不同产地天麻多糖含量测定分析

黄先敏+凌敏+杨正贤+罗家刚+胡先会+祁岑

摘要 [目的]测定5个不同产地天麻中多糖的含量。[方法]采用回流醇沉法，提取5个天麻主产区天麻中的多糖，用蒽酮比色法测定其多糖的含量。[结果]云南昭通天麻的多糖含量最高，为25.04%；其次是陕西略阳天麻，为23.46%，四川汶川天麻为23.41%；含量较低的是贵州青龙天麻（20.67%）和湖北神龙架天麻（20.28%）。[结论]5个不同产地天麻多糖的含量差异极其显著。

关键词 天麻；多糖含量；回流；醇沉；蒽酮比色法

中图分类号 S567.23+9 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2017）06-0259-01

天麻为兰科植物天麻（Gastrodia eleta BL.）的干燥块茎[1]，是我国传统名贵中药之一，主产于四川、云南、贵州、湖北、陕西等地[2]。早期对天麻的研究主要集中在天麻素和天麻苷元等方面，对天麻多糖的研究报道不多[3]。近年来，研究发现植物多糖类化合物是一种免疫调节剂，能激活免疫细胞，促进抗体、补体的生成和干扰素的诱生[4]，增强机体免疫功能，并且对正常细胞无毒副作用，可用于治疗艾滋病和抗肿瘤、抗衰老等方面[5]。对天麻多糖的研究表明，天麻多糖具有清除自由基、降血压、增强免疫力、抗菌等药理作用[6]。本试验采用以水为溶剂回流、乙醇沉淀的方法提取不同产地天麻中的多糖，用蒽酮硫酸比色法对其样品溶液中的多糖含量进行测定分析，现将试验结果总结如下。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 天麻样品。5个不同产地的天麻样品由昭通神农乌天麻良种繁育有限公司提供。

1.1.2 试验仪器。YB-150型高速多功能粉粹机，永康市速锋工贸有限公司生产；CP214电子分析天平，奥豪斯仪器上海有限责任公司生产；Exceed-cb超纯水机，成都康宁实验专用纯水设备厂生产；HH-S26s数显恒温水浴锅，金坛市晶玻实验仪器厂生产；AK/GL-20B高速冷冻离心机，上海安亭科学仪器厂生产；BCD-252KSA冰箱，青岛海尔股份有限公司生产；101A-2E电热鼓风恒温箱，上海实验仪器有限公司生产；WFJ7200型可见分光光度计，尤尼柯上海仪器有限公司生产。

1.1.3 试验药品与试剂。葡萄糖对照品，国药集团化学试剂有限公司生产，批号：F20111208；蒽酮，上海润捷化学试剂有限公司生产；95%硫酸，汕头市达濠精细化学品有限公司生产，批号：XK13-201471-008-II。上述药品均为分析纯。95%乙醇，广西贵港市甘化酒精有限公司生产。

1.2 试验方法

1.2.1 蒽酮-硫酸溶液的配制。称取蒽酮0.1 g，加入95%浓硫酸溶解，定容至50 mL，配成0.2%蒽酮-硫酸溶液。

1.2.2 标准溶液配制。精确称量0.025 0 g烘至恒重的葡萄糖纯品，用蒸馏水溶解定容至250 mL，配成浓度为0.1 mg/mL的溶液。取溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mL，放入试管中，加水至1 mL，加入蒽酮-硫酸溶液3 mL，浸入冰水中，待所有试管加完，沸水浴15 min，管口加盖。取出放入冰水中5 min，在室温下10 min后，测其吸光度。

1.2.3 样品溶液制备。采用回流法对天麻中的多糖进行提取。精确称取1.0 g天麻粉，放入烧瓶中，再加入40倍体积的蒸馏水，80 ℃回流3 h。将溶液离心2 min，转速10 000 r/min。取上清液10 mL，加入95%乙醇160 mL，在4 ℃下放置12 h，使溶液中多糖沉淀。取出离心3 min，转速10 000 r/min，将沉淀物放入60 ℃的烘箱中烘干。将烘干的多糖用200 mL蒸馏水溶解，取0.2 mL溶液放入试管中，加1.8 mL水，再加入6 mL蒽酮-硫酸溶液，浸入冰水中，待所有试管加完后，沸水浴15 min。取出冰水浴5 min，然后在室温下放置10 min，测吸光度。

