乳腺癌术后局部复发患者癌组织中Survivin、MMP-9的表达变化及意义

艾秀清，董晓霞，张银华，木妮热·木沙江(新疆医科大学附属肿瘤医院，乌鲁木齐 830011))



乳腺癌术后局部复发患者癌组织中Survivin、MMP-9的表达变化及意义

艾秀清，董晓霞，张银华，木妮热·木沙江
(新疆医科大学附属肿瘤医院，乌鲁木齐 830011))

目的 观察乳腺癌术后局部复发患者癌组织中Survivin、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达变化，并探讨其意义。方法 收集乳腺癌经治疗后再次复发的患者73例组织标本，采用免疫组化SP法检测73例患者原发肿瘤组织及复发肿瘤组织中Survivin、MMP-9表达情况，并分析Survivin、MMP-9表达变化对患者生存情况的影响。结果 原发肿瘤组织中Survivin、MMP-9表达阳性率分别为72.60%(53/73)、69.86%(51/73)，复发肿瘤组织中Survivin、MMP-9表达阳性率分别为65.75%(48/73)、58.90%(43/73)，原发肿瘤组织与复发肿瘤组织Survivin及MMP-9表达阳性率比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。在原发性肿瘤与复发性肿瘤组织中Survivin表达均阳性31例(42.47%)、均阴性3例(4.11%)、从阳性转变为阴性22例(30.14%)、从阴性转变为阳性17例(23.29%)；在原发性肿瘤与复发性肿瘤组织中MMP-9表达均阳性26例(35.62%)、均阴性5例(6.86%)、从阳性转变为阴性25例(34.25%)、从阴性转变为阳性17例(23.29%)。复发肿瘤组织中Survivin表达阳性患者1年、3年、5年生存率分别为91.78%、89.04%、68.49%，Survivin表达阴性患者1年、3年、5年生存率分别为94.52%、90.41%、78.08%，Survivin表达阴性患者生存情况优于Survivin表达阳性患者(χ2=4.752，P<0.05)；复发肿瘤组织中MMP-9表达阳性患者1年、3年、5年生存率分别为94.52%、67.12%、52.05%，MMP-9表达阴性患者1年、3年、5年生存率分别为100.00%、89.04%、82.19%，MMP-9表达阴性患者生存情况优于MMP-9表达阳性患者(χ2=8.062，P<0.05)。结论 乳腺癌术后局部复发患者复发肿瘤组织中Survivin、MMP-9表达与原发肿瘤组织比较,阳性可转变为阴性，阴性可转变为阳性;复发肿瘤组织中Survivin、MMP-9表达阳性与患者的生存预后差相关。

乳腺癌；局部复发；Survivin蛋白；基质金属蛋白酶9

乳腺癌近年发病率呈逐年上升且年轻化趋势[1]。乳腺癌的发生发展是一个多基因参与的生理过程，其中凋亡抑制基因在乳腺癌发病中起重要作用，Survivin作为一种具有特殊结构的哺乳类凋亡抑制基因，与乳腺癌的发生发展密切相关[2]。而金属基质蛋白酶9(MMP-9)则与肿瘤的侵袭和转移密切相关[3]。目前针对乳腺癌Survivin、MMP-9表达的研究主要集中于与患者病理特征的比较，而关于乳腺癌术后局部复发患者瘤组织中Survivin、MMP-9表达的研究鲜见报道。本研究观察了73例乳腺癌术后局部复发患者瘤组织中Survivin、MMP-9的表达变化，并探讨其意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2009年4月～2011年4月新疆肿瘤医院收治的乳腺癌经治疗后再次复发的患者73例作为研究对象，年龄31～78(44.37±7.84)岁。均经病理检查确诊为乳腺癌，且病理学确认为乳腺癌局部复发，患者初诊时均采取了手术治疗方案；排除合并第二原发癌患者及临床资料不完整患者。原位肿瘤位于左侧40例、右侧33例；初诊时无淋巴结转移24例、出现淋巴结转移49例；TNM分期为Ⅰ期22例、Ⅱ期37例、Ⅲ期12例、Ⅳ期2例。患者自愿签署知情同意书，且标本采集符合医院伦理学相关规定。采用门诊随访或电话随访方式，从患者原发肿瘤手术时间开始计算患者的生存时间，以患者死亡作为随访终点，随访截止日期为2016年5月31日。随访包括乳腺B超、胸片及乳腺相关肿瘤抗原等，确定肿瘤进展情况及死亡时间。

