组织的血管中发现DLL4的高水平表达，并和患者预后差有显著相关性。在人类乳腺癌中，Jubb[13]等发现在73%乳腺癌组织中DLL4高表达，而且这些患者的复发率表现出上升趋势、5年生存率却逐渐下降。李慧珍等[14]采用免疫组化对卵巢癌、卵巢良性肿瘤组织和正常卵巢组织中Notch的表达水平进行探索，结果显示在卵巢癌中Notch呈现高水平表达，得出Notch的表达水平与卵巢癌的病理学分级、淋巴结转移有相关性，但与患者年龄、组织学类型无相关性。HU等[15]研究发现，在卵巢癌和卵巢癌内皮细胞中DLL4起着不可估量的作用，由此可知DLL4可为评估卵巢癌患者生存率的相对独立因子。Ridgway[16]等研究发现，阻断DLL4-Notch信号通路可导致导致肿瘤组织生成大量没有功能的新生血管，这种没有功能的新生血管可抑制和延缓肿瘤细胞的生长，致使肿瘤组织缺血从而抑制其生长。所以DLL4-Notch信号通路有可能成为肿瘤血管发生的新靶点，有望为肿瘤治疗提供新的方向。本实验结果提示DLL4可促进卵巢癌的发生、转移，其高表达则预后差。

肿瘤组织中血管的内皮细胞增生比正常组织高出20～2000倍，它产生的新生血管是肿瘤发生、发展的的基础[17]。通过测定肿瘤血管的MVD来判断血管的数量[18]，Sand等[19]研究证实，和vWF、CD34比较，CD105作为肿瘤血管标志物可以更准确地作为预测肿瘤患者的预后。所以CD105是测量肿瘤微血管密度的金标准[20]。在新生血管的内皮细胞上CD105表现高水平表达，是血管内皮细胞的增生重要标志之一[21]，且CD105只在正增殖的新生血管内皮细胞上高表达，在正常组织的血管上不表达，这种独有的分布特点提示它可作为恶性肿瘤治疗的理想靶点。有试验研究表明，在黑色素瘤、肾细胞癌、卵巢癌，胃癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肺癌、乳腺癌，均检测出了CD105的表达，而且和肿瘤的临床分期、淋巴结有无转移等密切相关。本实验显示：在卵巢癌组织中，CD105-MVD明显高于正常卵巢组织，并且与卵巢癌的病理分级、是否伴淋巴结转移及临床分期有关。提示CD105可能成为预测卵巢癌发生、转移及判断其预后的有效的生物学指标。

根据Pearson相关分析结果，在卵巢癌组织中，DLL4和CD105的表达呈正相关，揭示DLL4和CD105在肿瘤血管的发生中有重要作用，将二者联合则可提高检测卵巢癌的准确度、且指导卵巢癌的发生、发展及预后，同时为卵巢癌的防治提供新的思路，并为辅助治疗提供依据。

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Expression and Clinical Significance of DLL4 and CD105in Ovarian Cancer Tissue

GU Pei-ling1,2, CHEN Ai-ping1, SUN Jin-xia2
(1 Department of Graduate, Medical College of Qingdao University, Qingdao 266003, China; 2 Linyi Central Hospital, Linyin 276400, China)

Objective To detect the expression and correlation of DLL4 and CD105in ovarian cancer, and analyze the relationship of clinical pathological parameters. Methods The expression of DLL4 and microvascular density marked by CD105(CD105-MVD) in samples of 65 ovarian carcinoma and 18 normal ovarian tissue colleted from surgical removal in linyi center hospital from January 2015 to August 2016 were detected by immunohistochemical methods of S-P. Results The expression of DLL4 and CD105in ovarian cancer tissue was significantly higher than that in normal ovarian tissue (P＜0.001). In ovarian cancer, the expression of DLL4 and CD105-MVD was positively associated with the clinical stage, pathological grade of ovarian cancer and lymph node metastasis (P＜0.001), but no correlation with patients age, histological type (P＞0.05), and in ovarian cancer, the expression of DLL4 positively correlates with CD105-MVD. Conclusion DLL4 plays an important role in tumor angiogenesis, and associated with the transfer, infiltration of ovarian cancer. The combined detection of DLL4 and CD105-MVD is an important indicator of judging the invasion and metastasis and prognosis of ovarian cancer, and provide the basis for the antiangiogenesis therapy.

Ovarian cancer; CD105; DLL4; Microvascular density

R737.31

B

1671-8194（2017）07-0010-03

*通讯作者：E-mail:chenaiping516@163.com