1.2.4 標准曲线制作。采用蒽酮硫酸比色法，在620 nm波长下测溶液的吸光度。以吸光度（A）为横坐标，浓度（C）（mg/mL）为纵坐标，绘制标准曲线。

1.2.5 精密度、稳定性和重复性试验。精密称取天麻粉1 g，按上述步骤制备溶液，测定其吸光度，连续测6次，对其结果进行分析。

1.2.6 样品溶液吸光度测定。参照对照品溶液，采用蒽酮比色法。在620 nm波长处测样品溶液的吸光度。

2 结果与分析

2.1 天麻样品中多糖含量的计算

5个不同产地的天麻样品每个样品做5次重复，根据其吸光度，计算样品中的多糖含量（表1）。结果表明：不同产地天麻样品中多糖含量有所差异，云南昭通天麻中多糖含量最高，为25.04%；其后依次是陕西略阳天麻（23.46%）、四川汶川天麻（23.41%）、贵州青龙天麻（20.67%）；含量最低的是湖北神农架天麻，其多糖含量为 20.28%。

2.2 不同产地天麻多糖含量多重比较

对不同产地天麻中多糖的含量进行多重比较，分析其差异显著性（表1）。可以看出，云南昭通天麻多糖含量与陕西略阳天麻、四川汶川天麻多糖含量之间不具有差异显著性，与贵州青龙天麻和湖北神农架天麻之间多糖含量的差异极显著（α=0.01）。

2.3 标准曲线

以吸光度（A）为横坐标，浓度（C）为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程C=0.100 4 A-0.001 1（R=0.999 5），结果表明葡萄糖在0～0.07 mg/mL范围内成良好的线性关系。

2.4 精密度、稳定性和重复性试验结果

经测定，RSD=0.553%（n=6），表明试验的重现性好，仪器的稳定性和精密度较高。

3 结论

为防止由于品种因素造成试验结果的准确性有所偏差，采用一种专利方法[7]对所提供的樣品进行鉴定，确定了品种的一致性。各地不同的环境因素造成天麻中多糖含量有所差异，云南昭通天麻中多糖含量最高，与其特殊的气候环境因素有关，低纬度高海拔、昼夜温差大使当地植物中糖分的含量相对于其他地区要高[8]。

本试验采用回流提取天麻多糖，时间3 h，温度80 ℃，料水比为40∶1。乙醇沉淀，提取液与乙醇的比为1∶16，时间12 h，温度4 ℃。测定吸光度时，蒽酮硫酸溶液和样品溶液比为3∶1，在60 min内完成溶液的测定。该试验方法简便可靠，重现性好。在试验过程中，蒽酮硫酸溶液加入到待测溶液中会产生大量热量，造成溶液提前反应，使结果准确性降低，将试管浸入冰水中，可有效解决此问题，保证试验结果的准确性和一致性。

4 参考文献

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京：中国医药科技出版社，2010：54-55.

[2] 王韬，仇权雷，杜艳仓，等.云南昭通天麻多糖含量测定[J].西南林业大学学报，2011，31（1）：31-33.

[3] 于雪，胡文忠，姜爱丽，等.天麻的活性成分及功能性研究进展[J].食品工业科技，2016，37（8）：392-395.

[4] 陈芳，杜娟，张秉华.天麻多糖的理化性质和药理活性研究[J].现代中医药，2009，29（6）：71-73.

[5] KOMATSU T，KIDO N，SUGIYAMA T，et al.AntiviraL activity of acidic poLysaccharides from Coccomyxa Loeobotrydiformi，a green aLga，against an in vitro human infLuenza A virus infection[J].Immunopharmacology and ImmunotoxicoLogy，2013，35（1）：1-7.

[6] 陈维红，罗栋.天麻素、天麻多糖药理作用研究进展[J].中国药物评价，2013，30（3）：132-134.

[7] 祁岑，罗家刚，程立君，等.快速鉴别乌天麻的方法及应用：中国，ZL 2014 10188457.X[P].2016-03-30.

[8] 黄敏，武绍波，迟焕彩.昭通苹果产业现状及发展对策[J].北方园艺，2012（12）：190-193.