1.2 瘤组织中Survivin、MMP-9表达检测 采用免疫组化SP法检测患者原发肿瘤组织及复发肿瘤组织中Survivin、MMP-9表达。肿瘤组织经石蜡包埋后常规连续切片，将切片经10%中性二甲苯脱蜡固定后常规脱水处理，经浸蜡、铺片、脱蜡后使用HE染色，然后加入Survivin或MMP-9单克隆抗体。采用DAB显色，使用PBS代替一抗作为阴性对照，使用已知的Survivin、MMP-9表达阳性的乳腺癌组织切片作为阳性对照。结果由我院病理科两名经验丰富的医师进行独立评估，随机选取5个视野，每个视野内计数100个细胞，采用双评分半定量分析法[4]，根据阳性细胞所占百分比及显色深浅进行双评分。Survivin、MMP-9免疫组化阳性产物定位于细胞质，呈棕黄褐色颗粒状。

1.3 统计学方法 采用SPSS22.0统计软件。计量资料比较采用t检验，计数资料比较采用χ2检验，Kaplan-Meier生存曲线进行生存分析，采用Log-rank检验患者生存率。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 复发肿瘤组织中Survivin、MMP-9的表达变化 原发肿瘤组织中Survivin、MMP-9表达阳性率分别为72.60%(53/73)、69.86%(51/73)，复发肿瘤组织中Survivin、MMP-9表达阳性率分别为65.75%(48/73)、58.90%(43/73)。原发肿瘤组织与复发肿瘤组织中Survivin及MMP-9表达阳性率比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。Survivin表达从原发性肿瘤组织阳性转变为复发性肿瘤组织阴性22例(30.14%)，从原发性肿瘤组织阴性转变为复发性肿瘤组织阳性17例(30.14%)；MMP-9表达从原发性肿瘤组织阳性转变为复发性肿瘤组织阴性25例(34.25%)，从原发性肿瘤组织阴性转变为复发性肿瘤组织阳性17例(23.29%)。

2.2 复发肿瘤组织中Survivin、MMP-9表达对患者生存的影响 复发肿瘤组织中Survivin表达阳性患者1年、3年、5年生存率分别为91.78%、89.04%、68.49%，Survivin表达阴性患者1年、3年、5年生存率分别为94.52%、90.41%、78.08%，Survivin表达阴性患者生存情况显著优于Survivin表达阳性患者(χ2=4.752，P<0.05)；复发肿瘤组织中MMP-9表达阳性患者1年、3年、5年生存率分别为94.52%、67.12%、52.05%，MMP-9表达阴性患者1年、3年、5年生存率分别为100.00%、89.04%、82.19%，MMP-9表达阴性患者生存情况显著优于MMP-9表达阳性患者(χ2=8.062，P<0.05)。

3 讨论

乳腺癌的发生发展是一个多基因参与、多步骤、多阶段的复杂病理过程，在此过程中，细胞凋亡起负调控作用，若细胞凋亡基因表达受到抑制，将导致细胞躲过程序性死亡而发生异常增殖，最终引起肿瘤发生[5,6]。Survivin作为目前发现最强的一种凋亡抑制因子，其不仅抑制细胞凋亡，同时亦参与到对细胞周期调控及新生血管形成过程中[7,8]。研究[9，10]显示，Survivin高表达能有效抑制细胞多途径p53、Casepase、Fas等诱导细胞凋亡，同时在调节细胞有丝分裂过程中发挥重要作用，如胞质的分裂、卵裂沟形成及微管的聚合，在肿瘤细胞中，过度的Survivin表达可促进肿瘤细胞跳过细胞周期G2/M期检查点，从而导致肿瘤细胞发生异常有丝分裂，促进肿瘤细胞增殖，从而使肿瘤细胞逃避凋亡。此外，有学者研究显示，Survivin与肿瘤血管的形成有密切联系，Survivin异常增高可促进VEGF所诱导的血管内皮细胞增殖及毛细血管网形成，丰富的血供可促进肿瘤细胞生长和转移[11]。肿瘤细胞在发生侵袭及转移过程中，必须破坏细胞外基质(ECM)，而在参与破坏ECM的酶类中基质金属蛋白酶类(MMPs)起主要作用，其中MMP-9与肿瘤的侵袭及转移最为密切[12]。MMP-9高表达能导致肿瘤细胞破坏ECM能力增强，从而促使患者发生早期淋巴结转移，因此MMP-9可作为乳腺癌恶性程度及预后判断的一个重要指标[13]。

本研究结果显示，原发肿瘤组织中Survivin、MMP-9表达阳性率分别为72.60%、69.86%，复发肿瘤组织中Survivin、MMP-9表达阳性率分别为65.75%、58.90%，原发肿瘤组织与复发肿瘤组织中Survivin及MMP-9表达阳性率比较差异均无统计学意义；而在上述患者中，其中一部分患者复发肿瘤组织中表达情况较原发肿瘤组织中发生了改变，在原发性肿瘤与复发性肿瘤组织中Survivin表达均阳性31例(42.47%)、均阴性3例(4.11%)、从阳性转变为阴性22例(30.14%)、从阴性转变为阳性17例(23.29%)；在原发性肿瘤与复发性肿瘤组织中MMP-9表达均阳性26例(35.62%)、均阴性5例(6.86%)、从阳性转变为阴性25例(34.25%)、从阴性转变为阳性17例(23.29%)。表明复发肿瘤组织与原发肿瘤组织Survivin、MMP-9表达并不是一成不变的。此外，本研究对比分析复发肿瘤组织中Survivin、MMP-9表达情况对患者生存的影响，结果显示，Survivin及MMP-9表达阴性患者生存情况优于Survivin表达阳性患者，差异有统计学意义。此与临床研究结果相似，可能是由于Survivin、MMP-9表达能从一定程度上反映患者肿瘤病情，从而与患者的生存预后密切相关。

综上所述，乳腺癌术后局部复发患者其复发肿瘤组织中Survivin、MMP-9表达与原发肿瘤组织比较,阳性可转变为阴性，阴性可转变为阳性；复发肿瘤组织中Survivin、MMP-9表达阳性与患者的生存预后差相关。

[1] 屈洪波,范原铭,韩明利,等.化疗后残存乳腺癌组织中乳腺癌耐药蛋白、P-糖蛋白的表达及其与癌干细胞的相关性[J].中国医学科学院学报,2013,35(2):171-176.

[2] Nestal de Moraes G, Delbue D, Silva KL, et al. FOXM1 targets XIAP and Survivin to modulate breast cancer survival and chemoresistance[J]. Cell Signal, 2015,27(12):2496-2505.

[3] 刘兆红,齐凤杰,赵树鹏,等.乳腺癌中ING4和MMP-9相关性及临床应用价值[J].医学与哲学,2016,37(4):77-79.

[4] 陈妍,王婧,徐旖旎,等.他莫昔芬对乳腺癌 MCF-7细胞侵袭能力、MMP-9活性和表达的影响及机制[J].山东医药,2016,56(26):6-9.

[5] Lin T, Wan L, Qi X, et al. A moderate static magnetic field enhances TRAIL-induced apoptosis by the inhibition of Cdc2 and subsequent downregulation of survivin in human breast carcinoma cells[J]. Bioelectromagnetics, 2014,35(5):337-346.

[6] 魏晓丽,张玉,刘敏丽,等.乳腺癌组织中Survivin、Ki-67的表达变化及意义[J].山东医药,2013,53(3):12-14.

[7] 邓晓慧,宋海岩,张东军,等.槲皮素对乳腺癌细胞增殖及Survivin表达的影响[J].中国医院药学杂志,2013,33(12):965-967.

[8] 马琳琳,褚为,王玉倩,等.Survivin和p53在乳腺癌中的表达及其临床意义[J].中华实验外科杂志,2014,31(12):2839-2840.

[9] 魏杨辉,张宗明,杨莉涛,等.Survivin、galectin-3、Ki-67在乳腺癌组织中的表达及其意义[J].山东医药,2013,53(36):14-16.

[10] 管海涛,代志军,马宇光,等.Survivin 与乳腺癌雌激素受体信号通路相关基因的相关性[J].现代肿瘤医学,2016,24(21):3377-3381.

[11] 艾秀清,张银华,司马义力·买买提尼亚孜,等.晚期乳腺癌患者 Survivin 的表达情况及与放疗敏感性的关系[J].中国实验诊断学,2015,19(6):912-915.

[12] 王丽霞,毛俊,陶雅军,等.乳腺癌干细胞亚群中MMP-9和BRMS1的表达及其临床病理意义[J].临床与实验病理学杂志,2013,29(5):472-476.

[13] 黄榕权,谢燕清,张雅洁,等.乳腺癌MMP-2、MMP-9的体外阻断研究[J].现代肿瘤医学,2014,22(5):1049-1053.

Expression and significance of survivin and MMP-9 in patients with local recurrence of breast cancer after operation

AIXiuqing,DONGXiaoxia,ZHANGYinhua,MunireMushajiang

(CancerHosptialofXinjiangMedicalUniversity,Urumqi830011,China)

Objective To observe the expression changes of survivin and matrix metalloproteinase 9 (MMP-9) in the cancer tissues of patients with local recurrence of breast cancer after surgery and to explore its significance. Methods Seventy-three cases of tissue specimens from patients with breast cancer recurrence after treatment were collected, and the expression of survivin and MMP-9 in the primary tumor tissues and recurrent tumor tissues were detected by immunohistochemical SP method. Furthermore, we analyzed the effects of survivin and MMP-9 expression changes on the survival condition of patients.Whether the changes of Survivin and MMP-9 expression can effect on survival was also analyzed. Results The positive expression rates of survivin and MMP-9 were 72.60% (53/73) and 69.86% (51/73), respectively in the primary tumor tissues, versus 65.75% (48/73) and 58.90% (43/73) in the recurrent tumor tissues. There was no statistically significant difference in the positive expression rates between them (bothP>0.05). In the primary and recurrent tumor tissues, survivin expression was both positive in 31 cases (42.47%), both negative in 3 cases (4.11%), 22 cases (30.14%) changed from positive to negative, and 17 cases (23.29%) changed from negative to positive. In the primary and recurrent tumor tissues, MMP-9 expression was both positive in 26 cases (35.62%), both negative in 5 cases (6.86%), 25 cases (34.25%) changed from positive to negative, and 17 cases (23.29%) changed from negative to positive. The one-, three-, and five-year survival rates were 91.78%, 89.04%, and 68.49%, respectively, in patients with survivin positive recurrent tumor tissues, versus 94.52%, 90.41%, and 78.08% in in patients with survivin negative recurrent tumor tissues.The survival condition of patients with survivin negative recurrent tumor tissues was better than that of patients with survivin positive (χ2=4.752,P<0.05). The one-, three-, and five-year survival rates were 94.52%, 67.12%, and 52.05%, respectively, in patients with MMP-9 positive recurrent tumor tissues, versus 100%, 89.04%, and 82.19% in patients with MMP-9 negative recurrent tumor tissues. The survival condition of patients with MMP-9 negative recurrent tumor tissues was better than that of patients with MMP-9 positive (χ2=8.062,P<0.05).Conclusions The expression of survivin and MMP-9 in primary and local recurrent tissues of patients with breast cancer can be transformed between positive and negative. The positive expression of survivin and MMP-9 in tumor tissues of recurrence could be correlated with the poor prognosis.

breast carcinoma; local recurrence; survivin protein; matrix metalloproteinase 9

新疆维吾尔自治区自然科学基金联合基金资助项目(2016D01C346)。

艾秀清(1975-)，女，副主任医师，主要研究方向为乳腺癌放射治疗。E-mail：maojiayue11@163．com

木妮热.木沙江(1962-)，女，主任医师，博士生导师，主要研究方向为乳腺癌放射治疗。E-mail：muni6@163．com

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.25.006

R737.9

A

1002-266X(2017)25-0020-03

2017-02-10)